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可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建
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作者 姚咏嫦 周嘉安 陈晓峰 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第12期95-100,共6页
滑膜间质干细胞(SMSCs)与其他来源的间质干细胞相比,具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力.但由于SMSCs固有地表达I型胶原,这将会大大损害再生软骨的整体质量.为解决此问题,文中首先设计了可抑制I型胶原表达的shRNA,并将其构建到腺... 滑膜间质干细胞(SMSCs)与其他来源的间质干细胞相比,具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力.但由于SMSCs固有地表达I型胶原,这将会大大损害再生软骨的整体质量.为解决此问题,文中首先设计了可抑制I型胶原表达的shRNA,并将其构建到腺病毒载体上.接着通过Pac I酶切反应,使重组腺病毒载体线性化并通过脂质体转染293细胞进行病毒包装.收集的病毒初液进行滴度测定后,再次通过293细胞进行病毒扩增,经过纯化后,最终获得高滴度重组腺病毒.将重组腺病毒分别感染成纤维细胞和成骨细胞,通过荧光显微镜观察,检测转染效率,利用实时定量PCR实验验证siRNA的干扰效果.实验结果表明,包装后的重组腺病毒具有高的转染效率,能成功编译siRNA,并具有抑制I型胶原表达的能力. 展开更多
关键词 滑膜间质干细胞 腺病毒 SIRNA I型胶原 载体 转染
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