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利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用
被引量：
9
1
作者
余深翼
赵金荣
+3 位作者
郑玲红
朱二鹏
周五朵
吴宝成
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期762-770,共9页
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,...
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序。CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46%~58%;测序结果进一步证实目的基因敲除成功。本试验成功构建大肠杆菌aroA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具。
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关键词
CRISPR/Cas
9系统
大肠杆菌
aroA基因
敲除
同源修复
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职称材料
日粮纤维水平对梅山猪血液和肠道免疫指标的影响及其机理初步解析
被引量：
2
2
作者
李平会
蒲广
+6 位作者
王中宇
周五朵
牛培培
吴承武
侯黎明
黄瑞华
李平华
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期4260-4277,共18页
本研究以大白猪为对照,旨在分析不同水平麸皮替代基础日粮对梅山猪血液常规和血液生化、血清免疫球蛋白及大肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)等免疫指标的影响,并进一步从宿主肠道基因和微生物角度初步探究日粮纤维影响梅山猪免疫指标的...
本研究以大白猪为对照,旨在分析不同水平麸皮替代基础日粮对梅山猪血液常规和血液生化、血清免疫球蛋白及大肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)等免疫指标的影响,并进一步从宿主肠道基因和微生物角度初步探究日粮纤维影响梅山猪免疫指标的机理。试验选取梅山猪(初始体重(67.08±1.53)kg)、与梅山猪相同生理阶段的大白猪(初始体重(81.04±1.64)kg)各28头,随机各分成4个处理组,每组7个重复,每个重复1头猪。预试期7 d,试验猪只自由采食基础日粮;正试期28 d,分别饲喂基础日粮(Basal),以及7%、10.5%和14%麸皮替代基础日粮(7%WBR、10.5%WBR和14%WBR)的试验日粮。正试期所有猪自由采食和饮水,试验结束屠宰全部试验猪,采集血液样品进行血常规、血生化和血清免疫球蛋白指标测定;采集盲肠和结肠黏膜样品进行SIgA测定以及结肠黏膜转录组测序;采集结肠内容物进行宏基因组测序。结果表明:1)随日粮麸皮替代水平的升高,梅山猪的嗜酸性粒细胞数、嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞数呈线性降低(P<0.05)。14%WBR组梅山猪的血清球蛋白水平显著高于大白猪(P<0.05);2)随日粮麸皮替代水平的升高,梅山猪的血清免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)呈线性升高(P<0.01),大白猪的血清IgM呈线性升高(P<0.01),且14%WBR组梅山猪的血清IgG的浓度显著高于大白猪(P<0.01)。另外,与Basal组相比,14%WBR组梅山猪的结肠黏膜SIgA浓度极显著升高(P<0.01),而大白猪没有显著变化;3)为初步解析14%WBR组梅山猪的结肠黏膜SIgA浓度升高的机理,一方面选择Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠黏膜进行转录组测序,共鉴别到38个差异表达基因,GO富集到的功能条目和KEGG富集到的信号通路主要与免疫系统相关,调控肠道SIgA产生的基因CD4分子(CD4)和CC趋化因子受体9(CCR9)的表达量在14%WBR组显著提高(P<0.05)。另一方面选择Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠内容物进行宏基因组测序,LEFSe分析发现14%WBR组显著富集到2个科水平微生物、1个属水平微生物和5个种水平微生物。相关性分析揭示,种水平差异微生物与调控肠道SIgA产生的宿主黏膜基因CD4和CCR9不存在直接互作关系(P>0.05),但Sutterella sp.、Clostridium sp.CAG:138、Clostridium sp.CAG:762和Nitrospira sp.与血清IgG呈显著正相关,Clostridium sp.CAG:138和Nitrospira sp.与结肠黏膜SIgA呈显著正相关。对Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠微生物进行KEGG功能注释,发现14%WBR组IgA产生的肠道免疫网络功能通路(intestinal immune network for IgA production)的相对丰度显著高于Basal组(P<0.05)。综上可知,用麸皮替代部分基础日粮可以降低梅山猪机体的炎症水平,增强梅山猪的体液免疫和促进结肠健康,并且14%麸皮替代基础日粮对梅山猪的有益作用优于大白猪。同时本文还发现日粮纤维对梅山猪结肠黏膜SIgA的影响可能是通过上调结肠黏膜CD4和CCR9基因的表达和影响肠道微生物的组成,从而增强IgA产生的肠道免疫网络功能通路,改善肠道屏障功能,促进机体健康。
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关键词
麸皮
猪
免疫
微生物
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职称材料
题名
利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用
被引量：
9
1
作者
余深翼
赵金荣
郑玲红
朱二鹏
周五朵
吴宝成
机构
福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期762-770,共9页
基金
福建省畜禽新发疫病诊断和防治技术研究(ky0040052)
文摘
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序。CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46%~58%;测序结果进一步证实目的基因敲除成功。本试验成功构建大肠杆菌aroA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具。
关键词
CRISPR/Cas
9系统
大肠杆菌
aroA基因
敲除
同源修复
Keywords
CRISPR/Cas 9 system
Escherichia coli
aroA gene
knockout
homologous repair
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
日粮纤维水平对梅山猪血液和肠道免疫指标的影响及其机理初步解析
被引量：
2
2
作者
李平会
蒲广
王中宇
周五朵
牛培培
吴承武
侯黎明
黄瑞华
李平华
机构
南京农业大学养猪研究所(农业农村部畜禽(猪)资源评价利用重点实验室(南京))
南京农业大学淮安研究院
江苏现代农业(生猪)产业技术体系集成创新中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期4260-4277,共18页
基金
国家重点研发项目(2021YFD1301101)
江苏省现代农业(生猪)产业技术体系建设项目[JATS(2022)452,JATS(2022)205]。
文摘
本研究以大白猪为对照,旨在分析不同水平麸皮替代基础日粮对梅山猪血液常规和血液生化、血清免疫球蛋白及大肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)等免疫指标的影响,并进一步从宿主肠道基因和微生物角度初步探究日粮纤维影响梅山猪免疫指标的机理。试验选取梅山猪(初始体重(67.08±1.53)kg)、与梅山猪相同生理阶段的大白猪(初始体重(81.04±1.64)kg)各28头,随机各分成4个处理组,每组7个重复,每个重复1头猪。预试期7 d,试验猪只自由采食基础日粮;正试期28 d,分别饲喂基础日粮(Basal),以及7%、10.5%和14%麸皮替代基础日粮(7%WBR、10.5%WBR和14%WBR)的试验日粮。正试期所有猪自由采食和饮水,试验结束屠宰全部试验猪,采集血液样品进行血常规、血生化和血清免疫球蛋白指标测定;采集盲肠和结肠黏膜样品进行SIgA测定以及结肠黏膜转录组测序;采集结肠内容物进行宏基因组测序。结果表明:1)随日粮麸皮替代水平的升高,梅山猪的嗜酸性粒细胞数、嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞数呈线性降低(P<0.05)。14%WBR组梅山猪的血清球蛋白水平显著高于大白猪(P<0.05);2)随日粮麸皮替代水平的升高,梅山猪的血清免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)呈线性升高(P<0.01),大白猪的血清IgM呈线性升高(P<0.01),且14%WBR组梅山猪的血清IgG的浓度显著高于大白猪(P<0.01)。另外,与Basal组相比,14%WBR组梅山猪的结肠黏膜SIgA浓度极显著升高(P<0.01),而大白猪没有显著变化;3)为初步解析14%WBR组梅山猪的结肠黏膜SIgA浓度升高的机理,一方面选择Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠黏膜进行转录组测序,共鉴别到38个差异表达基因,GO富集到的功能条目和KEGG富集到的信号通路主要与免疫系统相关,调控肠道SIgA产生的基因CD4分子(CD4)和CC趋化因子受体9(CCR9)的表达量在14%WBR组显著提高(P<0.05)。另一方面选择Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠内容物进行宏基因组测序,LEFSe分析发现14%WBR组显著富集到2个科水平微生物、1个属水平微生物和5个种水平微生物。相关性分析揭示,种水平差异微生物与调控肠道SIgA产生的宿主黏膜基因CD4和CCR9不存在直接互作关系(P>0.05),但Sutterella sp.、Clostridium sp.CAG:138、Clostridium sp.CAG:762和Nitrospira sp.与血清IgG呈显著正相关,Clostridium sp.CAG:138和Nitrospira sp.与结肠黏膜SIgA呈显著正相关。对Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠微生物进行KEGG功能注释,发现14%WBR组IgA产生的肠道免疫网络功能通路(intestinal immune network for IgA production)的相对丰度显著高于Basal组(P<0.05)。综上可知,用麸皮替代部分基础日粮可以降低梅山猪机体的炎症水平,增强梅山猪的体液免疫和促进结肠健康,并且14%麸皮替代基础日粮对梅山猪的有益作用优于大白猪。同时本文还发现日粮纤维对梅山猪结肠黏膜SIgA的影响可能是通过上调结肠黏膜CD4和CCR9基因的表达和影响肠道微生物的组成,从而增强IgA产生的肠道免疫网络功能通路,改善肠道屏障功能,促进机体健康。
关键词
麸皮
猪
免疫
微生物
Keywords
wheat bran
pig
immunity
microorganism
分类号
S828.81 [农业科学—畜牧学]
S821.5 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用
余深翼
赵金荣
郑玲红
朱二鹏
周五朵
吴宝成
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
9
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职称材料
2
日粮纤维水平对梅山猪血液和肠道免疫指标的影响及其机理初步解析
李平会
蒲广
王中宇
周五朵
牛培培
吴承武
侯黎明
黄瑞华
李平华
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
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