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我国兽用麻醉药品和兽用精神药品监管政策的变化与思考
1
作者 陆连寿 冯华兵 +3 位作者 梁先明 姚丽娟 汪霞 卢旺 《中国兽药杂志》 2025年第1期1-10,共10页
随着我国畜牧兽医行业的快速发展,兽用麻醉药品和兽用精神药品的市场需求不断增长,但由于其药理作用的特殊性,需受到政策和制度的严格管控。为进一步明确监管策略,加强兽用麻醉药品和精神药品的管理,防止发生流弊风险,我国农业农村部和... 随着我国畜牧兽医行业的快速发展,兽用麻醉药品和兽用精神药品的市场需求不断增长,但由于其药理作用的特殊性,需受到政策和制度的严格管控。为进一步明确监管策略,加强兽用麻醉药品和精神药品的管理,防止发生流弊风险,我国农业农村部和公安部联合发布第800号公告。本文详细阐述了公告的历史背景、主要特点和发布意义,并提出我国兽用麻醉药品和兽用精神药品的管理思路和建议,旨在为兽用麻醉药品和兽用精神药品合法、安全和合理使用提供指导和帮助。 展开更多
关键词 兽用麻醉药品 兽用精神药品 毒品 监管政策
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河道浆砌石挡墙安全排查检测方法
2
作者 姚丽娟 《水利技术监督》 2025年第6期15-17,53,共4页
文章针对观澜河的安全排查检测进行了概述,明确了检测的目的、范围及内容。检测目的旨在确保河堤安全,预防潜在风险;检测范围覆盖了观澜河的关键河段和相关设施;检测内容则包括了对河堤结构、地质状况、材料强度等多个方面的评估。在安... 文章针对观澜河的安全排查检测进行了概述,明确了检测的目的、范围及内容。检测目的旨在确保河堤安全,预防潜在风险;检测范围覆盖了观澜河的关键河段和相关设施;检测内容则包括了对河堤结构、地质状况、材料强度等多个方面的评估。在安全排查检测方法部分,详细介绍了外观检查、地质雷达检测、砂浆灌入法强度检测、挡墙钢筋状态检测以及混凝土挡墙回弹法强度检测等多种手段,并对每种方法的使用次序、优点和缺点进行了阐述,以便为实际的安全排查检测工作提供指导。 展开更多
关键词 观澜河 浆砌石挡墙 安全排查 检测
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山药颗粒结合型淀粉合成酶基因DaGBSS的克隆与分析 被引量：1
3
作者 王培龙 徐婉 +5 位作者 杨燕萍 付双彬 应震 杨周祥 姚丽娟 周庄 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期79-88,共10页
颗粒结合型淀粉合成酶(granule-bound starch synthase,GBSS)是一种能够决定直链淀粉生物合成的关键性酶。通过对山药转录组分析、分子克隆获得一个具有完整ORF的DaGBSS基因,cDNA片段长度为1845 bp,编码614个氨基酸。生物信息学分析结... 颗粒结合型淀粉合成酶(granule-bound starch synthase,GBSS)是一种能够决定直链淀粉生物合成的关键性酶。通过对山药转录组分析、分子克隆获得一个具有完整ORF的DaGBSS基因,cDNA片段长度为1845 bp,编码614个氨基酸。生物信息学分析结果显示DaGBSS蛋白为一酸性稳定蛋白,含有淀粉合酶催化和糖基转移酶2个功能结构域。多序列比对结果显示:糯米山药DaGBSS蛋白与所选的物种具有较高的同源性,且含有典型的功能结构域;生物进化分析结果显示DaGBSS蛋白与圆形薯蓣亚种进化亲缘关系最近。对采收15 d山药块茎进行处理,qRT-PCR、指标分析结果显示DaGBSS基因在山药块茎的表达存在明显的时空差异性,且在距离地表位置最远的部位DaGBSS基因的表达量、GBSS和直链淀粉的含量均为最高。研究通过对山药块茎淀粉合成的早期阶段进行生理、关键调控因子的克隆分析,为探究山药淀粉合成的调控提供参考,同时对糯米山药的分子育种提供了重要的基因资源。 展开更多
关键词 山药 GBSS基因 基因克隆 qRT-PCR分析
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热处理对CrNbTiVAl_(1.25)难熔高熵合金组织及电化学腐蚀性能的影响 被引量：1
4
作者 张成 贺林 +2 位作者 姚丽娟 朱满 坚增运 《西安工业大学学报》 2024年第6期705-713,共9页
由于传统合金中合金成分的自由度较低,合金内部会析出大量结构复杂的脆性金属间化合物或中间相,从而使得合金的力学性能以及耐腐蚀性能受到限制,而难熔高熵合金(RHEA)原子排列混乱度高,具有良好的力学性能及耐腐蚀性等特点能够很好的替... 由于传统合金中合金成分的自由度较低,合金内部会析出大量结构复杂的脆性金属间化合物或中间相,从而使得合金的力学性能以及耐腐蚀性能受到限制,而难熔高熵合金(RHEA)原子排列混乱度高,具有良好的力学性能及耐腐蚀性等特点能够很好的替代传统合金以满足新材料的应用。文中利用X射线衍射仪(XRD)、扫描电镜(SEM)和电化学工作站等手段研究了铸态及热处理态CrNbTiVAl_(1.25)难熔高熵合金的微观组织和电化学腐蚀特性。结果表明:铸态合金呈现等轴晶形态,其微观结构由BCC、Laves和β-Ti相组成。Laves相分布于晶界,β-Ti相则随机分布于晶粒和晶界处。热处理后合金仍由BCC、Laves和β-Ti相组成。此时β-Ti相以块状分布于组织内,Laves相以块状分布于晶界处。电化学腐蚀实验表明,热处理态CrNbTiVAl_(1.25)难熔高熵合金具有更大的腐蚀电位和较小腐蚀电流密度,因而其耐腐蚀性能较铸态合金得以明显改善。热处理态CrNbTiVAl_(1.25)难熔高熵合金的半圆弧较大,阻抗的模最大,说明热处理有利于提高钝化膜的结构稳定性,提高了合金的耐腐蚀性能。 展开更多
关键词 难熔高熵合金 热处理 钝化膜 电化学腐蚀
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大花蕙兰无菌播种技术试验 被引量：13
5
作者 姚丽娟 陈义增 +3 位作者 徐晓薇 林绍生 陈中林 曾爱平 《浙江林业科技》 北大核心 2006年第2期30-33,共4页
对大花蕙兰进行无菌播种技术试验,结果表明,其种子萌发的适宜培养基为1/2MS+6-BA0,1 mg·L-1+ NAA0．2 nag·L-1+10％椰乳+Ac 1g·L-1;椰乳可明显提高种子发芽率并促进原球茎生长,激素浓度的高低对原球茎和小苗的生长有一... 对大花蕙兰进行无菌播种技术试验,结果表明,其种子萌发的适宜培养基为1/2MS+6-BA0,1 mg·L-1+ NAA0．2 nag·L-1+10％椰乳+Ac 1g·L-1;椰乳可明显提高种子发芽率并促进原球茎生长,激素浓度的高低对原球茎和小苗的生长有一定影响;果龄6-9个月的蒴果播种萌发率较为理想,萌发后原球茎移植到1/2MS+6-BA1 mg·L-1+10％椰乳+Ac 0．5g ·L-1培养基中月增殖率可达3．89倍,原球茎在MS培养基中更易分化成苗,且小苗生长势更佳。6-BA、NAA有利于原球茎增殖倍数的提高,继代周期以4-6周为宜。 展开更多
关键词 大花蕙兰 无菌播种 原球茎 增殖分化
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用于检测胃蛋白酶原、胃泌素-17的血浆样本保存条件探讨 被引量：4
6
作者 姚丽娟 罗以勤 +2 位作者 孙安源 卜国平 王力 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第28期18-20,共3页
目的探讨用于检测胃蛋白酶原(PG)、胃泌素-17(G-17)的血浆样本的保存条件。方法血浆样本180例份,采用ELISA双抗体夹心法定量检测血浆PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、G-17,作为第1天结果(对照)。将剩余血浆样本随机分为1、2组,每组90份;每组又分为血浆未... 目的探讨用于检测胃蛋白酶原(PG)、胃泌素-17(G-17)的血浆样本的保存条件。方法血浆样本180例份,采用ELISA双抗体夹心法定量检测血浆PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、G-17,作为第1天结果(对照)。将剩余血浆样本随机分为1、2组,每组90份;每组又分为血浆未分离组(离心后未分离血浆)、血浆分离组(离心后取血浆)和稳定剂组(离心后取血浆,并加入稳定剂),每组各30份。将各组每个样本平均分装6管后分别置于室温、4℃和-20℃环境下保存,每天固定时间取1组样本检测PG-Ⅰ、PG-Ⅱ,取2组样本检测G-17,均连续检测7 d(包括第1天)。将室温、4℃、-20℃温度下保存不同时间点时血浆PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、G-17浓度与其保存第1天时浓度比较,将P>0.05的天数作为稳定性维续时间。结果血浆未分离组室温下PG-Ⅰ稳定性维持2 d,PG-Ⅱ为6 d,G-17为1 d;4℃时分别为5、7、3 d;-20℃时分别为4、3、2 d。血浆分离组室温下PG-Ⅰ稳定性维持7 d,PG-Ⅱ为6 d,G-17为2 d;4℃时分别为5、7、5 d;-20℃时分别为5、7、6 d。稳定剂组室温下PG-Ⅰ稳定性维持7 d,PG-Ⅱ为7 d,G-17为7 d;4℃时分别为5、6、4 d;-20℃时分别为7、5、4 d。结论在临床标本7 d保存期内,PG和G-17检测样本推荐使用血浆分离后低温保存,如使用稳定剂,推荐血浆分离后室温保存。 展开更多
关键词 血浆 胃蛋白酶原 胃泌素-17 室温 稳定剂
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湖南新晃侗藏红米产业发展现状与高质量发展建议
7
作者 唐善军 高杜娟 +7 位作者 姚茂洪 周昆 曾云 刘利成 吴艳君 姚俊杰 姚丽娟 闵军 《作物研究》 2025年第2期163-166,共4页
有色稻米营养丰富,具有保健功能。近年来,湖南省新晃侗族自治县大力发展侗藏红米产业,目前产业链基本完善、产业初具规模。文章剖析了侗藏红米的历史和文化背景、产业发展现状,介绍了红米品种选育情况,提出了完善政策保护、挖掘稻作文... 有色稻米营养丰富,具有保健功能。近年来,湖南省新晃侗族自治县大力发展侗藏红米产业,目前产业链基本完善、产业初具规模。文章剖析了侗藏红米的历史和文化背景、产业发展现状,介绍了红米品种选育情况,提出了完善政策保护、挖掘稻作文化发源地价值、加强种源保护、完善加工工艺和产销模式等推进新晃侗藏红米产业高质量发展的建议。 展开更多
关键词 侗藏红米 稻作文化 产业 新晃
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安祖花的组织培养和快速繁殖 被引量：7
8
作者 姚丽娟 徐晓薇 +2 位作者 陈香雪 游聚斌 林珍燕 《浙江农业科学》 北大核心 2004年第4期190-192,共3页
安祖花幼嫩茎段、嫩叶叶片、嫩叶叶柄离体培养结果表明,初代培养时茎段外植体在供试的3种培养基中均能脱分化形成愈伤组织,诱导率最高的组合为MS+BA2 0mg L(单位,下同)+NAA0 2,诱导率达60 47%;嫩叶叶片、嫩叶叶柄在ZS+BA4 0培养基上的... 安祖花幼嫩茎段、嫩叶叶片、嫩叶叶柄离体培养结果表明,初代培养时茎段外植体在供试的3种培养基中均能脱分化形成愈伤组织,诱导率最高的组合为MS+BA2 0mg L(单位,下同)+NAA0 2,诱导率达60 47%;嫩叶叶片、嫩叶叶柄在ZS+BA4 0培养基上的诱导率分别为68 89%和67 50%。叶片与叶柄连接处愈伤组织发生频率较高。愈伤组织转接到MS+BA0 5+NAA0 1,芽分化率可达87 50%。将1cm以上的小芽切下转接到1 2MS+NAA0 1或1 2MS+IBA0 1促生根培养基上,7～10d可发根形成完整的植株。移栽基质为无菌珍珠岩,成活率可在80%以上。 展开更多
关键词 安祖花 组织培养 繁殖
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我国铁路信号系统的现状与发展 被引量：19
9
作者 姚丽娟 《铁道通信信号》 北大核心 2003年第4期27-29,共3页
分析了国内铁路信号系统现状 ,结合国外先进铁路信号系统的特点 ,概括了现代化铁路信号系统的特征 ,并对我国铁路信号的发展提出了几点建议。
关键词 铁路信号系统 现代化 中国 技术特征 发展
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3种观赏石蒜的离体快速繁殖 被引量：11
10
作者 姚丽娟 杨燕萍 +1 位作者 徐晓薇 钱仁卷 《浙江农业科学》 2009年第4期688-690,共3页
以石蒜的鳞茎为外植体,探讨了3种石蒜的快速繁殖技术。（1）红花石蒜在MS＋BA 3 mg·L^-1＋NAA 0.2 mg·L^-1培养基中诱导率为78.0%,MS＋BA 2 mg·L^-1＋2,4-D 0.2 mg·L^-1诱导率为76.9%,形成丛芽但未见有根长出。忽... 以石蒜的鳞茎为外植体,探讨了3种石蒜的快速繁殖技术。（1）红花石蒜在MS＋BA 3 mg·L^-1＋NAA 0.2 mg·L^-1培养基中诱导率为78.0%,MS＋BA 2 mg·L^-1＋2,4-D 0.2 mg·L^-1诱导率为76.9%,形成丛芽但未见有根长出。忽地笑在MS＋BA 6 mg·L^-1＋NAA 0.2 mg·L^-1培养基上诱导最为理想,诱导率为71.0%,在MS＋BA 2 mg·L^-1＋KT 0.2 mg·L^-1诱导率虽然低一些（63.3%）但分化形成芽丛较多。换锦花在细胞分裂素较高浓度（6-BA 5 mg·L^-1）时,诱导情况较低浓度的要好,在MS＋BA 5 mg·L^-1＋NAA 0.1 mg·L^-1上诱导率为55.6%。（2）当蔗糖浓度为60 g·L^-1时,红花石蒜小鳞茎获得最高倍数的生长量,接种1个月能使鳞茎重量增大到原来的6.10倍;换锦花获得最高倍数的生长量,增重约为2.73倍。（3）红花石蒜在含生长素NAA 0.5～2.0 mg·L^-1的MS培养基上,3～4周后均可见小鳞茎基部发出多条白色根,生根率达86.7%以上。 展开更多
关键词 石蒜 鳞茎 离体繁殖
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大花蕙兰原球茎增殖分化影响因素研究 被引量：8
11
作者 姚丽娟 徐晓薇 +1 位作者 陈义增 林绍生 《农业科技通讯》 2008年第5期58-59,共2页
大花蕙兰在供试的MS、1/2MS、KC和VW4种培养基中,其原球茎增殖倍率没有明显差异,在3.51～3.89倍之间,发芽率在MS培养基中最佳,达16.1%。Ad、KT、6-BA等细胞分裂素处理中,以6-BA最有利于原球茎增殖倍数的提高,6-BA浓度在0.1～1.0mg/l范... 大花蕙兰在供试的MS、1/2MS、KC和VW4种培养基中,其原球茎增殖倍率没有明显差异,在3.51～3.89倍之间,发芽率在MS培养基中最佳,达16.1%。Ad、KT、6-BA等细胞分裂素处理中,以6-BA最有利于原球茎增殖倍数的提高,6-BA浓度在0.1～1.0mg/l范围内对大花蕙兰原球茎增殖没有明显的影响,对幼苗的分化则有一定的影响。原球茎增殖培养基中加入0.5～1mg/lNAA有利于原球茎增殖倍数与生根率的提高。继代周期以4～6周为宜,培养基中宜加入20～30g/l的蔗糖、10%的椰乳、0.5g/l的活性碳。 展开更多
关键词 大花蕙兰 原球茎 增殖分化
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深圳河污染底泥固化处理应用研究 被引量：3
12
作者 姚丽娟 黎韵 周冠晔 《水利水电技术》 CSCD 北大核心 2015年第2期39-43,共5页
本研究以深圳河污染底泥为研究对象,通过对污染底泥固化体的无侧限抗压强度和浸出毒性进行分析,验证固化技术处理深圳污染底泥的有效性,同时为工程实施提供技术参数。试验结果表明,污染底泥经固化后,其污染物浸出毒性降低,且低于GB 508... 本研究以深圳河污染底泥为研究对象,通过对污染底泥固化体的无侧限抗压强度和浸出毒性进行分析,验证固化技术处理深圳污染底泥的有效性,同时为工程实施提供技术参数。试验结果表明,污染底泥经固化后,其污染物浸出毒性降低,且低于GB 5085.3的化学指标限值;固化后的底泥无侧限抗压强度高于1.0 MPa,可作为一般废弃物进行填埋处理。实际工程建议采用固化剂添加量为初始底泥重量（湿重）12.6%,养护周期为17-21 d进行实施。 展开更多
关键词 深圳河 污染底泥 固化处理
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山区非洲菊切花品种引种栽培试验 被引量：4
13
作者 姚丽娟 蒋加勇 +2 位作者 钱仁卷 刘洪见 朱建军 《浙江农业科学》 2013年第4期432-434,共3页
对15个非洲菊切花品种进行引种试验,以不同品种的定植成活率、切花产量、切花品质、抗性等进行综合比较分析,筛选出6个综合性状表现优良、适合文成山区生产的品种。
关键词 非洲菊 引种 切花产量 切花品质 抗性
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GA_3处理和不同栽培基质对彩色马蹄莲开花的影响 被引量：4
14
作者 姚丽娟 刘洪见 +2 位作者 钱仁卷 林霞 王丽芳 《浙江农业科学》 2012年第1期71-73,共3页
以彩色马蹄莲品种粉色信服为材料,研究不同浓度GA3和不同栽培基质对其开花的影响。结果表明,GA3处理对增加产花量效果明显,100和500 mg.L-1处理的产花量为对照的3倍左右,生产上以100 mg.L-1处理更经济,对开花期没有明显影响;国产泥碳土... 以彩色马蹄莲品种粉色信服为材料,研究不同浓度GA3和不同栽培基质对其开花的影响。结果表明,GA3处理对增加产花量效果明显,100和500 mg.L-1处理的产花量为对照的3倍左右,生产上以100 mg.L-1处理更经济,对开花期没有明显影响;国产泥碳土+珍珠岩、进口泥炭土、园土(砂壤土)3种栽培基质,对产花量影响不明显,对植株生长势除了叶片数外,其他指标均没达到5%显著水平,也没达到1%极显著水平。生产上可考虑用国产泥碳土+珍珠岩按3∶1的配比作为栽培基质。 展开更多
关键词 彩色马蹄莲 GA3 栽培基质
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温州地区北美冬青栽培适应性观察 被引量：7
15
作者 姚丽娟 周秀兰 +1 位作者 杨燕萍 周庄 《农业科技通讯》 2016年第1期223-224,共2页
通过对引进的"Oosterwijk"品种的生物学和生态适应性的观察,该品种在温州市区及乐清市露地栽培,适应性良好,生长中等,能正常开花、结果和冬季落叶,果实着色状况较理想,可以作为冬季环境美化及盆栽植物栽培和推广。
关键词 北美冬青 栽培 适应性
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大花蕙兰生根壮苗及落地移栽试验 被引量：2
16
作者 姚丽娟 陈义增 +3 位作者 徐晓薇 林绍生 陈中林 曾爱平 《浙江农业科学》 2006年第2期133-135,共3页
大花蕙兰的无根苗生根壮苗的适合培养基为1／2MS＋NAA0．1—0．5mg／L＋10％椰乳＋0．5g／L活性炭；无机盐含量的高低对生根率的影响较为明显；大花蕙兰在生根壮苗时需要较丰富的碳水化合物和较强的光照，蔗糖浓度以25g／L为佳；光照强... 大花蕙兰的无根苗生根壮苗的适合培养基为1／2MS＋NAA0．1—0．5mg／L＋10％椰乳＋0．5g／L活性炭；无机盐含量的高低对生根率的影响较为明显；大花蕙兰在生根壮苗时需要较丰富的碳水化合物和较强的光照，蔗糖浓度以25g／L为佳；光照强度不宜低于1000k，椰乳对大花蕙兰的生根及幼苗的生长有较好的促进作用。大花蕙兰组培苗落地前炼苗3。5d，可提高成活率10％，13．3％，不同栽培基质影响大花蕙兰组培苗的落地成活率，水苔是较为理想的移栽基质，其移栽后2个月成活率达90％。瓶苗移栽后浇水时切忌过干或过湿，等新根长出每周宜进行1次根外追肥。 展开更多
关键词 大花蕙兰 组培苗 生根壮苗 栽培基质 炼苗
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基于低碳环保的丝绸之路经济带甘肃段新型工业化发展研究 被引量：2
17
作者 姚丽娟 《经济研究参考》 北大核心 2014年第53期38-39,共2页
一、引言 随着习近平总书记丝绸之路经济带建设构想的提出，丝绸之路经济带周边的城市纷纷着手抢抓机遇，甘肃段作为丝绸之路经济带重要通道，为促进中国与中西亚经济文化交流发挥了重要作用。
关键词 经济带建设 丝绸之路 甘肃段 工业化发展 环保 低碳 经济文化交流 总书记
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高校涉外护理专业英语教学现状调查与分析——以湖北中医药大学为例 被引量：4
18
作者 姚丽娟 高小莲 《广西中医药大学学报》 2012年第4期89-90,共2页
进入21世纪以来，我国的高等教育全球意识进一步强化，要求培养出更多具有国际交流能力和专业技术能力的双语国际型人才。语言作为人际沟通的一种主要方式，是医患、护患交流的工具，因此，良好的医患、护患交流能力已经成为医护人员必... 进入21世纪以来，我国的高等教育全球意识进一步强化，要求培养出更多具有国际交流能力和专业技术能力的双语国际型人才。语言作为人际沟通的一种主要方式，是医患、护患交流的工具，因此，良好的医患、护患交流能力已经成为医护人员必须具备的基本功之一。涉外护理专业对外交流能力的培养是实现护理专业国际型人才培养目标的一项基础性工作，其核心是培养学生在学好专业知识的基础上，具有较高的英语水平，能够胜任国际间的交流和工作。护理专业英语是护理专业学生的必修课程，同时也是培养对外交流能力的核心课程，其重要性不言而喻。 展开更多
关键词 涉外护理 英语教学 对外交流能力培养
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菜头肾离体快繁技术探讨 被引量：1
19
作者 姚丽娟 胡仁勇 +2 位作者 徐晓薇 吴旭丽 杨燕萍 《浙江农业科学》 2009年第2期305-307,共3页
菜头肾组织培养的外植体可选择茎段、嫩叶、嫩芽。菜头肾叶片愈伤组织诱导和茎段丛生芽诱导的最佳培养基配方是1/2 MS＋6-BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.2~0.5 mg.L-1。继代壮苗培养时仍采用1/2 MS＋6-BA 1.0mg.L-1＋NAA 0.2~0.5 mg.L-1培养基... 菜头肾组织培养的外植体可选择茎段、嫩叶、嫩芽。菜头肾叶片愈伤组织诱导和茎段丛生芽诱导的最佳培养基配方是1/2 MS＋6-BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.2~0.5 mg.L-1。继代壮苗培养时仍采用1/2 MS＋6-BA 1.0mg.L-1＋NAA 0.2~0.5 mg.L-1培养基。最适的生根培养基为1/2 MS＋NAA 0.2 mg.L-1。 展开更多
关键词 菜头肾 组织培养 快速繁殖
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Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立
20
作者 姚丽娟 罗以勤 +4 位作者 孔建新 赵亮 常珍 濮跃晨 马筱玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第34期27-30,共4页
目的构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)。方法利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向... 目的构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)。方法利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipo-fectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上。结论成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系。 展开更多
关键词 肿瘤抑素 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 表达载体
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