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亚洲玉米螟酚氧化酶原的原核表达和性质分析
被引量：
2
1
作者
赵同伟
张兵
+5 位作者
吕文静
翟会锋
吴桃燕
张石洋
汤小伟
冯从经
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期798-805,共8页
【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的新型...
【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的新型杀虫剂提供条件。【方法】利用从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫体内克隆获得PPO基因,构建了pET-28b-PPO原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli中重组表达了亚洲玉米螟PPO蛋白;采用Ni-NAT亲和层析柱快速纯化目的蛋白,进行了Western杂交鉴定;测定分析了重组PPO蛋白激活为PO后的酶学性质以及不同金属离子(Mg2+,Cu2+和Fe2+)对PPO二级结构的影响。【结果】融合蛋白PPO得到了表达和纯化。重组PPO蛋白激活为PO后最适反应温度为30℃,最适pH为7.2,以L-DOPA为底物时PO催化反应的Vmax为140.8 U/mg·min,Km为2.96 mmol/L。Fe2+存在的情况下重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著增加至53.7%±4.6%,α-螺旋结构成分则显著下降至2.6%±1.2%(P<0.05);有Mg2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降,α-螺旋结构成分稍有上升。有Cu2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降为10.0%±1.6%,而α-螺旋结构成分则上升至35.3%±6.9%。【结论】结果说明不同金属离子对重组PPO蛋白的二级结构有显著影响。
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关键词
亚洲玉米螟
酚氧化酶原
原核表达
蛋白纯化
酚氧化酶
酶学性质
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职称材料
斜纹夜蛾畸形蛹蛋白质的双向电泳分析
2
作者
苗俊玲
杨俊明
+4 位作者
张兵
郭晓丽
吴桃燕
赵同伟
冯从经
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第4期743-748,共6页
为探索斜纹夜蛾蛹畸形发育的生理机制,在室内将斜纹夜蛾幼虫饲养至蛹期,测定了斜纹夜蛾蛹的生物学参数,并采用双向电泳技术对蛹整体可溶蛋白质进行分析。结果表明:畸形蛹率达(18.8±1.2)%,其畸形蛹的发育历期明显短于正常蛹,为(9.5&...
为探索斜纹夜蛾蛹畸形发育的生理机制,在室内将斜纹夜蛾幼虫饲养至蛹期,测定了斜纹夜蛾蛹的生物学参数,并采用双向电泳技术对蛹整体可溶蛋白质进行分析。结果表明:畸形蛹率达(18.8±1.2)%,其畸形蛹的发育历期明显短于正常蛹,为(9.5±0.7)d(P<0.01)。畸形蛹中雌蛹和雄蛹的体重也明显小于正常蛹(P<0.01)。在正常蛹中共检测到约147个蛋白质点,主要集中在分子量1.1×104至7.6×104、等电点3.23至9.80之间。在畸形蛹中共检测到149个蛋白质点,主要集中在分子量1.0×104至7.7×104、等电点3.61至9.61之间。在正常蛹中有45个特异表达蛋白质点,畸形蛹中有47个特异表达蛋白质点。
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关键词
斜纹夜蛾
畸形蛹
双向电泳
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职称材料
题名
亚洲玉米螟酚氧化酶原的原核表达和性质分析
被引量：
2
1
作者
赵同伟
张兵
吕文静
翟会锋
吴桃燕
张石洋
汤小伟
冯从经
机构
扬州大学园艺与植物保护学院植物保护系
江苏省大丰市农业干部学校
江苏省泰州市出入境检验检疫局
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期798-805,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31171895
30971963)
扬州大学科技创新培育基金(2012CXJ064)
文摘
【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的新型杀虫剂提供条件。【方法】利用从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫体内克隆获得PPO基因,构建了pET-28b-PPO原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli中重组表达了亚洲玉米螟PPO蛋白;采用Ni-NAT亲和层析柱快速纯化目的蛋白,进行了Western杂交鉴定;测定分析了重组PPO蛋白激活为PO后的酶学性质以及不同金属离子(Mg2+,Cu2+和Fe2+)对PPO二级结构的影响。【结果】融合蛋白PPO得到了表达和纯化。重组PPO蛋白激活为PO后最适反应温度为30℃,最适pH为7.2,以L-DOPA为底物时PO催化反应的Vmax为140.8 U/mg·min,Km为2.96 mmol/L。Fe2+存在的情况下重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著增加至53.7%±4.6%,α-螺旋结构成分则显著下降至2.6%±1.2%(P<0.05);有Mg2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降,α-螺旋结构成分稍有上升。有Cu2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降为10.0%±1.6%,而α-螺旋结构成分则上升至35.3%±6.9%。【结论】结果说明不同金属离子对重组PPO蛋白的二级结构有显著影响。
关键词
亚洲玉米螟
酚氧化酶原
原核表达
蛋白纯化
酚氧化酶
酶学性质
Keywords
Ostrinia furnacalis
prophenoloxidase（PPO）
prokaryotic expression
protein purification
phenoloxidase（PO）
enzymatic characteristics
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
斜纹夜蛾畸形蛹蛋白质的双向电泳分析
2
作者
苗俊玲
杨俊明
张兵
郭晓丽
吴桃燕
赵同伟
冯从经
机构
扬州大学园艺与植物保护学院植物保护系
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第4期743-748,共6页
基金
国家自然科学基金面上项目(31171895、30971963)
扬州大学科技创新培育基金项目(2012CXJ064)
扬州大学“新世纪人才”优秀青年骨干教师项目
文摘
为探索斜纹夜蛾蛹畸形发育的生理机制,在室内将斜纹夜蛾幼虫饲养至蛹期,测定了斜纹夜蛾蛹的生物学参数,并采用双向电泳技术对蛹整体可溶蛋白质进行分析。结果表明:畸形蛹率达(18.8±1.2)%,其畸形蛹的发育历期明显短于正常蛹,为(9.5±0.7)d(P<0.01)。畸形蛹中雌蛹和雄蛹的体重也明显小于正常蛹(P<0.01)。在正常蛹中共检测到约147个蛋白质点,主要集中在分子量1.1×104至7.6×104、等电点3.23至9.80之间。在畸形蛹中共检测到149个蛋白质点,主要集中在分子量1.0×104至7.7×104、等电点3.61至9.61之间。在正常蛹中有45个特异表达蛋白质点,畸形蛹中有47个特异表达蛋白质点。
关键词
斜纹夜蛾
畸形蛹
双向电泳
Keywords
Spodoptera litura Fabricius
malformed pupa
two-dimensional electrophoresis
分类号
S433.4 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
亚洲玉米螟酚氧化酶原的原核表达和性质分析
赵同伟
张兵
吕文静
翟会锋
吴桃燕
张石洋
汤小伟
冯从经
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
斜纹夜蛾畸形蛹蛋白质的双向电泳分析
苗俊玲
杨俊明
张兵
郭晓丽
吴桃燕
赵同伟
冯从经
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013
0
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