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新城疫强毒特异性反转录荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：3
1
作者 徐敏丽 于江 +7 位作者 逯璐 张玉玉 任素芳 陈智 孙文博 郭立辉 吴家强 张琳 《山东农业科学》 北大核心 2021年第8期112-118,共7页
为建立一种敏感性高、特异性强、成本更低的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)特异性反转录荧光定量PCR(reverse transcription fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测方法,基于对所有已知NDVF基因序列特征的分析,设计了... 为建立一种敏感性高、特异性强、成本更低的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)特异性反转录荧光定量PCR(reverse transcription fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测方法,基于对所有已知NDVF基因序列特征的分析,设计了一对强毒特异性引物,以体外转录制备的RNA标准品为阳性模板,构建了标准曲线,并对该方法的敏感性、特异性和准确性进行了验证。结果表明,基于SYBRGreenⅠ嵌合荧光技术建立的检测方法能够特异性扩增NDV强毒,最低可检测1拷贝/μL的RNA,用于临床毒株的检测结果与序列测定一致,可作为适合大规模监测NDV强毒的方法和工具。 展开更多
关键词 新城疫病毒 强毒 反转录荧光定量PCR 监测
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聚肌胞对禽流感油乳剂疫苗的体液免疫增强作用研究
2
作者 黄艳艳 李悦 +5 位作者 张琳 马鑫鑫 许传田 张秀美 刘思当 吴家强 《山东农业科学》 2017年第12期100-102,143,共4页
为了研究聚肌胞是否能够增强油乳剂灭活疫苗免疫后鸡群的体液免疫应答,将3个不同来源的聚肌胞产品与H5亚型禽流感病毒灭活抗原相混合,使用轻质矿物油乳化制备疫苗,分别免疫21日龄SPF鸡,同时设置添加抗菌肽的疫苗免疫组、常规油乳剂疫苗... 为了研究聚肌胞是否能够增强油乳剂灭活疫苗免疫后鸡群的体液免疫应答,将3个不同来源的聚肌胞产品与H5亚型禽流感病毒灭活抗原相混合,使用轻质矿物油乳化制备疫苗,分别免疫21日龄SPF鸡,同时设置添加抗菌肽的疫苗免疫组、常规油乳剂疫苗免疫组以及不免疫对照组。在免疫后第14、21、28、35 d分别翅下静脉采集SPF鸡抗凝血,通过血凝抑制试验检测鸡血清中禽流感抗体的水平,使用统计学方法评价疫苗中添加聚肌胞对鸡群体液免疫反应的影响。结果发现,添加了聚肌胞或抗菌肽的疫苗免疫后,鸡血清中禽流感抗体水平显著高于普通油苗组。另外,不同来源的聚肌胞产品(PIC-1、PIC-2和PIC-3)免疫增强作用存在差异,以PIC-1免疫增强效果最好。在PIC-1疫苗免疫后,鸡血清抗体增长快,且可维持较高水平。总之,本研究表明聚肌胞是良好的禽病毒性疫苗免疫增强剂;不同厂家的聚肌胞产品质量有差异,应择优使用。 展开更多
关键词 聚肌胞 免疫增强剂 鸡 禽流感 疫苗
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人参茎叶皂甙对鸭禽流感疫苗的免疫增强作用和抗氧化功能的影响 被引量：4
3
作者 杨金保 张琳 +4 位作者 李兆华 李禹涛 吴媛媛 刘红岩 吴家强 《山东农业科学》 2017年第3期128-133,共6页
为探讨人参茎叶皂甙(GSLS)对鸭流感疫苗的免疫增强作用和抗氧化功能的影响,给鸭群饮水口服GSLS,同时接种禽流感疫苗,通过检测血清抗AIV特异性HI效价、免疫器官指数、淋巴细胞增殖转化指数、细胞因子和肠黏膜SIg A水平,评价GSLS的免疫增... 为探讨人参茎叶皂甙(GSLS)对鸭流感疫苗的免疫增强作用和抗氧化功能的影响,给鸭群饮水口服GSLS,同时接种禽流感疫苗,通过检测血清抗AIV特异性HI效价、免疫器官指数、淋巴细胞增殖转化指数、细胞因子和肠黏膜SIg A水平,评价GSLS的免疫增强作用;通过测定血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,评价GSLS对机体抗氧化功能的影响。结果表明:在28和35日龄时,饮水口服中剂量GSLS组鸭血清抗AIV特异性HI效价显著高于对照组(P<0.05),与1份疫苗组相比,免疫后2、3、4周,饮水口服GSLS能诱导机体对0.75份疫苗抗原产生的HI效价提高,但是差异不显著(P>0.05),1份+GSLS组鸭血清抗AIV特异性HI效价显著提高(P<0.05);饮水口服GSLS能显著增强鸭脾脏和法氏囊指数(P<0.05),显著提高受Con A刺激产生的脾淋巴细胞增殖转化指数,显著或不显著提高脾淋巴细胞上清中IFN-γ(Th1)和IL-4(Th2)水平,显著提高鸭肠黏膜SIg A含量;饮水口服中剂量GSLS组血清MDA和SOD含量分别显著低于和高于对照组(P<0.05)。因此,饮水口服GSLS具有增强鸭群对禽流感疫苗的免疫应答水平和机体抗氧化功能的作用。 展开更多
关键词 禽流感疫苗 人参茎叶皂甙 肉鸭 免疫增强作用 抗氧化功能
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免疫增强剂CpG DNA重组质粒对不同日龄SPF鸡H9亚型禽流感灭活疫苗免疫效应的影响
4
作者 房立春 胡宇航 +5 位作者 李月涛 刘涛 亓丽红 吴家强 赵鹏 朱鸿飞 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期97-102,共6页
为分析CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG DNA)对H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)灭活疫苗的免疫增强作用,利用商品化的含有CpG DNA的重组质粒作为AIV-H9灭活抗原的免疫佐剂,经肌内注射1、7、21日龄的SPF鸡,通过检测鸡血清中HI抗体和外周血淋巴细胞CD... 为分析CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG DNA)对H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)灭活疫苗的免疫增强作用,利用商品化的含有CpG DNA的重组质粒作为AIV-H9灭活抗原的免疫佐剂,经肌内注射1、7、21日龄的SPF鸡,通过检测鸡血清中HI抗体和外周血淋巴细胞CD4、CD8基因相对表达量,分析CpG DNA重组质粒对不同日龄SPF雏鸡首次免疫AIV-H9灭活疫苗免疫效果的影响。结果显示:1、7和21日龄SPF鸡首免后,CpG DNA免疫增强剂添加组的HI抗体滴度明显高于未添加组(P≤0.05),HI抗体峰值滴度升高了近2log2滴度,差异极显著(P≤0.01),且上升速度更快;CpG DNA免疫增强剂添加组,在21日龄免疫时的免疫效果明显优于1日龄和7日龄免疫组,表现为HI抗体上升速度更快,峰值更高,离散度更小;首免3周后,7日龄和21日龄SPF鸡CpG DNA免疫增强剂添加组的CD4、CD8基因相对表达量均高于同日龄未添加组,且明显高于1日龄SPF鸡组(P≤0.01)。结果表明,CpG DNA能显著增强鸡对AIV-H9灭活疫苗的特异性体液免疫反应,可以作为高效的免疫增强剂,尤其在21日龄使用时免疫效果更好。本研究为CpG DNA重组质粒在禽流感疫苗上的联合应用以及研制新型复合佐剂疫苗提供了依据。 展开更多
关键词 CPG DNA 免疫增强剂 禽流感 免疫效应
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不同血清型猪链球菌对新西兰兔的致病性研究
5
作者 张树志 刘飞 +9 位作者 王振勇 陈智 张琳 孙文博 张玉玉 丁罗刚 李建达 任素芳 于江 吴家强 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2566-2575,共10页
【目的】探究不同血清型猪链球菌(Streptococcus suis,SS)在新西兰兔体内的分布规律及致病性差异,为猪链球菌病的防治提供参考。【方法】分别采用SS1 ZY194株、SS2 QH株、SS7 ZY188株感染新西兰兔,通过临床症状观察,HE染色分析病理组织... 【目的】探究不同血清型猪链球菌(Streptococcus suis,SS)在新西兰兔体内的分布规律及致病性差异,为猪链球菌病的防治提供参考。【方法】分别采用SS1 ZY194株、SS2 QH株、SS7 ZY188株感染新西兰兔,通过临床症状观察,HE染色分析病理组织变化;利用实时荧光定量PCR检测脏器载菌量;通过试剂盒检测血清与肝脏生化指标变化;利用ELISA检测相关炎症因子的表达水平。【结果】3个试验组中,SS2组新西兰兔的临床症状表现与脏器的病理变化程度最明显。试验组新西兰兔各脏器均载菌,其中SS2组各脏器载菌量高于SS1和SS7组,且脾脏是载菌量最高的器官。各试验组新西兰兔葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCHO)、低密度脂蛋白(LDL)和尿酸(UA)含量极显著或显著高于对照组(P<0.01;P<0.05),SS2和SS7组新西兰兔高密度脂蛋白(HDL)含量极显著低于对照组(P<0.01)。各试验组新西兰兔谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂肪酶(LPS)含量及炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平极显著或显著高于对照组(P<0.01;P<0.05),其中SS2组各指标的含量最高。【结论】不同血清型猪链球菌均可引起新西兰兔发病,其中SS2 QH株致病性最强。试验结果为猪链球菌病的致病机理研究提供借鉴,为临床防治该病提供理论基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 血清型 新西兰兔 致病性
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真空贴体和高氧气调包装对冷鲜猪肉贮藏期品质和微生物的影响
6
作者 李香远 费智国 +7 位作者 杨硕 王钰 张琳 吴家强 丁志勇 于江 任素芳 毛衍伟 《肉类研究》 北大核心 2024年第3期56-63,共8页
分析真空贴体包装(vacuum skin packaging,VSP)和高氧气调包装(high-oxygen modified atmosphere packaging,HiOx-MAP)冷鲜猪肉贮藏期间的pH值、肉色、总挥发性盐基氮含量、硫代巴比妥酸反应物(thiobarbituric acid reactive substance,... 分析真空贴体包装(vacuum skin packaging,VSP)和高氧气调包装(high-oxygen modified atmosphere packaging,HiOx-MAP)冷鲜猪肉贮藏期间的pH值、肉色、总挥发性盐基氮含量、硫代巴比妥酸反应物(thiobarbituric acid reactive substance,TBARS)值、羰基含量、巯基含量、菌落总数、微生物多样性等指标,研究猪肉在0~4℃条件下VSP和HiOx-MAP贮藏过程中品质的变化。结果表明:在整个贮藏期内HiOx-MAP猪肉亮度值(L)和黄度值(b)始终显著高于VSP猪肉(P<0.05);相较于VSP猪肉,贮藏前期的HiOx-MAP猪肉显示出更高的红度值(a),但贮藏后期HiOx-MAP猪肉a显著低于VSP猪肉(P<0.05),颜色稳定性较差,并具有更高的TBARS值、羰基含量和更低的巯基含量(P<0.05);在货架期方面,VSP猪肉和HiOx-MAP猪肉的微生物货架期均为20~25 d,但是从贮藏10 d开始HiOx-MAP猪肉的菌落总数显著高于VSP猪肉(P<0.05);微生物多样性分析结果显示,随着贮藏时间的延长,2种包装猪肉的微生物多样性均呈下降趋势,但HiOx-MAP猪肉的α多样性(操作分类单元数、Chao1指数、Shannon指数)更高,说明相较于VSP猪肉,HiOx-MAP猪肉中的微生物种类和多样性更为丰富;当菌落总数接近国家标准规定上限时,HiOx-MAP猪肉中的优势菌群为明串珠菌属、沙雷氏菌属和假单胞菌属,而VSP猪肉的优势菌群为肉食杆菌属。总体而言,在短期贮藏销售(10 d内)时使用HiOx-MAP能够维持良好的肉色,VSP能更好维持猪肉品质并延长货架期。 展开更多
关键词 冷鲜猪肉 真空贴体包装 高氧气调包装 微生物多样性 肉品品质
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不同猪瘟免疫程序对仔猪母源抗体水平的影响 被引量：18
7
作者 吴家强 张学武 +6 位作者 李俊 徐绍建 李坤 于江 刘洋 周顺 王金宝 《中国动物检疫》 CAS 2010年第11期46-48,共3页
本研究采用猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，对应用不同猪瘟免疫程序的猪场进行仔猪母源抗体水平检测。结果显示，在20日龄以内仔猪母源抗体的OD630平均值和阳性率均维持较高的水平，仔猪能够获得较好的母源抗体保护，避免猪瘟病毒的早期... 本研究采用猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，对应用不同猪瘟免疫程序的猪场进行仔猪母源抗体水平检测。结果显示，在20日龄以内仔猪母源抗体的OD630平均值和阳性率均维持较高的水平，仔猪能够获得较好的母源抗体保护，避免猪瘟病毒的早期感染。随着日龄增长，仔猪母源抗体逐渐下降，尤其在断奶后一周（30-40日龄）下降趋势最为显著。本研究可为本地区规模化猪场猪瘟免疫程序的制定尤其是仔猪首免日龄的确定提供参考依据。 展开更多
关键词 猪瘟 母源抗体 ELISA 免疫程序
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天然蒙脱土和石墨的改性及其吸附性能研究 被引量：5
8
作者 吴家强 马宏瑞 +1 位作者 魏俊飞 焦文娟 《非金属矿》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期61-63,共3页
实验研究了天然蒙脱土和石墨的改性,以及改性后的有机蒙脱土和膨胀石墨对油的吸附能力和处理含油废水的效果。结果表明,有机蒙脱土吸油能力比天然蒙脱土大大提高,而且随着改性剂用量的增大,吸附能力迅速增加。用浓硫酸-H2O2和浓硫酸-KM... 实验研究了天然蒙脱土和石墨的改性,以及改性后的有机蒙脱土和膨胀石墨对油的吸附能力和处理含油废水的效果。结果表明,有机蒙脱土吸油能力比天然蒙脱土大大提高,而且随着改性剂用量的增大,吸附能力迅速增加。用浓硫酸-H2O2和浓硫酸-KMnO4改性分别制备的膨胀石墨,吸油能力基本一致,但是不同膨化温度对石墨吸油能力影响显著,400℃以上时,吸油能力很强。将有机蒙脱土和膨胀石墨处理含油废水比较,膨胀石墨维持高效处理的时间比有机蒙脱土长。 展开更多
关键词 改性蒙脱土 膨胀石墨 含油废水 吸附
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循环流化床热解油田采油污泥的实验研究 被引量：2
9
作者 吴家强 马宏瑞 +1 位作者 许光文 卞卫国 《西安石油大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第6期88-92,11,共5页
以新疆克拉玛依油田采油污泥为对象,将煤与其混合后考察了混合物的失水情况,并采用热重分析仪和小型循环流化床热解反应器研究了混合物的热解过程及其热解效果.结果表明,与煤混合后油泥的干燥速度明显加快,干燥后的混合物90%以上粒径分... 以新疆克拉玛依油田采油污泥为对象,将煤与其混合后考察了混合物的失水情况,并采用热重分析仪和小型循环流化床热解反应器研究了混合物的热解过程及其热解效果.结果表明,与煤混合后油泥的干燥速度明显加快,干燥后的混合物90%以上粒径分布在1～6 mm范围内.混合物热解主要经历了轻质组分挥发、重组分快速热解失重和缓慢失重3个阶段.流化床热解结果表明,在600℃下热解3 min时,油、气总产率最高. 展开更多
关键词 含油污泥 热解 热重分析 循环流化床
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细胞培养对PRRSV-SD分离株滴度的影响 被引量：3
10
作者 吴家强 颜世敢 +3 位作者 胡北侠 任素芳 黄艳艳 张秀美 《山东农业科学》 2002年第6期41-42,共2页
猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)仍然是危害世界养猪业的主要疾病之一,严重制约着养猪业的发展。PRRSV的增殖受到多重因素的影响,其中细胞培养是PRRSV增殖的基础。通过实验探讨血清浓度、培养基pH值、细胞密度对PRRSV-SD滴度的影响,筛选出最... 猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)仍然是危害世界养猪业的主要疾病之一,严重制约着养猪业的发展。PRRSV的增殖受到多重因素的影响,其中细胞培养是PRRSV增殖的基础。通过实验探讨血清浓度、培养基pH值、细胞密度对PRRSV-SD滴度的影响,筛选出最佳培养条件,为PRRS疫苗研制打下良好基础。 展开更多
关键词 PRRSV-SD分离株 细胞培养 病毒滴度 猪 繁殖呼吸综合征 病毒增殖
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老病新谈 仔猪腹泻病 被引量：1
11
作者 吴家强 王金宝 郭义辉 《中国动物检疫》 CAS 2012年第1期58-59,共2页
根据近期仔猪腹泻疫情的新流行特点,本文对其临床症状、病理变化、检测诊断、综合防治进行了阐述。本研究可为本地区仔猪传染性腹泻病的诊断与防治提供参考依据。
关键词 仔猪腹泻 流行特点 诊断 综合防治
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6株H9N2亚型禽流感病毒的分子演化和抗原变异分析 被引量：10
12
作者 黄艳艳 李悦 +4 位作者 张琳 王进圣 吴福杰 吴家强 刘思当 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2205-2214,共10页
H9N2亚型禽流感持续在我国鸡群中广泛流行,为了明确2017年山东省聊城市一肉鸡场H9N2亚型禽流感病毒的分子演化和抗原变异情况,对6株H9N2亚型病毒分离株进行了基因扩增、序列测定和进化分析,并分别使用病毒分离株和疫苗株抗原进行血凝抑... H9N2亚型禽流感持续在我国鸡群中广泛流行,为了明确2017年山东省聊城市一肉鸡场H9N2亚型禽流感病毒的分子演化和抗原变异情况,对6株H9N2亚型病毒分离株进行了基因扩增、序列测定和进化分析,并分别使用病毒分离株和疫苗株抗原进行血凝抑制试验,比较免疫鸡血清的抗体效价差异。结果如下:NCBI Blastn分析表明,与各分离株基因同源性最高的序列分别来源于山东、河北、上海、江苏、浙江、江西、湖南、广东和日本等地的分离株,表明H9N2亚型禽流感病毒传播范围广,基因重排活跃。各基因的系统进化分析表明,分离株的8个基因片段分别与禽流感病毒欧亚分支的A/duck/HongKong/Y280亚系、A/quail/HongKong/G1/97亚系以及A/chicken/Shanghai/F/98亚系进化关系密切。从病毒基因型上来分析,6株病毒均隶属于2010年以来在国内鸡群中广泛流行的G57基因型。与耐药性相关的氨基酸位点分析表明,病毒M2蛋白存在S31N变异,表明病毒对离子通道蛋白抑制剂耐药。对1 000份疫苗免疫鸡血清进行血凝抑制抗体效价的检测,发现H9N2亚型禽流感分离株抗原与疫苗用标准抗原相比,所测得的血凝抑制抗体滴度平均低1~2log2,表明二者HA抗原性略有差异。总之,2017年在该肉鸡场流行的这6株H9N2亚型禽流感病毒仍然为G57基因型,分离株的HA抗原反应性与疫苗株略有差异。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 流行病学 系统进化 抗原性
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山东省猪腹泻病例中PEDV、TGEV和PRV的感染调查与分析 被引量：16
13
作者 王淞 曾昊 +10 位作者 陈智 焦安琪 张树金 于江 孙文博 张玉玉 陈蕾 杜以军 李俊 吴家强 王金宝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2165-2170,共6页
为了解山东省规模化猪场由猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪伪狂犬病毒(PRV)引起猪病毒性腹泻的流行情况,自2014年1月至2016年12月,对来自山东省各地规模化猪场的猪腹泻病料(共3 035份)进行PCR检测。结果显示,PEDV... 为了解山东省规模化猪场由猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪伪狂犬病毒(PRV)引起猪病毒性腹泻的流行情况,自2014年1月至2016年12月,对来自山东省各地规模化猪场的猪腹泻病料(共3 035份)进行PCR检测。结果显示,PEDV、PRV和TGEV阳性率分别为67.49%、9.33%和3.29%;3年间,PEDV阳性率在2014年第四季度最低,为48.15%,2015年第四季度阳性率最高,为88.57%,2016年各季度阳性率相对2015年呈波动下降趋势;TGEV阳性率在2014年第四季度最高,为18.52%,2015年第三季度阳性率为15.38%,2016年第一季度阳性率为6.67%,其他季度未检测出阳性病料;PRV阳性率在2016年第二季度最高,为15.68%,除2014年第一季度未检出阳性病料外,2014年第二季度阳性率最低,为2.56%。通过对69份被动送检的病料进行PEDV、TGEV和PRV混合感染检测发现,这部分病料中PEDV、TGEV、PRV阳性率分别为86.96%、5.80%和37.68%;总单独感染率为69.57%,PEDV、TGEV和PRV单独感染率分别为57.97%、1.45%和10.14%;总混合感染率为30.43%,PEDV/PRV、PEDV/TGEV和TGEV/PRV混合感染率分别为26.09%、2.90%和1.45%;总单独感染率比总混合感染率高。结果表明,山东省存在PEDV、PRV和TGEV 3种病毒流行,存在PEDV/TGEV、TGEV/PRV和PEDV/PRV的混合感染,混合感染中主要为PEDV/PRV混合感染,不存在PEDV/PRV/TGEV的混合感染。目前PEDV是引起山东省猪病毒性腹泻的主要病因,本试验结果可为山东省猪病毒性腹泻的诊断和控制提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪伪狂犬病毒 调查与分析
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鲁中地区猪高热性疾病的病理变化及病原学调查研究 被引量：5
14
作者 刘月月 吴家强 +9 位作者 任庆海 张绍武 吴好庭 张玉玉 赵鹏伟 彭军 李俊 杜以军 王金宝 刘思当 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1917-1924,共8页
为研究鲁中地区猪高热性疾病的病理变化及主要发病原因,对2011年1月-2012年3月患高热性疾病的56个患病猪群109头病猪进行了临诊症状及剖检病变观察,并对发病猪群进行追踪调查,采集363份发病猪群的血清,用ELISA方法检测血清样品的CSFV、P... 为研究鲁中地区猪高热性疾病的病理变化及主要发病原因,对2011年1月-2012年3月患高热性疾病的56个患病猪群109头病猪进行了临诊症状及剖检病变观察,并对发病猪群进行追踪调查,采集363份发病猪群的血清,用ELISA方法检测血清样品的CSFV、PRRSV及PCV2抗体,用RT-PCR和PCR方法检测病料中这3种病原,并对病料进行病理组织学及免疫组化检测。结果显示:患高热性疾病的猪群均已免疫过CSF、部分免疫过PRRS弱毒活疫苗,但均未进行PCVD疫苗免疫;发病猪群的CSF、PRRS及PCV2均有较高的抗体阳性率;病猪以淋巴组织急性炎症、间质性肺炎、病毒性脑炎的病变为主,其病变率分别为92.3%、76.1%和66.1%;CSFV、PRRSV和PCV2的病原检出率分别为30.27%、66.97%、41.28%,其中CSFV与PRRSV、CSFV与PCV2、PRRSV与PCV2二重感染检出率分别为16.51%、6.42%、28.44%,三者共感染检出率为4.59%,8.26%的病料未检测到这3种病原,属其它病原感染所致。序列分析表明CSFV流行株正在向着远离猪瘟兔化弱毒疫苗的方向发展,PRRSV均为高致病性变异毒株,PCV2则为毒力较强的PCV2b型。CSFV、PRRSV、PCV2是目前导致鲁中地区猪高热性疾病的主要病原,其中以PRRSV变异强毒感染最为常见,共感染是导致重症型猪高热性疾病的主要原因,病例还多见支原体、副猪嗜血杆菌等细菌病继发感染的病变,故该区域猪高热性疾病为多病原混合感染所致。 展开更多
关键词 猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 猪圆环病毒病 病理变化 病原学
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猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：9
15
作者 李建达 于江 +12 位作者 张玉玉 任素芳 陈蕾 郭立辉 孙文博 陈智 王淞 刘俊珍 杜以军 李俊 杨灵芝 王金宝 吴家强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3107-3113,共7页
试验根据猪链球菌2型荚膜多糖（CPS）抗原设计 CPS2J 基因特异性引物,建立猪链球菌2型实时荧光定量 PCR 检测方法。结果显示,该方法的标准曲线为 y=-3.073x＋36.87,r=0.995,熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示,该方法可以检测出... 试验根据猪链球菌2型荚膜多糖（CPS）抗原设计 CPS2J 基因特异性引物,建立猪链球菌2型实时荧光定量 PCR 检测方法。结果显示,该方法的标准曲线为 y=-3.073x＋36.87,r=0.995,熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示,该方法可以检测出模板最低浓度为1.0×10^1拷贝/μL,是普通 PCR 的10倍；特异性试验显示,对猪链球菌2型具有良好的特异性,能够区分其他血清型猪链球菌和其他细菌；重复性试验变异系数为0.37%-0.63%,均低于2.5%。临床检测显示该方法的敏感性明显高于常规 PCR 方法和细菌分离的方法。以上结果表明,本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好,有利于对猪链球菌2型的快速检测。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 实时荧光定量PCR 敏感性 特异性 重复性
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猪乙型脑炎病毒E基因的克隆与序列分析 被引量：7
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作者 丛晓燕 吴家强 +4 位作者 王怀忠 徐文 张秀美 王金宝 陈溥言 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期71-73,共3页
根据GenBank中猪乙型脑炎病毒SA14-14-2基因序列设计2对引物,从分离的猪源乙型脑炎病毒SD-001株的细胞培养物中扩增出包括E基因全长的两段基因,将扩增的目的片段进行克隆与序列分析。结果表明,所克隆的E基因编码结构域(Domain)区段与SA1... 根据GenBank中猪乙型脑炎病毒SA14-14-2基因序列设计2对引物,从分离的猪源乙型脑炎病毒SD-001株的细胞培养物中扩增出包括E基因全长的两段基因,将扩增的目的片段进行克隆与序列分析。结果表明,所克隆的E基因编码结构域(Domain)区段与SA14-14-2、P3、Beijing-1等毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性分别达97.2%与96.8%以上,属于Ⅲ型乙型脑炎病毒,与疫苗株SA14-14-2的Domain区相比,共有8个氨基酸位点变异。 展开更多
关键词 猪乙型脑炎病毒 E基因 序列分析
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德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株自溶活性的比较研究 被引量：3
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作者 张玉玉 于江 +4 位作者 马建军 苏文政 黄保华 吴家强 王可 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期18-20,共3页
采用核酸溶出检测法检测了德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株在不同生长阶段下的自溶活性变化,并比较了12株菌株在对数生长中期的自溶活性差异。结果表明,德式乳杆菌保加利亚亚种对数生长期的菌体细胞自溶活性最高,稳定期和衰退期的菌体细胞... 采用核酸溶出检测法检测了德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株在不同生长阶段下的自溶活性变化,并比较了12株菌株在对数生长中期的自溶活性差异。结果表明,德式乳杆菌保加利亚亚种对数生长期的菌体细胞自溶活性最高,稳定期和衰退期的菌体细胞自溶活性依次降低;不同菌株在对数生长中期的自溶活性差异显著,筛选到3株高自溶活性菌株和4株低自溶活性菌株;扫描电镜观察显示高自溶活性菌株自溶菌体细胞表面出现孔洞,而低自溶活性菌株自溶菌体细胞表面出现轻微萎缩。本研究为德氏乳杆菌保加利亚亚种自溶活性的调控和改造以及开发优良酸乳发酵剂提供了理论依据。 展开更多
关键词 德式乳杆菌保加利亚亚种 自溶活性 核酸溶出检测法 生长阶段
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HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3
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作者 刘纪玉 杜以军 +9 位作者 刘星 吴家强 李俊 丛晓燕 赵新华 徐绍建 孙文博 时建立 单虎 王金宝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期1-7,共7页
本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRI... 本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时荧光定量RT-PCR方法,检测FMDV L蛋白对Ⅰ型IFN效应因子的抑制效果。HeLa细胞在转染FMDV L蛋白真核表达质粒,并受到Ⅰ型IFN刺激后ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR的相对表达量较转染空载体或表达GST的真核表达质粒明显降低。本试验建立了HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的实时荧光定量RT-PCR检测方法,为在mRNA水平上对HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于FMDV L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路的研究中。 展开更多
关键词 实时荧光定量RT-PCR SYBR GreenⅠ 口蹄疫病毒 L蛋白 干扰素
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鸡三种天然免疫相关受体和配体荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：3
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作者 黄艳艳 高丹丹 +6 位作者 许传田 朱曼玲 杨少华 黄庆华 张琳 张秀美 吴家强 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期12-17,共6页
为建立检测鸡天然免疫相关受体(Ch-MDA5、Ch-TLR3和Ch-TLR7)及其相应配体(MAVS、TRIF和MyD88)的荧光定量PCR方法并评价其应用效果,设计和筛选特异性PCR引物,制备各基因的质粒标准品,绘制荧光定量PCR的标准曲线,并对方法的灵敏度、重复... 为建立检测鸡天然免疫相关受体(Ch-MDA5、Ch-TLR3和Ch-TLR7)及其相应配体(MAVS、TRIF和MyD88)的荧光定量PCR方法并评价其应用效果,设计和筛选特异性PCR引物,制备各基因的质粒标准品,绘制荧光定量PCR的标准曲线,并对方法的灵敏度、重复性和特异性进行检验。结果表明,所建立的检测方法敏感度高、特异性强、检测线性范围广、重复性好。应用建立的方法检测新城疫油乳剂灭活苗免疫SPF鸡后上述基因表达的变化,发现免疫后6h各基因的表达水平达到峰值,表明疫苗免疫迅速有效地激活了机体的天然免疫应答。建立了与鸡抗病毒感染天然免疫相关的3种细胞受体和相应配体的定量检测方法,可应用于病毒致病机制、鸡用新型疫苗、免疫增强剂以及抗病毒药物的研究与开发。 展开更多
关键词 鸡 天然免疫 受体与配体 检测 实时荧光定量PCR
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柞蚕抗菌肽Moricin的抑菌活性研究 被引量：8
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作者 张玉玉 王可 +3 位作者 黄保华 于江 王金宝 吴家强 《山东农业科学》 2016年第1期119-122,共4页
本研究在对柞蚕抗菌肽Moricin基因成功进行克隆及毕赤酵母表达的基础上,对其生物活性进行了研究。结果表明,抗菌肽Moricin对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌临床分离菌株的抑菌圈直径为12~21 mm,表明Mo... 本研究在对柞蚕抗菌肽Moricin基因成功进行克隆及毕赤酵母表达的基础上,对其生物活性进行了研究。结果表明,抗菌肽Moricin对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌临床分离菌株的抑菌圈直径为12~21 mm,表明Moricin对这些菌株均具有较强的抑菌活性,对临床耐药菌株的抑菌作用尤其明显。Moricin对上述菌株的最低抑菌浓度为3.9~15.6μg/m L。Moricin对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广谱抑菌活性使其在畜禽疫病防治和生产中具有潜在的重要价值。 展开更多
关键词 抗菌肽Moricin 临床分离菌株 抑菌活性 最低抑菌浓度
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