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Bmi-1调控非小细胞肺癌细胞对顺铂的敏感性研究 被引量:4
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作者 陈明军 陈奇 周月鹏 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第7期710-714,共5页
目的为了揭示Bmi-1参与非小细胞肺癌顺铂敏感性调控相关的具体机制,文中通过顺铂处理后结合靶向干扰Bmi-1表达,观察对非小细胞肺癌细胞中多药耐药相关蛋白1(MDR1)及凋亡蛋白表达的影响。方法构建靶向Bmi-1的siRNA,利用脂质体转染到非小... 目的为了揭示Bmi-1参与非小细胞肺癌顺铂敏感性调控相关的具体机制,文中通过顺铂处理后结合靶向干扰Bmi-1表达,观察对非小细胞肺癌细胞中多药耐药相关蛋白1(MDR1)及凋亡蛋白表达的影响。方法构建靶向Bmi-1的siRNA,利用脂质体转染到非小细胞肺癌A549细胞及顺铂耐药株A549/DDP中,取对数生长期细胞随机分为3组:Bmi-1干扰组(siRNA-Bmi-1转染)、阴性对照组(siRNA阴性对照)及空白对照组(不做任何处理)。通过RT-PCR及Westernblot实验验证干扰效果。根据A549细胞不同处理分为4组:对照组(未处理A549细胞)、Bmi-1组(siRNA-Bmi-1处理A549细胞)、DDP组(顺铂处理A549细胞)、Bmi-1+DDP组(Bmi-1干扰结合顺铂处理A549细胞)。采用CCK8实验检测A549与A549/DDP细胞中siRNA-Bmi-1处理前后,顺铂按浓度梯度(1、2、4、8、16、32、64、128、256μg/mL)加入处理24h后的细胞存活率;流式细胞检测各组凋亡水平变化,及蛋白印迹实验分析Bmi-1、MDR1和Cleaved-Caspase-3之间联系。结果RT-PCR法检测显示,Bmi-1干扰组mRNA表达水平较空白对照组降低(P<0.01)。A549细胞和A549/DDP细胞中随着顺铂浓度的升高,细胞相对存活率逐渐降低(P<0.05);Bmi-1+DDP组细胞存活率较DDP组明显降低(P<0.05)。A549细胞中,Bmi-1+DDP组细胞凋亡率[(39.65±3.41)%]较DDP组、Bmi-1组、对照组[(23.11±1.62)%、(2.05±1.56)%、(1.98±1.05)%]明显升高(P<0.05)。DDP处理24h后,流式细胞检测显示Bmi-1、MDR1高表达;靶向下调Bmi-1后A549和A549/DDP细胞中MDR1显著降低,凋亡相关Cleaved-Caspase-3蛋白表达量明显升高。结论siRNA-Bmi-1的表达可提高非小细胞肺癌顺铂敏感性,其作用机制可能与MDR1表达抑制以及凋亡相关蛋白活化有关。 展开更多
关键词 BMI-1 多药耐药相关蛋白1 非小细胞肺癌 顺铂 化疗敏感
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干细胞标志蛋白在成人鼻黏膜嗅鞘细胞的表达
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作者 黄秋生 陆汉强 +6 位作者 周月鹏 贺清华 孙湘兰 陈谦 龚爱华 姜平 张志坚 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 2012年第12期649-652,共4页
目的建立成人鼻黏膜嗅鞘细胞的体外培养方法,探讨干细胞标志蛋白在人嗅鞘细胞的表达及其意义,为嗅鞘细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤提供可行性研究资料。方法用鼻内镜自成人(鼻中隔偏曲伴黏膜肥厚者)鼻腔活体钳取部分嗅区黏膜,经胰... 目的建立成人鼻黏膜嗅鞘细胞的体外培养方法,探讨干细胞标志蛋白在人嗅鞘细胞的表达及其意义,为嗅鞘细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤提供可行性研究资料。方法用鼻内镜自成人(鼻中隔偏曲伴黏膜肥厚者)鼻腔活体钳取部分嗅区黏膜,经胰酶消化制成细胞悬液。细胞接种于玻璃培养瓶,用含10%胎牛血清的F12培养基培养、传代、扩增。用免疫细胞化学或免疫荧光染色和免疫印迹方法检测SOX-2、SOX-10、Nestin、NCAM、NGFRp75和S100-β在第7代嗅鞘细胞的表达。结果成人嗅黏膜细胞经过多次传代培养后,嗅鞘细胞逐渐成为优势细胞,该细胞高表达干细胞标志蛋白和嗅鞘细胞标志蛋白。结论成人嗅黏膜细胞体外培养可获得高产量的许旺细胞(Schwann cells,Scs)样嗅鞘细胞,该细胞具有干细胞特性(stemness)和很强的增殖能力,可作为自体细胞移植治疗中枢神经系统损伤的种子细胞。 展开更多
关键词 嗅黏膜 细胞培养技术 人嗅鞘细胞 干细胞特性
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乙酰辅酶A合成酶2低表达人胃癌细胞株MGC80-3的顺铂敏感性观察 被引量:4
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作者 糜磊 武丹 +2 位作者 陶清 周月鹏 陈德玉 《山东医药》 CAS 2019年第18期32-35,共4页
目的观察乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)低表达人胃癌细胞株MGC80-3的顺铂敏感性,并进一步探讨其可能作用机制。方法 采用Western blotting法检测人胃癌细胞株MGC80-3、AGS、SGC-7901、NCI-N87以及正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中ACSS2蛋白。对... 目的观察乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)低表达人胃癌细胞株MGC80-3的顺铂敏感性,并进一步探讨其可能作用机制。方法 采用Western blotting法检测人胃癌细胞株MGC80-3、AGS、SGC-7901、NCI-N87以及正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中ACSS2蛋白。对数生长期MGC80-3细胞分为A、B、C、D组,B及D组分别加入10 μL脂质体Lipofectamine 2000+5 μL siRNA-ACSS2转染, C组加入及A组分别加入50 μL无血清纯RPMI1640培养基+5 μL 阴性对照(NC);A组、B组均培养72 h,C组培养48 h时加入5 μg/mL的顺铂(DDP),D组转染48 h时加入5 μg/mL的DDP。培养24 h时,CCK8法检测各组细胞增殖活力,培养48、72 h时流式细胞分析术测算各组细胞早晚期凋亡率,Western blotting法检测各组细胞ACSS2、p65、p-p65、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-特大型蛋白(Bcl-xL)、凋亡蛋白Bcl-2相关的X蛋白(Bax)。结果 MGC80-3、AGS、SGC-7901、NCI-N87及RGM-1细胞ACSS2蛋白相对表达量分别为0.80± 0.03 、0.62±0.04、0.60±0.04、0.72±0.05、0.41±0.04。与RGM-1细胞比较,MGC80-3、AGS、SGC-7901、NCI-N87细胞ACSS2相对表达量升高( P 均<0.01)。A、B、C、D组细胞增殖活力分别为98.67%±4.89%、92.67%±7.86%、62.67%± 4.05%、34.67%±7.61%,A组与B组相比无明显差异( P >0.05);与A组比较,C组细胞增殖活力下降( P < 0.001 );与B、C组比较,D组细胞增殖活力均下降( P 均< 0.001 )。A、B、C、D组早期细胞凋亡率分别为1.06%±0.02%、1.13%±0.08%、7.62%±0.55%、14.33%±0.21%,晚期细胞凋亡率分别为8.01%± 0.05%、8.13%±0.06%、10.81%±0.43%、15.98±0.18%。与A组比较,C、D组细胞早、晚期凋亡率均升高( P 均<0.05);与B组比较,D组早、晚期凋亡率均升高( P 均<0.05);与C组比较,D组细胞早、晚期凋亡率均升高( P 均< 0.05 )。与A组比较,C组p-p65、Bax蛋白相对表达量升高,Bcl-2、Bcl-xL相对表达量降低( P 均<0.05);与B组比较,D组细胞p65、p-p65、Bcl-2、Bcl-xL相对表达量均降低、Bax相对表达量升高( P 均<0.05)。结论 ACSS2低表达的MGC80-3细胞DDP敏感性升高。ACSS2可能通过调控NF-κB信号通路及Bcl-2、Bcl-xL、Bax蛋白的表达提高MGC80-3细胞的DDP敏感性。 展开更多
关键词 乙酰辅酶A合成酶2 核因子κB B淋巴细胞瘤-2蛋白 B细胞淋巴瘤-特大型蛋白 Bcl-2相关的X蛋白 胃癌 顺铂 化疗敏感性
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金融分权对地方政府土地资本化形式选择影响研究 被引量:2
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作者 魏子博 石晓平 +1 位作者 马贤磊 周月鹏 《中国土地科学》 CSSCI CSCD 北大核心 2023年第7期20-29,共10页
研究目的:剖析金融分权对地方政府土地资本化形式选择的影响机理。研究方法:联立方程模型。研究结果:(1)影响机理为:金融分权通过为相关行业和部门提供融资便利,影响地方政府对土地资本化形式的选择。(2)时间特征为:整体时段,金融分权... 研究目的:剖析金融分权对地方政府土地资本化形式选择的影响机理。研究方法:联立方程模型。研究结果:(1)影响机理为:金融分权通过为相关行业和部门提供融资便利,影响地方政府对土地资本化形式的选择。(2)时间特征为:整体时段,金融分权主要促使地方政府选择土地金融;2012年之后,金融分权促使地方政府选择商住用地生租。(3)空间特征为:东部地区,金融分权促使地方政府选择商住用地生租,中西部地区金融分权则促使了地方政府选择土地金融。研究结论:金融分权不但是地方政府选择土地金融的关键影响因素,还是地方政府选择商住用地生租的重要推手,鉴于此,金融分权亦可被视为土地资本化的重要成因之一。 展开更多
关键词 土地财政 土地金融 金融分权 土地资本化 联立方程
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