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家蚕生物反应器表达传染性法氏囊病病毒多聚蛋白的免疫原性研究 被引量:2
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作者 卢觅佳 于涟 +1 位作者 谢荣辉 张朝政 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期545-552,共8页
将传染性法氏囊病病毒(IBDV)浙江分离株JD1的多聚蛋白(VP2/4/3)基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,重组载体与杆状病毒Bm-BacPAK6的线性化基因组DNA共转染家蚕细胞后,将获得的重组病毒BacPAK-A感染家蚕5龄起幼虫进行虫体内表达... 将传染性法氏囊病病毒(IBDV)浙江分离株JD1的多聚蛋白(VP2/4/3)基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,重组载体与杆状病毒Bm-BacPAK6的线性化基因组DNA共转染家蚕细胞后,将获得的重组病毒BacPAK-A感染家蚕5龄起幼虫进行虫体内表达.用感染后第5日的蚕血淋巴作抗原制备油佐剂苗免疫14日龄非免疫鸡,安全性试验表明,接种1倍和5倍免疫剂量的试验鸡在临床反应和剖检中均无异常变化;在免疫-攻毒试验中设杆状病毒表达的IBDVVP2蛋白和正常蚕血淋巴免疫对照组,并于28日龄加强免疫,25d后用IBDV强毒BC6/85攻击.通过临床保护率、病理保护率及血清学试验表明,基于多聚蛋白制备的疫苗更成功地诱导了体液免疫应答,比VP2蛋白对IBDV强毒的攻击具有更高的保护力,更适于作为IBD基因工程亚单位疫苗的抗原成分. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) 多聚蛋白(VP2/4/3) 家蚕杆状病毒载体 家蚕表达 安全性 免疫原性
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传染性法氏囊病病毒VP2基因在家蚕中的表达 被引量:1
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作者 卢觅佳 王莹飞 +2 位作者 李建荣 金勇丰 于涟 《动物医学进展》 CSCD 2002年第6期61-65,共5页
传染性法氏囊病病毒 (IBDV)能引起以淋巴细胞衰竭为特征的免疫抑制性疾病。IBDV的主要结构蛋白 VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原 ,在 VP2上的点突变是造成 IBDV抗原漂变的主要原因。为研究 VP2作为 IBDV亚单位疫苗的潜力 ,本实验将 IBDV ... 传染性法氏囊病病毒 (IBDV)能引起以淋巴细胞衰竭为特征的免疫抑制性疾病。IBDV的主要结构蛋白 VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原 ,在 VP2上的点突变是造成 IBDV抗原漂变的主要原因。为研究 VP2作为 IBDV亚单位疫苗的潜力 ,本实验将 IBDV JD1株的 VP2基因重组于家蚕杆状病毒转移载体 p Bac PAK8中 ,将重组载体 p Bac PAK-VP2与病毒 Bm-Bac PAK6的线性化 DNA共转染家蚕培养细胞 ,获得重组病毒 Bac PAK-VP2。DIG点杂交表明重组病毒基因组中含有 VP2基因。重组病毒感染家蚕 5龄幼虫后 ,用 EL ISA、SDS-PAGE和 Western blotting检测蚕血淋巴中重组 VP2蛋白的相对表达量及免疫反应性。结果表明重组 VP2蛋白具有免疫反应性 ,感染后 5~ 6 展开更多
关键词 杆状病毒载体 传染性法氏囊病病毒 VP2基因 家蚕 表达
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鸡白细胞介素2原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:5
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作者 于涟 谢荣辉 +2 位作者 卢觅佳 黄耀伟 李建荣 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期10-13,共4页
鸡白细胞介素2(IL-2)是一种在机体免疫调节中具有多种功能的细胞因子。本研究将萧山鸡白细胞介素2基因克隆入原核表达载体pET-28b,获得了重组表达载体pET-28b-IL-2,将此重组表达载体转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达萧山鸡IL-2。SDS-PAG... 鸡白细胞介素2(IL-2)是一种在机体免疫调节中具有多种功能的细胞因子。本研究将萧山鸡白细胞介素2基因克隆入原核表达载体pET-28b,获得了重组表达载体pET-28b-IL-2,将此重组表达载体转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达萧山鸡IL-2。SDS-PAGE结果表明,萧山鸡IL-2在大肠杆菌中得到了表达,以此表达产物制成油乳剂苗免疫家兔,用ELISA和Westernblotting检测兔血中的多克隆抗体,结果均为阳性。因而为进一步开展鸡IL-2的结构和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 制备 白细胞介素2 原核表达 多克隆抗体 免疫增强剂
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猪Ⅱ型圆环病毒浙江分离株全基因组的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 张朝政 由振强 +1 位作者 卢觅佳 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期777-782,共6页
越来越多的证据显示,猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一.本研究克隆了两株PCV2浙江分离株(JS2003和Zhuji2003)的全基因并对其进行测序.序列分析结果表明,这两个基因组全长均为1767nt,与GenBank中... 越来越多的证据显示,猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一.本研究克隆了两株PCV2浙江分离株(JS2003和Zhuji2003)的全基因并对其进行测序.序列分析结果表明,这两个基因组全长均为1767nt,与GenBank中的其它24株PCV2相比,核苷酸同源性为94.8%~99.8%,而与4株PCV1的核苷酸同源性仅为76.5%~78.0%.虽然PCV2基因从总体上来说相对稳定,但在不同地区分离到的PCV2中确实存在一定的基因差异. 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2) 断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS) 序列分析
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萧山鸡IL-2基因真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达 被引量:2
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作者 谢荣辉 方维焕 +2 位作者 李建荣 卢觅佳 于涟 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第6期649-654,共6页
扩增萧山鸡白细胞介素2(IL-2)基因,将其插入真核表达载体pCI构建重组质粒pCI-IL-2,高压电击法将重组质粒转化入减毒沙门氏菌,并直接转染Vero细胞,提取细胞总DNA,DIG标记探针可检测到阳性杂交信号。用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧... 扩增萧山鸡白细胞介素2(IL-2)基因,将其插入真核表达载体pCI构建重组质粒pCI-IL-2,高压电击法将重组质粒转化入减毒沙门氏菌,并直接转染Vero细胞,提取细胞总DNA,DIG标记探针可检测到阳性杂交信号。用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验,可检测到特异性黄绿色荧光。SDS-PAGE和Westernblotting可检测到18.5kD和14.5kD的蛋白条带。表明减毒沙门氏菌能将重组质粒pCI-IL-2携带进入Vero细胞内表达IL-2,且表达产物具有免疫反应性,为今后研制鸡IL-2基因作为口服免疫增强剂提供了依据。 展开更多
关键词 萧山鸡 IL-2基因 真核表达载体 VERO细胞 减毒沙门氏菌 白细胞介素2
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