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冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞关键RNA结合蛋白基因的筛选及验证
1
作者 多力昆·木台力甫 阿布都乃比·麦麦提艾力 伊加提·司马义 《山东医药》 CAS 2024年第30期34-38,共5页
目的筛选冠状动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞关键RNA结合蛋白基因,并对其进行验证。方法①冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞关键RNA结合蛋白基因筛选选择冠状动脉粥样硬化患者5例(观察组)、健康志愿者5例(对照组),采用转录组测序技术... 目的筛选冠状动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞关键RNA结合蛋白基因,并对其进行验证。方法①冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞关键RNA结合蛋白基因筛选选择冠状动脉粥样硬化患者5例(观察组)、健康志愿者5例(对照组),采用转录组测序技术检测外周血单个核细胞RNA转录组,运用R软件“edgeR”包筛选P<0.05、|logFC|>1、错误发现率<0.05的单个核细胞差异表达基因。从RNA结合蛋白数据库中下载人单个核细胞的RNA结合蛋白相关基因资料,与外周血单个核细胞差异表达基因取交集后获得冠状动脉粥样硬化单个核细胞RNA结合蛋白相关差异表达基因。运用TopHat2、ABLas软件筛选冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞差异表达RNA结合蛋白相关基因的可变剪接事件。筛选相对表达量最高的单个核细胞RNA结合蛋白相关差异表达基因为关键RNA结合蛋白基因。②冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞关键RNA结合蛋白基因验证另选取冠状动脉粥样硬化患者10例(一组)、健康志愿者10例(二组),抽取外周静脉血后分离外周血单个核细胞,采用qRT-PCR法检测2组RNA结合蛋白关键基因。从GEO数据库(GSE40231、GSE43292、GSE100927、GSE27034)数据集中,检索冠状动脉粥样硬化患者、健康志愿者外周血单个核细胞RNA结合蛋白关键基因表达资料。结果冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞的差异RNA结合蛋白相关基因有:过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α、锌指RNA结合蛋白2、SAM域、SH3域和核定位信号1(SAMSN1)、肝配蛋白A型受体2、RNA结合基序蛋白24、多种剪接形式的RNA结合蛋白2、SH3和多个锚蛋白重复结构域1。与对照组相比,观察组患者单个核细胞RNA结合蛋白相关基因的可变剪接事件多(P<0.05)。关键RNA结合蛋白基因为SAMSN1。与二组相比,一组患者外周血单个核细胞SAMSN1相对表达量升高(P<0.05)。GEO数据库数据结果显示,相比于健康志愿者,冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞单个核细胞SAMSN1相对表达量升高(P<0.05)。结论冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞关键RNA结合蛋白基因为SAMSN1基因。相比于健康志愿者,冠状动脉粥样硬化患者单个核细胞SAMSN1基因表达升高,可变剪接事件增多。SAMSN1基因可能通过调控RNA结合蛋白相关基因的可变剪接事件,参与冠状动脉粥样硬化的发生发展。 展开更多
关键词 RNA结合蛋白 RNA结合蛋白基因 SH3域和核定位信号1基因 SH3域和核定位信号1 可变剪接 冠状动脉粥样硬化
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高血糖条件下NF-κB激活对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制
2
作者 张宇 阿布都赛米·艾尼 +2 位作者 多力昆·木台力甫 郑博源 阿布都乃比·麦麦提艾力 《山东医药》 CAS 2024年第25期1-5,共5页
目的探讨高血糖条件下核因子κB(NF-κB)激活对小鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的影响及其机制。方法选择雄性C57BL/6J小鼠48只,适应性饲养1周,随机分为NG-Sham组(非DM+假手术)与NG-IR组(非DM+IR)、DM-Sham组(DM+假手术)与DM-IR组(DM+IR)以... 目的探讨高血糖条件下核因子κB(NF-κB)激活对小鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的影响及其机制。方法选择雄性C57BL/6J小鼠48只,适应性饲养1周,随机分为NG-Sham组(非DM+假手术)与NG-IR组(非DM+IR)、DM-Sham组(DM+假手术)与DM-IR组(DM+IR)以及DM-IR-NC组(DM+IR+阴性对照)与DM-IR-NF-κB组(DM+IR+NF-κB),每组8只。NG-Sham组与NG-IR组正常饲料喂养,NG-IR组通过结扎冠状动脉左前降支构建IR模型(缺血60 min再灌注24 h),NG-Sham组开胸暴露冠状动脉左前降支,但不结扎。DM-IR组连续4天腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg诱导DM模型,成模后1周同法构建IR模型。DM-Sham组同法诱导DM模型,成模后1周开胸暴露冠状动脉左前降支,但不结扎。DM-IR-NF-κB组与DM-IR-NC组同法诱导DM模型,成模后1周同法构建IR模型,DM-IR-NF-κB组开胸前30 min尾静脉注射NF-κB重组蛋白0.5 mg/kg,DM-IR-NC组开胸前30 min尾静脉注射等量溶剂。采用TTC染色法评估NG-IR组与DM-IR组心肌缺血面积,采用RT-qPCR法检测NG-IR组与DM-IR组心肌组织NF-κB、IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量。采用JC-1染色法评估NG-Sham组、NG-IR组、DM-Sham组和DM-IR组心肌细胞线粒体膜电位,采用MitoSOX染色法评估心肌细胞线粒体活性氧(ROS)含量。采用Western blotting法检测NG-IR组与DM-IR组心肌组织AMPK、p-AMPK蛋白相对表达量,计算p-AMPK/AMPK。采用比色法检测DM-IR-NC组与DM-IR-NF-κB组血清AST、LDH含量,采用双抗体夹心ELISA法检测血清CK-MB含量。结果与NG-IR组比较,DM-IR组心肌缺血面积增加(P<0.05),心肌组织NF-κB mRNA相对表达量上调(P均<0.05),而心肌组织IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量变化不明显(P均>0.05)。与NG-Sham组比较,NG-IR组与DM-Sham组心肌细胞线粒体膜电位下降,心肌细胞线粒体ROS含量升高(P均<0.05);与NG-IR组比较,DM-IR组心肌细胞线粒体膜电位下降,心肌细胞线粒体ROS含量升高(P均<0.05)。Pearson相关分析发现,IR小鼠心肌组织NF-κB mRNA相对表达量与心肌细胞线粒体膜电位呈正相关关系(r=0.496,P<0.05)。与NG-IR组比较,DM-IR组心肌组织AMPK蛋白相对表达量升高,p-AMPK蛋白相对表达量降低,p-AMPK/AMPK降低(P均<0.05)。与DM-IR-NC组比较,DM-IR-NF-κB组血清AST、LDH、CK-MB含量均升高(P均<0.05),心肌组织p-AMPK蛋白相对表达量和p-AMPK/AMPK均降低(P均<0.05),而AMPK蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05)。结论高血糖条件下NF-κB激活可增强小鼠心肌IR后缺血心肌的易损性,其机制可能与NF-κB能够诱导AMPK信号通路失活和线粒体质量控制紊乱有关。 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注损伤 高血糖 核因子ΚB 腺苷酸活化蛋白激酶 线粒体质量 小鼠
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