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基于短小芽孢杆菌转录组的强启动子鉴定
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作者 姚动邦 张康 +1 位作者 朱昫飏 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第18期15-22,共8页
短小芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)是一种潜在的高效表达系统,但由于高效强启动子的缺乏严重限制了该表达系统的应用。该研究的主要目的是为B.choshinensis表达系统提供更多新高效强启动子。在该研究中,首先通过转录组测序技术... 短小芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)是一种潜在的高效表达系统,但由于高效强启动子的缺乏严重限制了该表达系统的应用。该研究的主要目的是为B.choshinensis表达系统提供更多新高效强启动子。在该研究中,首先通过转录组测序技术获得B.choshinensis的转录组数据。然后基于基因的转录水平及功能,筛选高表达目的基因。基于筛选到的目的基因的启动子序列,以α-淀粉酶为报告蛋白构建了强启动子筛选文库。将含有不同启动子的重组菌摇瓶发酵后,以胞外α-淀粉酶活性为筛选指标,获得了内源性强启动子PE和PF,对应的重组菌BCWES和BCWFS胞外α-淀粉酶活性分别是常用的强启动子P2介导的对照菌BCWPS胞外α-淀粉酶活性的2.3和1.3倍。最后以蔗糖异构酶和角质酶为新的报告蛋白证明了PE启动子具有通用性,且经3 L罐发酵进一步验证了重组菌BCWES高分泌生产α-淀粉酶的能力。该研究丰富了可用于B.choshinensis表达系统的强启动子数量,促进了B.choshinensis作为一种新高效表达系统的开发与应用。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 Α-淀粉酶 RNA测序 启动子 3 L罐发酵
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1株产顺式-4-羟基-L-脯氨酸基因工程菌的构建及发酵初步优化 被引量:1
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作者 王付才 张震宇 +2 位作者 孙付保 姚动邦 周杨 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期7-12,共6页
顺式-4-羟基-L-脯氨酸是一种可用于合成多种药物和香料的手性结构物质。通过对L-脯氨酸顺式-4-羟化酶基因的优化设计,并引入色氨酸串联启动子,构建出1株能表达L-脯氨酸顺式-4-羟化酶的重组大肠杆菌JM109/p EHC4,从而可以将游离的L-脯氨... 顺式-4-羟基-L-脯氨酸是一种可用于合成多种药物和香料的手性结构物质。通过对L-脯氨酸顺式-4-羟化酶基因的优化设计,并引入色氨酸串联启动子,构建出1株能表达L-脯氨酸顺式-4-羟化酶的重组大肠杆菌JM109/p EHC4,从而可以将游离的L-脯氨酸转化为顺式-4-羟基-L-脯氨酸。对该菌株进行摇瓶发酵优化,得出优选培养基为(g/L):葡萄糖10,甘油10,蛋白胨10,NaCl 6,FeSO_4·7H_2O 0.278,L-抗坏血酸0.528,(NH_4)_2SO_45,K_2HPO41,MgSO_40.2,CaCl_20.015,L-脯氨酸4。在该条件下发酵12 h,顺式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到657.08mg/L,比优化前提高了3.76倍;在24 h时产量达到1 582.75 mg/L。研究结果为顺式-4-羟基-L-脯氨酸的微生物转化法生产提供了基础。 展开更多
关键词 L-脯氨酸顺式-4-羟化酶 密码子优化 重组大肠杆菌 微生物转化 发酵优化
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