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可视化-环介导等温扩增技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H
被引量：
7
1
作者
夏学峰
张碧成
+2 位作者
王警
张红印
张雪寒
《食品安全质量检测学报》
CAS
2020年第5期1561-1565,共5页
目的建立可视化的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)联合横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)方法检测肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)0157:H7的分析方法。方法以EHE...
目的建立可视化的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)联合横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)方法检测肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)0157:H7的分析方法。方法以EHEC 0157:H7的遗传标志性基因z3276基因序列为检测靶标设计6条LAMP特异性引物,其中2条环引物分别标记异硫氰酸荧光素和地高辛,用LFD检测扩增产物,建立EHEC0157:H7 LAMP-LFD检测方法。结果所建立的检测方法能够特异性的检测EHEC 0157:H7,与试验对照菌株EHEC 026、0145、045、0121,及其他主要大肠杆菌血清型025、078、0103、O111、0127、0138、0139、0141,及禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)E058、肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)SEC627、EPEC SEC689、K12-MG1655、BL21,和其他种属的受试菌,不存在交叉反应;对EHEC 0157:H7纯培养物的最低检测限为1.3 CFU/mL。结论本研究所建立的LAMP-LFD检测方法特异性和敏感性良好,操作简单,结果可视。
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关键词
肠出血性大肠杆菌
z3276基因序列
环介导等温扩增技术
横向流动试纸条
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职称材料
土地所长王加成
2
作者
夏学峰
周序蒙
《中国土地》
北大核心
1996年第4期40-40,共1页
土地所长王加成夏学峰，周序蒙王加成，一个普通的乡土地管理所所长，富贵不淫、威武不屈，最终赢得了人民的厚爱。威胁不惧１９８８年８月，江苏省响水县张集乡退伍军人王加成，通过考试被县土地管理局招聘为土地管理员，组织上分配他...
土地所长王加成夏学峰，周序蒙王加成，一个普通的乡土地管理所所长，富贵不淫、威武不屈，最终赢得了人民的厚爱。威胁不惧１９８８年８月，江苏省响水县张集乡退伍军人王加成，通过考试被县土地管理局招聘为土地管理员，组织上分配他来到地处偏僻的双满乡工作。当时，双...
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关键词
加成
土地管理局
土地管理工作
所长
匿名信
违章建筑
土地利用
土地政策
拔腿就走
县人民法院
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职称材料
猪IFN-δ5的表达纯化及其抗PEDV感染的作用分析
3
作者
宋诗莹
郭玮璐
+6 位作者
夏学峰
张雪
毕振威
张雪寒
范宝超
董海龙
李彬
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022年第8期3171-3179,共9页
【目的】试验旨在建立大量表达及纯化猪δ5干扰素(pIFN-δ5)的方法,并对其抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染的作用进行分析。【方法】根据GenBank中pIFN-δ5序列(登录号:NM_001164854.1)设计引物,以猪肝...
【目的】试验旨在建立大量表达及纯化猪δ5干扰素(pIFN-δ5)的方法,并对其抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染的作用进行分析。【方法】根据GenBank中pIFN-δ5序列(登录号:NM_001164854.1)设计引物,以猪肝脏组织cDNA为模板进行PCR扩增;将目的基因连接入经EcoRⅤ和HindⅢ双酶切的线性化pET-32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,优化诱导表达条件,并进行SDS-PAGE和Western blotting检测;pIFN-δ5蛋白大量表达后使用镍离子亲和层析柱纯化,并测定蛋白纯度;采用细胞病变抑制法检测pIFN-δ5的干扰素效价,采用CCK8方法检测pIFN-δ5的细胞毒性,进一步测定其抗PEDV的感染能力。【结果】试验成功构建了重组表达质粒pET-pIFNδ5,经诱导条件摸索发现,在D值为0.5~0.6、IPTG浓度为0.8 mmol/L、37℃诱导条件下,目的蛋白pIFN-δ5主要表达于菌体裂解上清中;经大量表达并纯化后可获得纯度>95%的pIFN-δ5蛋白。使用VSV/MDCK细胞滴定系统检测pIFN-δ5的比活性为5×10^(4)U/mg;CCK8检测表明pIFN-δ5的细胞毒性较小。实时荧光定量PCR、Western blotting和间接免疫荧光检测结果表明,pIFN-δ5具有显著抗PEDV感染能力。【结论】本试验建立了表达和纯化pIFN-δ5的方法,通过一系列的体外抗病毒试验证实pIFN-δ5具有良好的抗PEDV感染的活性,为将pIFN-δ5作为抗病毒药物及临床应用奠定了基础。
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关键词
猪干扰素-δ5(pIFN-δ5)
表达
纯化
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
抗病毒活性
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职称材料
题名
可视化-环介导等温扩增技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H
被引量：
7
1
作者
夏学峰
张碧成
王警
张红印
张雪寒
机构
江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室
江苏大学食品与生物工程学院
江苏省动物疫病预防控制中心
出处
《食品安全质量检测学报》
CAS
2020年第5期1561-1565,共5页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFD0500500)
江苏省重点研发项目(BE2017341)。
文摘
目的建立可视化的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)联合横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)方法检测肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)0157:H7的分析方法。方法以EHEC 0157:H7的遗传标志性基因z3276基因序列为检测靶标设计6条LAMP特异性引物,其中2条环引物分别标记异硫氰酸荧光素和地高辛,用LFD检测扩增产物,建立EHEC0157:H7 LAMP-LFD检测方法。结果所建立的检测方法能够特异性的检测EHEC 0157:H7,与试验对照菌株EHEC 026、0145、045、0121,及其他主要大肠杆菌血清型025、078、0103、O111、0127、0138、0139、0141,及禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)E058、肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)SEC627、EPEC SEC689、K12-MG1655、BL21,和其他种属的受试菌,不存在交叉反应;对EHEC 0157:H7纯培养物的最低检测限为1.3 CFU/mL。结论本研究所建立的LAMP-LFD检测方法特异性和敏感性良好,操作简单,结果可视。
关键词
肠出血性大肠杆菌
z3276基因序列
环介导等温扩增技术
横向流动试纸条
Keywords
enterohemorrhagic Escherichia coli
z3276 gene sequence
loop mediated isothermal amplification
lateral flow dipstick
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
土地所长王加成
2
作者
夏学峰
周序蒙
出处
《中国土地》
北大核心
1996年第4期40-40,共1页
文摘
土地所长王加成夏学峰，周序蒙王加成，一个普通的乡土地管理所所长，富贵不淫、威武不屈，最终赢得了人民的厚爱。威胁不惧１９８８年８月，江苏省响水县张集乡退伍军人王加成，通过考试被县土地管理局招聘为土地管理员，组织上分配他来到地处偏僻的双满乡工作。当时，双...
关键词
加成
土地管理局
土地管理工作
所长
匿名信
违章建筑
土地利用
土地政策
拔腿就走
县人民法院
分类号
K828.2 [历史地理—历史学]
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职称材料
题名
猪IFN-δ5的表达纯化及其抗PEDV感染的作用分析
3
作者
宋诗莹
郭玮璐
夏学峰
张雪
毕振威
张雪寒
范宝超
董海龙
李彬
机构
西藏农牧学院动物科学学院
江苏省农业科学院兽医研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022年第8期3171-3179,共9页
基金
国家重点研发计划(2021YFD1801104)
江苏省杰出青年基金(BK20190003)
江苏省自主创新基金(CX(21)3139)。
文摘
【目的】试验旨在建立大量表达及纯化猪δ5干扰素(pIFN-δ5)的方法,并对其抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染的作用进行分析。【方法】根据GenBank中pIFN-δ5序列(登录号:NM_001164854.1)设计引物,以猪肝脏组织cDNA为模板进行PCR扩增;将目的基因连接入经EcoRⅤ和HindⅢ双酶切的线性化pET-32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,优化诱导表达条件,并进行SDS-PAGE和Western blotting检测;pIFN-δ5蛋白大量表达后使用镍离子亲和层析柱纯化,并测定蛋白纯度;采用细胞病变抑制法检测pIFN-δ5的干扰素效价,采用CCK8方法检测pIFN-δ5的细胞毒性,进一步测定其抗PEDV的感染能力。【结果】试验成功构建了重组表达质粒pET-pIFNδ5,经诱导条件摸索发现,在D值为0.5~0.6、IPTG浓度为0.8 mmol/L、37℃诱导条件下,目的蛋白pIFN-δ5主要表达于菌体裂解上清中;经大量表达并纯化后可获得纯度>95%的pIFN-δ5蛋白。使用VSV/MDCK细胞滴定系统检测pIFN-δ5的比活性为5×10^(4)U/mg;CCK8检测表明pIFN-δ5的细胞毒性较小。实时荧光定量PCR、Western blotting和间接免疫荧光检测结果表明,pIFN-δ5具有显著抗PEDV感染能力。【结论】本试验建立了表达和纯化pIFN-δ5的方法,通过一系列的体外抗病毒试验证实pIFN-δ5具有良好的抗PEDV感染的活性,为将pIFN-δ5作为抗病毒药物及临床应用奠定了基础。
关键词
猪干扰素-δ5(pIFN-δ5)
表达
纯化
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
抗病毒活性
Keywords
porcine interferon-δ5(pIFN-δ5)
expression
purification
Porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)
antiviral activity
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可视化-环介导等温扩增技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H
夏学峰
张碧成
王警
张红印
张雪寒
《食品安全质量检测学报》
CAS
2020
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
土地所长王加成
夏学峰
周序蒙
《中国土地》
北大核心
1996
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪IFN-δ5的表达纯化及其抗PEDV感染的作用分析
宋诗莹
郭玮璐
夏学峰
张雪
毕振威
张雪寒
范宝超
董海龙
李彬
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022
0
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