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可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建
1
作者
姚咏嫦
周嘉安
陈晓峰
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期95-100,共6页
滑膜间质干细胞(SMSCs)与其他来源的间质干细胞相比,具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力.但由于SMSCs固有地表达I型胶原,这将会大大损害再生软骨的整体质量.为解决此问题,文中首先设计了可抑制I型胶原表达的shRNA,并将其构建到腺...
滑膜间质干细胞(SMSCs)与其他来源的间质干细胞相比,具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力.但由于SMSCs固有地表达I型胶原,这将会大大损害再生软骨的整体质量.为解决此问题,文中首先设计了可抑制I型胶原表达的shRNA,并将其构建到腺病毒载体上.接着通过Pac I酶切反应,使重组腺病毒载体线性化并通过脂质体转染293细胞进行病毒包装.收集的病毒初液进行滴度测定后,再次通过293细胞进行病毒扩增,经过纯化后,最终获得高滴度重组腺病毒.将重组腺病毒分别感染成纤维细胞和成骨细胞,通过荧光显微镜观察,检测转染效率,利用实时定量PCR实验验证siRNA的干扰效果.实验结果表明,包装后的重组腺病毒具有高的转染效率,能成功编译siRNA,并具有抑制I型胶原表达的能力.
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关键词
滑膜间质干细胞
腺病毒
SIRNA
I型胶原
载体
转染
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职称材料
题名
可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建
1
作者
姚咏嫦
周嘉安
陈晓峰
机构
华南理工大学材料科学与工程学院
国家人体组织功能重建工程技术研究中心
出处
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期95-100,共6页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(51303058)
华南理工大学中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2011ZM0010)
+1 种基金
广东省自然科学基金资助项目(S2011040000208)
教育部留学回国人员科研启动基金资助项目
文摘
滑膜间质干细胞(SMSCs)与其他来源的间质干细胞相比,具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力.但由于SMSCs固有地表达I型胶原,这将会大大损害再生软骨的整体质量.为解决此问题,文中首先设计了可抑制I型胶原表达的shRNA,并将其构建到腺病毒载体上.接着通过Pac I酶切反应,使重组腺病毒载体线性化并通过脂质体转染293细胞进行病毒包装.收集的病毒初液进行滴度测定后,再次通过293细胞进行病毒扩增,经过纯化后,最终获得高滴度重组腺病毒.将重组腺病毒分别感染成纤维细胞和成骨细胞,通过荧光显微镜观察,检测转染效率,利用实时定量PCR实验验证siRNA的干扰效果.实验结果表明,包装后的重组腺病毒具有高的转染效率,能成功编译siRNA,并具有抑制I型胶原表达的能力.
关键词
滑膜间质干细胞
腺病毒
SIRNA
I型胶原
载体
转染
Keywords
synovium-derived mesenchymal stem cell
adenovirus
siRNA
Collagen I
vector
transfection
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建
姚咏嫦
周嘉安
陈晓峰
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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