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阿勒泰羊胚胎PDGFD基因编辑研究
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作者 马秀玲 张欣如 +7 位作者 陈莹 梁红艳 古丽米热·阿布都热依木 汪立芹 林嘉鹏 李伟健 王旭光 吴阳升 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1700-1711,共12页
旨在用CRISPR/Cas9技术生产阿勒泰羊血小板源生长因子D(PDGFD)基因SNP位点的基因编辑胚胎。本研究根据阿勒泰羊PDGFD基因脂尾性状相关的3个SNPs位点设计合成5个sgRNA (PDGFD-314-sgRNA2、PDGFD-314-sgRNA5、PDGFD-410-sgRNA、PDGFD-397-... 旨在用CRISPR/Cas9技术生产阿勒泰羊血小板源生长因子D(PDGFD)基因SNP位点的基因编辑胚胎。本研究根据阿勒泰羊PDGFD基因脂尾性状相关的3个SNPs位点设计合成5个sgRNA (PDGFD-314-sgRNA2、PDGFD-314-sgRNA5、PDGFD-410-sgRNA、PDGFD-397-sgRNA2、PDGFD-397-sgRNA7),结合Cas9核酸酶进行体外活性分析。电转阿勒泰羊体外受精4~5 h的胚胎Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物(RNP),每组35~40枚,3次重复,培养至第7天统计囊胚率,进行基因组靶基因位点扩增及测序分析。受精卵电转PDGFD和MSTN基因(非PDGFD基因)同源重组基因编辑材料,培养至第7天统计囊胚率及进行PDGFD sgRNA脱靶效率分析。结果表明,5个sgRNA在体外均有高效的切割活性;电转受精卵的存活率和卵裂率与对照组差异均不显著(P>0.05),但电转组囊胚率显著低于对照组(P<0.05)。PDGFD-397-sgRNA2在绵羊体外胚胎中的编辑效率均高于其它sgRNAs。PDGFD-397-sgRNA2在绵羊基因组上错配1个碱基的脱靶位点有19个,覆盖在外显子区的基因有CFDP1,APOO,PCDH11X等;错配2个碱基的位点有31个,覆盖在外显子区的基因有TIMM17B、C1H1orf228和TLL1等。电转PDGFD和MSTN基因同源重组编辑材料,两组胚胎的存活率和卵裂率差异不显著(P>0.05),但前者的囊胚率显著低于后者(P<0.0 5)。本研究结果表明,阿勒泰羊PDGFD基因尾脂性状相关SNP位点的CRISPR/Cas9编辑显著降低体外胚胎的囊胚率,因此,PDGFD基因可能影响绵羊早期胚胎的发育。综上所述,PDGFD基因可能对绵羊胚胎的早期发育有着重要的作用。 展开更多
关键词 电转 CRISPR/Cas9 PDGFD 胚胎发育
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尿促性素对中国美利奴羊卵泡诱导发育及活体采卵效果的影响研究
2
作者 吴向利 陈莹 +6 位作者 薛利 古丽米热·阿布都热依木 何学城 李勇文 汪立芹 毋状元 林嘉鹏 《中国畜禽种业》 2025年第5期31-40,共10页
该试验通过对104只无繁殖疾病中国美利奴羊(以下简称:中美羊)注射促卵泡生成素(Follicle-stimulat-ing hormone,FSH)及尿促性素(Human menopausal gonadotropin,HMG)激素处理、不同剂量HMG处理、不同放栓时间、不同采卵时间及不同品种... 该试验通过对104只无繁殖疾病中国美利奴羊(以下简称:中美羊)注射促卵泡生成素(Follicle-stimulat-ing hormone,FSH)及尿促性素(Human menopausal gonadotropin,HMG)激素处理、不同剂量HMG处理、不同放栓时间、不同采卵时间及不同品种等方面进行比较卵泡发育情况,分析中美羊平均卵泡数、平均获得卵数及可用卵数等数据,结果显示:与FSH相比,HMG对中美羊活体采卵效果无显著影响(P>0.05)。中美羊放栓7d或放栓13 d均不影响卵母细胞回收数量(P>0.05)。注射300 IUHMG的平均卵泡数、平均获得卵数和可用卵数均极显著低于注射400IU和500 IUHMG组(P<0.01),但400IU与500IU之间无显著差异(P>0.05)。最后一次注射HMG后间隔12h或36h均不会对中美羊活体采卵回收效果产生影响(P>0.05)。HMG能促进中美羊和阿勒泰羊卵泡发育,但两者之间卵母细胞回收数量差异不显著(P>0.05)。可见,中美羊活体采卵时不同的放栓时间不影响卵母细胞回收数量,同时注射适量的HMG能够诱导卵泡发育。 展开更多
关键词 尿促性素:中国美利奴羊 卵泡 活体采卵 卵母细胞
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FKBP 5基因对绵羊卵泡颗粒细胞功能的影响
3
作者 古丽米热·阿布都热依木 张欣如 +5 位作者 吴阳升 陈莹 汪立芹 徐新明 黄俊成 林嘉鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3947-3956,共10页
旨在探讨FKBP 5在绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)中的潜在功能。本研究从乌鲁木齐市华凌屠宰场的20个2岁左右处于性成熟阶段的阿勒泰羊卵巢中分离GCs。将试验分为4组:GC(空白对照)、GC+NC(转染siRNA-NC)、GC+si FKBP 5(转染siRNA-FKBP5)、GC+si ... 旨在探讨FKBP 5在绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)中的潜在功能。本研究从乌鲁木齐市华凌屠宰场的20个2岁左右处于性成熟阶段的阿勒泰羊卵巢中分离GCs。将试验分为4组:GC(空白对照)、GC+NC(转染siRNA-NC)、GC+si FKBP 5(转染siRNA-FKBP5)、GC+si FKBP 5+LH(促黄体生成素处理转染siRNA-FKBP5)。利用细胞免疫荧光检测FKBP5蛋白在GCs中的定位。通过EdU、Tunel和Western blot检测其对细胞增殖、凋亡的影响;通过Western blot检测其对AKT和ERK信号通路的影响;通过ELISA检测其对E2、P4水平的影响。结果表明,FKBP5表达于GCs细胞质中。FKBP 5表达量随着LH浓度不断升高;5 IU·mL-1 LH作用4 h,FKBP 5表达较高(P<0.001)。干扰FKBP 5后显著抑制了细胞增殖,并显著降低PCNA蛋白表达量(P<0.001);显著促进了细胞凋亡,增加了BAX的表达并减少了Bcl-2的表达(P<0.001);显著抑制了GCs中AKT和ERK信号通路的激活以及E2和P4的分泌(P<0.001)。LH处理部分改善了干扰FKBP 5对GCs的影响(P<0.05)。本研究结果表明,FKBP 5影响绵羊GCs的增殖、凋亡、AKT和ERK信号通路以及E2和P4的分泌,其功能受LH的影响。这些结果为进一步研究FKBP5在绵羊卵泡发育中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 FKBP 5 颗粒细胞 细胞增殖凋亡 AKT和ERK信号通路 类固醇
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