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汉坦病毒重组核蛋白抗体用于鼠肺组织病毒抗原的检测 被引量:3
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作者 赵凤玲 陈锦英 +2 位作者 吕莉琨 杨东靖 李力 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期510-513,共4页
目的纯化汉坦病毒(HV)SEO型L99株重组核蛋白(rNP),制备抗体用于鼠肺组织HV抗原的检测。方法重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET32a-L99S经IPTG诱导表达rNP,采用Ni亲和层析方法纯化,纯化蛋白免疫日本大耳白兔,获取抗血清用于间接免疫荧光法(IFA... 目的纯化汉坦病毒(HV)SEO型L99株重组核蛋白(rNP),制备抗体用于鼠肺组织HV抗原的检测。方法重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET32a-L99S经IPTG诱导表达rNP,采用Ni亲和层析方法纯化,纯化蛋白免疫日本大耳白兔,获取抗血清用于间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺组织的HV抗原;并与病人混合血清作为一抗的IFA结果进行比较,部分标本进一步用RT-PCR法进行验证。结果rNP表达量占菌体总蛋白的52.2%,纯化蛋白的总回收率为22.9%;纯化蛋白Western blot分析为单带,纯度达95%以上,用其制备多克隆抗体滴度达1∶512000。IFA检测59份鼠肺标本,用兔rNP抗体和病人混合血清作为一抗其阳性率分别为23.7%和16.9%;两者结果不一致的6份鼠肺经RT-PCR检测HV核酸,均与兔rNP抗体的IFA结果相一致。结论采用rNP抗体进行IFA检测,可显著地提高鼠类HV感染监测的准确性,值得推广使用。 展开更多
关键词 汉坦病毒 重组核蛋白 鼠肺 间接免疫荧光
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