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犬细小病毒研究进展 被引量：9
1
作者 周宏专 苏霞 +1 位作者 徐福洲 杨兵 《动物医学进展》 北大核心 2019年第12期79-84,共6页
犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是犬急性胃肠炎的主要致病因子之一,典型的临床症状包括呕吐、发热和腹泻,通常6周龄~6月龄的幼犬更易感染。20世纪70年代后期出现CPV-2后目前已在世界范围内流行。病原学研究显示CPV基因组替代率与RN... 犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是犬急性胃肠炎的主要致病因子之一,典型的临床症状包括呕吐、发热和腹泻,通常6周龄~6月龄的幼犬更易感染。20世纪70年代后期出现CPV-2后目前已在世界范围内流行。病原学研究显示CPV基因组替代率与RNA病毒相似,基因组中多个位点出现了新的变异,与病毒致病机制密切相关,引起了科研人员的广泛关注。在检测方面目前开展了多重聚合酶链反应(multiple PCR),聚合酶链式扩增阻碍突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS-PCR),隔热式恒温PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR),高分辨率熔解曲线PCR(high-resolution melting PCR,PCR-HRM),横向流动试纸条技术(immunocapture-loop mediated isothermal amplification-lateral flow dipstick,IC-LAMP-LFD),聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR),重组聚合酶扩增方法(recombinase polymerise amplification,RPA),Luminex液态悬浮芯片系统(Luminex xTAG)和免疫层析(immunochromatography,IC)等方法,在防控方面开展了核酸疫苗、重组亚单位苗、病毒样颗粒等新型疫苗以及治疗性药物研究。论文对CPV的流行病学、病原学、检测方法及防控措施等进行了综述。 展开更多
关键词 犬细小病毒 流行病学 致病机理 检测方法 疫苗
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犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定 被引量：1
2
作者 周宏专 苏霞 +4 位作者 林路路 齐颀 张进 徐福洲 杨兵 《动物医学进展》 北大核心 2020年第7期21-26,共6页
为分离犬细小病毒毒株,对临床经胶体金试纸条检测CPV阳性的8份犬粪便样品进行VP2全长编码片段扩增与测序。VP2片段序列分析结果显示,8株临床样品的VP2基因全长均为1755 bp,氨基酸的同源性为98.5%~100%。遗传进化分析显示,所有分离的毒... 为分离犬细小病毒毒株,对临床经胶体金试纸条检测CPV阳性的8份犬粪便样品进行VP2全长编码片段扩增与测序。VP2片段序列分析结果显示,8株临床样品的VP2基因全长均为1755 bp,氨基酸的同源性为98.5%~100%。遗传进化分析显示,所有分离的毒株均与所参考的中国分离株在一个分支上。其中1株属于New CPV-2b,其余7株均为New CPV-2a。在序列分析基础上,选择北京地区的1份犬粪便样品,接种F81细胞进行病毒分离。粪便样品接种F81细胞盲传5代后出现典型的病变。对该毒株进行电镜观察、免疫荧光试验以及蛋白电泳鉴定。电镜观察显示病毒粒子的外形结构为圆形或六边形,直径约25 nm,可见实心和空心病毒粒子。间接免疫荧光结果显示,接种病毒液的细胞出现特异性亮绿色荧光信号,对照细胞无荧光信号。纯化后的病毒蛋白电泳显示两条清晰的条带分别为VP1(76 ku)、VP2(64 ku)。结果表明,成功分离到1株New CPV-2a亚型毒株,并将其命名为CPV BJ-1株。 展开更多
关键词 犬细小病毒 进化分析 基因型 病毒分离鉴定
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猪流行性腹泻研究概况 被引量：8
3
作者 周宏专 《动物医学进展》 北大核心 2018年第7期102-107,共6页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪流行性腹泻(PED)在世界范围内广泛存在。近年来,由于病毒变异造成的病毒毒力增强,给许多国家的养猪业造成了极大的经济损失,受到兽医研究人员的广泛关注。研究人员针对毒株的变异、致病机理、病毒实验室... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪流行性腹泻(PED)在世界范围内广泛存在。近年来,由于病毒变异造成的病毒毒力增强,给许多国家的养猪业造成了极大的经济损失,受到兽医研究人员的广泛关注。研究人员针对毒株的变异、致病机理、病毒实验室诊断和新型疫苗的研究等方面开展了积极研究,如诊断方法中的荧光微球免疫法和荧光聚焦中和法,以及以马脑炎病毒基因为载体的PEDV颗粒疫苗的制备研究等。这些研究使得人们对猪流行性腹泻病毒致病机理解更加深入。论文基于国内外的相关研究进展,就猪流行性腹泻的病原起源、流行现状、病原学、病毒检测方法和防控等进行综述,以期为该病的预防和控制提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 流行病学 致病机理 检测方法 疫苗
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猪博卡病毒研究概述 被引量：3
4
作者 周宏专 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期103-107,共5页
2009年瑞典学者在患断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪体内首次检测到猪博卡病毒,近年来对该病毒的研究已从分子病原学向流行病学、致病性等逐渐深入,对揭示该病原的致病机理将具有重要意义。论文基于国内外的相关研究,对该病毒的发现、基... 2009年瑞典学者在患断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪体内首次检测到猪博卡病毒,近年来对该病毒的研究已从分子病原学向流行病学、致病性等逐渐深入,对揭示该病原的致病机理将具有重要意义。论文基于国内外的相关研究,对该病毒的发现、基因组结构特征、病毒分型、流行现状及检测诊断方法等方面进行概述。 展开更多
关键词 猪博卡病毒 基因组结构 流行病学 检测
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2种鸡免疫抑制性疾病LAMP检测方法的建立 被引量：8
5
作者 夏永恒 杨兵 +4 位作者 张杰 袁蕾磊 孙继国 周宏专 苏霞 《中国动物检疫》 CAS 2009年第5期29-32,共4页
本文借助环介导等温扩增技术(LAMP),建立了两种常见鸡免疫抑制病的(鸡传染性贫血病、J亚群白血病)的快速检测方法。采用简易法提取DNA模板,设计特异性LAMP引物,成功扩增出梯形条带,并且对反应体系进行优化,以及特异性试验和灵敏度试验... 本文借助环介导等温扩增技术(LAMP),建立了两种常见鸡免疫抑制病的(鸡传染性贫血病、J亚群白血病)的快速检测方法。采用简易法提取DNA模板,设计特异性LAMP引物,成功扩增出梯形条带,并且对反应体系进行优化,以及特异性试验和灵敏度试验。结果表明LAMP的灵敏度可达10个拷贝,比PCR灵敏度高10倍;且具有特异性,对其他相关鸡病病原检测结果均为阴性。用建立的LAMP方法对临床样品进行检测,同时与PCR方法比较,结果表明LAMP结果基本与PCR相符,但检测的阳性率要比PCR高。操作简便,无需昂贵设备,适用于临床快速诊断。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 J亚群白血病 环介导等温扩增技术(LAMP) 快速检测
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5种常见犬腹泻病毒基因芯片检测方法的建立 被引量：6
6
作者 苏霞 周宏专 +5 位作者 常彦嫣 齐颀 林路路 张进 徐福洲 杨兵 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第8期2211-2219,共9页
为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型(canine adenovirus type 1,CAV-1)、犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(ca... 为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型(canine adenovirus type 1,CAV-1)、犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)5种常见犬腹泻病毒的基因芯片诊断方法,本研究以CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV 5种犬腹泻病毒为靶病毒,根据NCBI上收录的病毒基因序列在其保守区域内设计引物,在此基础上根据变异区域设计针对每种病毒的探针2~3条,优化检测体系的各反应条件,确定该检测方法的特异性与敏感性,建立可同时区分5种病毒的基因芯片检测方法。结果显示,建立的基因芯片检测方法可同时检测以上述5种犬腹泻病毒,其中PCR的退火温度为55℃、延伸时间为1 min 15 s;探针与PCR产物的杂交温度40℃、杂交时间2.5 h时,该方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒标准品的检测限分别为0.2 fg/μL、2 fg/μL、2 fg/μL、20 pg/μL和0.02 fg/μL,具有较高的灵敏性;同时对犬副流感病毒进行特异性试验,发现无阳性信号出现,具有较强的特异性;对14份临床腹泻样品检测结果显示,基因芯片方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒的阳性检出率分别为28.57%、50.00%、64.28%、14.28%和85.71%,并且基因芯片检测方法的敏感性较PCR要高10~100倍。以上结果表明,本研究建立的基因芯片检测方法具有特异、敏感等特点,对临床中犬类混合感染病毒检测具有一定的诊断意义。 展开更多
关键词 犬腹泻病毒 基因芯片 诊断
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H1N1猪流感病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立 被引量：5
7
作者 苏霞 杨兵 +6 位作者 周宏专 曾作财 孙继国 赵景义 马志军 孙丹丹 陈小玲 《中国动物检疫》 CAS 2010年第5期24-27,共4页
目的:建立H1N1猪流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法:从GenBank中获得H1N1猪流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用Primer ExplorerV4软件在序列保守区域设计LAMP引物,... 目的:建立H1N1猪流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法:从GenBank中获得H1N1猪流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用Primer ExplorerV4软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物和内引物,同时以H1N1猪流感病毒的cDNA作为阳性模板,对试验中的几个反应条件进行优化。结果:LAMP检测方法对H1N1猪流感病毒的灵敏度达到4～6个拷贝,其引物对于H9亚型禽流感病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒均无非特异性扩增,表现出良好的特异性。结论:建立的H1N1猪流感病毒环介导等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,为快速检测猪流感病毒提供了新方法和新思路。 展开更多
关键词 H1N1猪流感病毒 环介导等温扩增 条件优化
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转TGEV-S基因玉米中目的基因的PCR检测及优化
8
作者 覃湘婕 周宏专 +4 位作者 杨兵 徐福洲 薛静 张晓东 王金洛 《北京农学院学报》 2014年第4期1-7,共7页
为提高转基因玉米中目的基因的检出效率,以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白（TGEV-S）转基因玉米为材料,利用PCR方法检测样品中的目的基因.通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较,建立和优化了转基因玉米中TGEV-S基因... 为提高转基因玉米中目的基因的检出效率,以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白（TGEV-S）转基因玉米为材料,利用PCR方法检测样品中的目的基因.通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较,建立和优化了转基因玉米中TGEV-S基因的PCR检测方法.对450株转基因玉米叶片DNA和种子DNA中的TGEV-S基因片段进行检测,并设计33对引物检测插入转基因玉米基因组DNA中的质粒pBAC9020DNA片段.结果显示,LA Taq酶对叶片DNA和种子DNA中TGEV-S片段的PCR扩增敏感性和特异性均优于其他Taq聚合酶,且退火温度为53～55℃时扩增效果较好.分别对450份转基因玉米叶片DNA和种子DNA检测结果显示阳性率分别为82.5％和76.3％.利用33对引物进行的PCR扩增及测序结果显示质粒pBAC9020基因片段已全部插入该玉米基因组DNA中.本试验建立的转TGEV-S基因玉米PCR检测方法敏感性和特异性高,为转基因玉米阳性植株的检测奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 转基因玉米 目的基因 DNA聚合酶 优化
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鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：5
9
作者 杨丽聪 苏霞 +4 位作者 朱瑞豪 周宏专 徐福州 杨兵 孙继国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第4期859-864,共6页
为建立鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)的实时荧光定量PCR检测方法,本试验通过CIAV基因组保守区域设计1对扩增片段大小为180bp的特异性引物,构建pGM-T-CIAV重组质粒,制备阳性标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定... 为建立鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)的实时荧光定量PCR检测方法,本试验通过CIAV基因组保守区域设计1对扩增片段大小为180bp的特异性引物,构建pGM-T-CIAV重组质粒,制备阳性标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果显示,CIAV的Ct阈值与标准品浓度在5.33×108至5.33×103拷贝/μL间呈良好的线性关系,相关系数R2=0.998,斜率为-3.443,产物Tm值在86℃左右。该方法与网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)J亚型、马立克氏病病毒(MDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组均无交叉反应,敏感性为5.33拷贝/μL,比普通PCR高1 000倍,批内和批间重复试验变异系数均小于3%。结果表明,本试验建立的CIAV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法可实现对鸡传染性贫血病的早期诊断及感染程度的定量分析的检测。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 实时荧光定量 PCR SYBR Green I 定量分析
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北京地区犬瘟热病毒分离株H基因的分型 被引量：5
10
作者 张晋 夏永恒 +5 位作者 杨兵 周宏专 张杰 侯加法 陈小玲 刘朗 《中国动物检疫》 CAS 2009年第6期44-47,共4页
根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考毒株Onderstepoort的序列设计了一对引物,以感染犬瘟热病毒的犬的粪便总RNA为模板,RT-PCR扩增出17株CDV的H全基因1877bp的片段,将这个片段连接到pGEM-Teasy载体上,经酶切鉴定得到阳性克隆,将阳性质粒进行... 根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考毒株Onderstepoort的序列设计了一对引物,以感染犬瘟热病毒的犬的粪便总RNA为模板,RT-PCR扩增出17株CDV的H全基因1877bp的片段,将这个片段连接到pGEM-Teasy载体上,经酶切鉴定得到阳性克隆,将阳性质粒进行序列测定,并与国内外毒株进行同源性比较和系统发育分析,结果显示17株均为Asia-1型。北京地区流行的毒株主要是America-1型和Asia-1型,其中2007年主要流行America-1(疫苗型),而2008年主要是Asia-1型。 展开更多
关键词 犬病 犬瘟热病毒 H蛋白基因 序列分析
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