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不同引物标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中应用比较 被引量：1
1
作者 郭乃洲 王万相 +4 位作者 严爱华 马达 周步全 马力 景奉香 《中国实用医药》 2007年第35期21-23,共3页
目的比较不同标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中的影响。方法分别采用地高辛、荧光素和生物素标记引物,建立地高辛-抗地高辛、荧光素-抗荧光素和生物素-亲和素酶呈色法芯片检测结核分支杆菌利福平(RFP)和异烟... 目的比较不同标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中的影响。方法分别采用地高辛、荧光素和生物素标记引物,建立地高辛-抗地高辛、荧光素-抗荧光素和生物素-亲和素酶呈色法芯片检测结核分支杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药基因方法,同时用3种方法检测46株结核分支杆菌临床分离株、19种非结核分支杆菌标准株、9种非分支杆菌标准株和结核分支杆菌H37Rv标准株,并对3种方法的敏感性和重复性进行比较。结果经3种方法平行检测,46例结核分支杆菌临床分离株结果完全一致;19种非结核分支杆菌标准株、9种非分支杆菌标准株结果均为阴性,结核分支杆菌H37Rv标准株结果均为野生型;地高辛系统和荧光素系统敏感度为2.0×103拷贝/ml,生物素-亲和素系统敏感度为2.0×104拷贝/ml;3种方法均有良好的重复性。结论3种方法均具有良好的重复性和特异性,生物素系统敏感度略低于地高辛系统和荧光素系统。 展开更多
关键词 地高辛 荧光素 生物素 显色法 芯片 结核分支杆菌 利福平 异烟肼 耐药基因
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显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平与异烟肼耐药基因的临床应用 被引量：1
2
作者 郭乃洲 王万相 +4 位作者 严爱华 高翠香 周步全 施旭东 马力 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期351-353,共3页
目的观察离心柱法抽提、显色法芯片检测结核分枝杆菌(MTB)利福平(RIF)与异烟肼(INH)耐药基因的临床应用价值。方法离心柱法直接抽提痰液中MTBDNA,显色法芯片检测69例结核患者、30例非结核患者痰液和H37Rv标准MTB株DNArpoB、katG、inhA和... 目的观察离心柱法抽提、显色法芯片检测结核分枝杆菌(MTB)利福平(RIF)与异烟肼(INH)耐药基因的临床应用价值。方法离心柱法直接抽提痰液中MTBDNA,显色法芯片检测69例结核患者、30例非结核患者痰液和H37Rv标准MTB株DNArpoB、katG、inhA和ahpC4个基因片段多态性。结果42例RIF耐药组rpoB区基因总突变率为90.4%,rpoB511、513、516、526、531位点突变率分别为9.5%、9.5%、7.1%、40.4%、38.0%,有1例未检出芯片信号;46例INH耐药组katG、inhA、ahpC区域突变率分别为58.6%、19.5%、6.5%,有4例未检出芯片信号;30例非结核病人痰液芯片检测结果均为阴性,H37Rv标准株为野生型。结论离心柱法抽提、显色法芯片检测结核分枝杆菌RIF和INH耐药基因方法灵敏、特异、简便,无需特殊仪器,对指导临床用药价值较大。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 芯片 药物敏感试验
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芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因实验条件优化研究
3
作者 王万相 郭乃洲 +6 位作者 严爱华 马达 马力 周步全 景奉香 唐向荣 朱殊 《中国实用医药》 2007年第35期13-15,共3页
目的优化研究芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的最佳条件。方法自制DNA芯片,每条寡核苷酸探针片段长度为19bp,点样浓度在15μmol/L,以痰液为待检标本,分别用不同引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度等进行多重聚合酶... 目的优化研究芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的最佳条件。方法自制DNA芯片,每条寡核苷酸探针片段长度为19bp,点样浓度在15μmol/L,以痰液为待检标本,分别用不同引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度等进行多重聚合酶链反应;分别在不同时间、温度下进行杂交,分别在不同酶作用时间和显色时间进行分析,比较不同条件芯片检测结果。结果引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度分别为0.2μmol/L、1mmol/L、0.2mmol/L、5U效果最好,杂交时间和杂交温度分别为0.5h、60℃信号最强,酶作用时间和显色时间均为0.5h时得到最佳结果。结论在最佳条件下,该技术的重复性、特异性、灵敏度与可靠性均较好,适合基层医院推广应用。 展开更多
关键词 痰标本 结核分枝杆菌DNA 显色法 耐药基因 基因芯片 实验条件
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