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苹果酸酶2乙酰化调控脑胶质瘤细胞增殖的机制 被引量:1
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作者 张成 牛朝诗 +2 位作者 梅加明 司文霞 魏祥品 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第6期920-924,共5页
目的研究苹果酸酶2(ME2)的乙酰化修饰在恶性脑胶质瘤细胞系U87MG增殖中的功能及其分子机制。方法基于序列保守性并结合质谱数据库,预测ME2的乙酰化修饰位点,再构建点突变体,转染细胞,通过免疫沉淀(IP)和Western blot确定修饰位点;通过2... 目的研究苹果酸酶2(ME2)的乙酰化修饰在恶性脑胶质瘤细胞系U87MG增殖中的功能及其分子机制。方法基于序列保守性并结合质谱数据库,预测ME2的乙酰化修饰位点,再构建点突变体,转染细胞,通过免疫沉淀(IP)和Western blot确定修饰位点;通过293T细胞纯化ME2野生型和突变体,检测乙酰化修饰对ME2酶活的影响;通过共转染、富集纯化并结合酶活实验,检测去乙酰化酶Sirtuin3(SIRT3)对ME2酶活、细胞内活性氧(ROS)及NADH水平的影响;在U87MG细胞中用shRNA敲低内源ME2后,回转野生型和模拟乙酰化突变型,检测ME2的乙酰化对细胞增殖的影响,并通过裸鼠成瘤在动物水平验证;通过Western blot在恶性脑胶质瘤临床样本中检测癌与癌旁组织中ME2的乙酰化水平差异。结果K156是ME2主要的乙酰化修饰位点,该位点的乙酰化会抑制ME2活性并抑制U87MG细胞增殖。SIRT3去乙酰化ME2,提高ME2活性,促进NADH的生成,降低细胞内ROS水平。结论SIRT3调控的ME2乙酰化修饰通过提高自身酶的活性,上调细胞NADH水平,降低ROS水平,从而促进U87MG细胞增殖。 展开更多
关键词 代谢酶 乙酰化 苹果酸酶 脑胶质瘤
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白藜芦醇治疗阿尔茨海默病的作用机制:基于网络药理学方法 被引量:6
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作者 方迎艳 苏振宏 +3 位作者 司文霞 刘圆呈 李洁 曾鹏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期10-19,共10页
目的基于网络药理学方法探讨白藜芦醇(RES)治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法利用PubChem、BATMANTCM、Genecards、AD、TTD、String 11.0、AlzData、SwissTargetPrediction、Metascape等数据库,获得RES所有作用靶点和人类AD相关的靶... 目的基于网络药理学方法探讨白藜芦醇(RES)治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法利用PubChem、BATMANTCM、Genecards、AD、TTD、String 11.0、AlzData、SwissTargetPrediction、Metascape等数据库,获得RES所有作用靶点和人类AD相关的靶点,使用Venny 2.1工具取交集,获得RES治疗AD的靶点。构建靶点蛋白质相互作用网络,基因本体论(GO)与KEGG通路富集分析,使用Cytoscape 3.7.1构建RES治疗AD的“靶点-信号通路”网络图。使用SwissDock(http://www.swissdock.ch/docking)服务器进行分子对接验证。通过蛋白免疫印迹检测RES处理AD细胞模型(293Tau细胞)的pS396、pS199、Tau5、CDK5、糖原合酶激酶3β(GSK3β)和p-GSK3β的蛋白水平。结果分析得到RES作用靶点182个,AD相关靶点525个,RES治疗AD的靶点36个,其中34.6%的靶点为蛋白质修饰酶、27.7%的靶点为代谢物相互转化酶、13.8%的靶点为基因特异性转录调节因子、10.3%的靶点为转运蛋白。RES治疗AD的核心关键靶点为INS、APP、ESR1、MMP9、IGF1R、CACNA1C、MAPT(即微管相关蛋白Tau)、MMP2、TGFB1与GSK3B。GO生物学过程富集分析显示,RES治疗AD主要涉及对β-淀粉样蛋白的反应、转移酶活性的正调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、行为、学习或记忆、老化、跨膜转运的调控等多个生物功能。KEGG通路富集分析表明富集最显著的信号通路为阿尔茨海默病通路、PI3K-AKT信号通路、cGMP-PKG信号通路、MAPK信号通路等。分子对接结果显示,RES与ESR1、GSK3B、MMP9、IGF1R、APP与INS结合较好。蛋白免疫印迹结果显示,50μmol/L RES处理12 h可以通过调控CDK5、核心靶点GSK3β活性显著降低293Tau细胞pS396和pS199水平(P<0.001)。结论RES可以通过Aβ、Tau病理过程治疗AD,可通过调控CDK5与GSK3β改善AD病理改变。 展开更多
关键词 网络药理学 白藜芦醇 阿尔茨海默病 作用机制
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