海产品贝毒素大田软海绵酸ELISA及HPLC-MS/MS检测方法的研究 被引量：5

1

作者 卢士英 柳增善 +5 位作者 周玉 李岩松 张代辉 于光 于师宇 任洪林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第8期158-162,共5页

为了检测海产品贝毒大田软海绵酸,保障其食用安全,利用活泼酯法将小分子OA与载体蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术建立分泌抗OA的杂交瘤细胞株,并对其各种特性进行分析;小鼠腹水法大量生产抗体,纯化后建立ELISA方法,同时建立OA的... 为了检测海产品贝毒大田软海绵酸,保障其食用安全,利用活泼酯法将小分子OA与载体蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术建立分泌抗OA的杂交瘤细胞株,并对其各种特性进行分析;小鼠腹水法大量生产抗体,纯化后建立ELISA方法,同时建立OA的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)检测法,并对部分市售海产品进行了实际检测,ELISA方法标准曲线为y=-34.212x+83.49,相关系数为0.9784,线性范围0.4～25μg/L,灵敏度0.18μg/L;HPLC-MS/MS检测方法标准曲线y=193.07x-780.6(Q1/Q3:m/z827.4～m/z723.5)和y=83.021x-335.6(Q1/Q3:m/z827.4～m/z809.5),R2均为0.9991,线性范围10～800μg/L,灵敏度小于2μg/L,平均RSD为4.34%。在检测的实际样品中两种样品ELISA呈阳性反应,其中一种经过了HPLC-MS/MS的验证。所建立的ELISA及HPLC-MS检测方法均可用于海产品腹泻性贝毒OA限量标准检测,为进出口海产品OA标准方法的建立提供实验基础。 展开更多

关键词 大田软海绵酸 ELISA HPLC-MS/MS 海产品

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布鲁氏菌病的研究与防控进展 被引量：94

2

作者 任洪林 卢士英 +2 位作者 周玉 李兆辉 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期139-143,共5页

布鲁氏菌病(Brucellosis,简称"布病")是由布鲁氏菌(Brucella)引起的危害严重的人畜共患病,主要危害人畜生殖系统,人与人之间几乎不传播,患病动物是主要的传染源,近几年疫情急骤回升。作者综述了布病的研究现状及其流行趋势,... 布鲁氏菌病(Brucellosis,简称"布病")是由布鲁氏菌(Brucella)引起的危害严重的人畜共患病,主要危害人畜生殖系统,人与人之间几乎不传播,患病动物是主要的传染源,近几年疫情急骤回升。作者综述了布病的研究现状及其流行趋势,初步探讨布病综合防控面临的主要困境。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 生物学特性 疫苗与诊断 分子生物学 预防与控制

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灭菌乳中活阪崎肠杆菌PMA-PCR检测方法的建立 被引量：12

3

作者 刘艳艳 柳增善 +6 位作者 卢士英 任洪林 盖冬雪 崔成 丁艳霞 孟宪梅 于师宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期65-69,共5页

本试验旨在建立灭菌乳中活阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的PMA-PCR检测方法。将DNA染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术结合,优化PMA最佳工作浓度和曝光时间,确定PMA-... 本试验旨在建立灭菌乳中活阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的PMA-PCR检测方法。将DNA染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术结合,优化PMA最佳工作浓度和曝光时间,确定PMA-PCR区别死、活阪崎肠杆菌细胞的最佳条件。结果表明,活阪崎肠杆菌经100℃沸水处理20min可完全致死,PMA完全与死阪崎肠杆菌DNA共价交联并光解溶液中游离PMA的最佳曝光时间为15min,完全抑制死阪崎肠杆菌PCR扩增的最小PMA浓度为5μg/mL,不抑制活阪崎肠杆菌PCR扩增的最大PMA浓度为15μg/mL。经PMA处理后,在含有不同比例的死、活阪崎肠杆菌混合液中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为40CFU/mL,在灭菌乳样品中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为100CFU/mL。该方法为利用PMA-PCR检测食品中的活阪崎肠杆菌奠定了基础。 展开更多

关键词 PMA PCR 阪崎肠杆菌 灭菌乳

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柠檬黄色素免疫学检测方法的研究 被引量：4

4

作者 任立松 卢士英 +4 位作者 周玉 郭德军 李岩松 孟宪梅 柳增善 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第12期258-261,共4页

将柠檬黄分子与卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)偶联为检测原和免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得分泌抗柠檬黄单克隆抗体杂交瘤细胞株3D4,纯化腹水得到单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,回归方程和相关系数分别为:y=-40... 将柠檬黄分子与卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)偶联为检测原和免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得分泌抗柠檬黄单克隆抗体杂交瘤细胞株3D4,纯化腹水得到单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,回归方程和相关系数分别为:y=-40.134x+133.46,R2=0.9692,最低检出浓度为0.36μg/L。该方法与柠檬黄色素常用的检测方法薄层分析及分光光度计法相比,检测限低、耗时短、成本低,适用于大批量样品检测。 展开更多

关键词 柠檬黄 单克隆抗体 酶联免疫吸附反应 检测

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小尾寒羊溶菌酶基因的克隆与差异表达分析 被引量：4

5

作者 李闯 徐云明 +9 位作者 唐峰 邹德颖 刘楠楠 郭兴 杨咏洁 周玉 柳增善 卢士英 鲁承 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期19-22,共4页

本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交Ge... 本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交GenBank,登录号为JX263305。经荧光定量PCR分析,与正常组羊相比,在S2免疫14和30d的羊白细胞层中该溶菌酶基因表达轻微上调,但差异不显著(P>0.05);在免疫40d时恢复到正常水平。这也进一步说明溶菌酶是一种存在机体内必不可少的天然免疫因子,为布鲁氏菌病有效防控方面的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 白细胞层 布鲁氏菌 溶菌酶 差异表达分析 荧光定量PCR

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猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株Nsp2基因的克隆及序列分析 被引量：6

6

作者 闫东明 卢士英 +6 位作者 任洪林 周玉 宫彬彬 郑鑫 杜运升 王光明 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期48-52,共5页

采用RT-PCR方法,从吉林省部分地区猪场的病料中扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Nsp2基因并测序。应用DNAStar 7.0、ClustalX1.83、MEGA4.0软件对测序结果进行分析,并与NCBI上已登录的PRRSV代表毒株的Nsp2基因进行序列比对,结果显示... 采用RT-PCR方法,从吉林省部分地区猪场的病料中扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Nsp2基因并测序。应用DNAStar 7.0、ClustalX1.83、MEGA4.0软件对测序结果进行分析,并与NCBI上已登录的PRRSV代表毒株的Nsp2基因进行序列比对,结果显示,得到的Nsp2基因与VR-2332、CH-1a等代表毒株的一致性为62.0%～87.5%,与国内高致病性PRRSV毒株JXA1、HUB2等的一致性为97.8%～98.9%;氨基酸序列比对结果显示与VR-2332、CH-1a等代表毒株的一致性为34.4%～59.0%,与国内高致病性PRRSV毒株JXA1、HUB2等的一致性为95.1%～98.4%。因此,引起吉林省部分地区猪场发生猪繁殖与呼吸综合征的PRRSV与国内流行的高致病性PRRSV毒株亲缘关系较近。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 序列分析

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石房蛤毒素单克隆抗体的制备及其特性研究 被引量：4

7

作者 闫东明 于师宇 +5 位作者 任洪林 周玉 孟宪梅 林超 柳增善 卢士英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期73-76,共4页

将石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶1024... 将石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶102400,抗体亲和常数为3.71×106L/mol。 展开更多

关键词 石房蛤毒素 抗原偶联 单克隆抗体 亲和常数

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大田软海绵酸致病性及检测方法研究进展 被引量：5

8

作者 孟宪梅 卢士英 +1 位作者 林超 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第2期152-156,共5页

大田软海绵酸(okadaic acid,OA)属于海洋腹泻性贝毒,是一类常见的赤潮藻毒素,富集于多种海洋软体动物的消化腺内,食用被污染的海产品后会发生腹泻性中毒,中毒症状极易与细菌性胃肠炎混淆,且OA具有长期的致癌效应。作者就大田软海绵酸的... 大田软海绵酸(okadaic acid,OA)属于海洋腹泻性贝毒,是一类常见的赤潮藻毒素,富集于多种海洋软体动物的消化腺内,食用被污染的海产品后会发生腹泻性中毒,中毒症状极易与细菌性胃肠炎混淆,且OA具有长期的致癌效应。作者就大田软海绵酸的结构性质、致病性及检测方法进行综述,以使公众进一步了解OA检测的公共卫生意义。 展开更多

关键词 大田软海绵酸 腹泻性贝毒 检测

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乳品中热带假丝酵母菌的双抗夹心ELISA快速检测方法 被引量：2

9

作者 常江 刘熙 +8 位作者 柳增善 任洪林 卢士英 胡盼 李岩松 盖冬雪 金雯 张嵩 孟宪梅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期63-68,共6页

本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交... 本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交分析建立乳品中热带假丝酵母菌快速、特异的双抗夹心ELISA检测方法。该方法检出限为98 ng/m L,板内变异系数小于2%,板间变异系数小于6%,特异性及重复性良好。实际样品检测中,通过对乳制品进行滤膜集菌并选择性增菌培养,超声后提取的蛋白上清应用本研究建立的双抗夹心ELISA检测方法,100 CFU/m L热带假丝酵母菌可在22 h内准确检测出阳性反应。 展开更多

关键词 乳品 热带假丝酵母菌 双抗夹心ELISA 快速检测 选择性增菌 滤膜集菌

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鲜乳中常见污染细菌的分离与鉴定 被引量：2

10

作者 刘艳艳 卢士英 +5 位作者 任洪林 崔成 盖冬雪 丁燕霞 柳增善 孟宪梅 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第6期16-18,33,共4页

对吉林省污染鲜乳的细菌进行分离鉴定,以分析本地区鲜乳污染情况,为建立针对性检测鲜乳中的污染细菌提供参考。采集吉林省部分地区奶牛养殖场及农户散养奶牛自产鲜乳,采用常规培养方法进行分离培养。用聚合酶链式反应(PCR)扩增细菌16S r... 对吉林省污染鲜乳的细菌进行分离鉴定,以分析本地区鲜乳污染情况,为建立针对性检测鲜乳中的污染细菌提供参考。采集吉林省部分地区奶牛养殖场及农户散养奶牛自产鲜乳,采用常规培养方法进行分离培养。用聚合酶链式反应(PCR)扩增细菌16S rDNA,对PCR产物测序、分析,与Genbank上已知的细菌16S rDNA序列对比同源性,交叉同源性较高的细菌进行生化实验加以补充鉴定。结果表明,分离并鉴定出吉林省污染鲜乳的常见细菌,为鲜乳在生产加工过程中有针对性的检测特异性细菌奠定了基础。 展开更多

关键词 鲜乳 分离鉴定 常规培养 16S RDNA 聚合酶链式反应

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拟态弧菌OmpK基因的克隆及原核表达 被引量：1

11

作者 李研东 李菲 +5 位作者 卢士英 任洪林 周玉 朱元银 宫彬彬 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期52-55,共4页

克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交... 克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交至GenBank(GenBank登录号为FJ462707)。拟态弧菌OmpK序列比对结果显示,溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、河弧菌OmpK基因序列的同源性均大于78%。该基因编码1个含267个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为29.6 ku。利用基因工程方法将该基因片段定向克隆至表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达,表达后的OmpK蛋白分子质量约为28 ku。 展开更多

关键词 拟态弧菌 OmpK基因 克隆 表达

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乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法的建立 被引量：7

12

作者 盖冬雪 任洪林 +9 位作者 卢士英 胡盼 孟宪梅 刘熙 宋德刚 金雯 张嵩 常江 刘艳艳 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期493-498,共6页

本试验旨在建立一种乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法。优化qPCR检测方法,探究菌浓度为1×108 CFU/mL的大肠杆菌活菌悬液、热致死菌悬液细胞数来确定不同的PMA剂量、暗孵育时间、曝光时间对死菌抑制效果的影响,确定最佳PMA处理... 本试验旨在建立一种乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法。优化qPCR检测方法,探究菌浓度为1×108 CFU/mL的大肠杆菌活菌悬液、热致死菌悬液细胞数来确定不同的PMA剂量、暗孵育时间、曝光时间对死菌抑制效果的影响,确定最佳PMA处理方案。结果表明,qPCR检测可特异性扩增大肠杆菌,1×108 CFU/mL的大肠杆菌经90℃水浴30s全部致死后,采用10μg/mL的PMA暗孵育15min后冰上曝光10min为最佳处理方案,这种处理方案可最大程度抑制死细胞信号,而对活细胞几乎没有影响,样品中微生物初始浓度不低于1×108 CFU/mL时较稳定,得到标准曲线回归方程y=-3.356x+47.413,R2=0.9989,最低检测限为103 CFU/mL,加标样本检测结果与实际相符。该方法为利用PMA-qPCR检测食品中的活大肠杆菌杆菌奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 叠氮溴化丙啶 qPCR 计数

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抗大田软海绵酸单抗独特型抗体的制备及鉴定 被引量：4

13

作者 林超 王东旭 +6 位作者 任洪林 柳增善 周玉 李岩松 闫东明 王里奇 卢士英 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第11期110-113,共4页

目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴。方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab’)2片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,... 目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴。方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab’)2片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,琼脂扩散法检测血清抗体与抗OA单抗反应活性,ELISA方法鉴定血清抗体与抗OA单抗反应活性及与OA竞争活性。结果:该抗独特型抗体与抗OA单抗呈阳性反应,且可抑制抗OA单抗与固相抗原OA-OVA的结合。结论:制备的抗OA单抗的独特型抗体与OA抗原存在内影像的关系,可替代毒素用于检测。 展开更多

关键词 大田软海绵酸 F(ab’)2片段 抗独特型抗体 内影像

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玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA方法的建立 被引量：5

14

作者 唐颂 李岩松 +5 位作者 尚翠玲 胡盼 卢士英 任洪林 柳增善 周玉 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第4期300-304,共5页

本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(8... 本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(80))为11~292 pg/mL,检测限(IC_(10))为6 pg/mL。玉米赤霉烯酮在玉米面中的加标回收率为81.29%~105.80%。本研究建立的ic-ELISA方法与赭曲霉素A、黄曲霉素B_(1)、呕吐毒素、伏马毒素B_(1)、T-2毒素无交叉反应,可用于玉米面中玉米赤霉烯酮的初筛检测。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 真菌毒素 检测 间接竞争酶联免疫分析(ic-ELISA)

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鲍曼不动杆菌雏鸡分离株CCGGD201101的分离、鉴定及致病性研究 被引量：4

15

作者 邹德颖 刘东 +7 位作者 郭兴 陈晓峰 胡盼 卢士英 周玉 柳增善 任洪林 于师宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期178-181,共4页

试验旨在鉴定吉林省某雏鸡孵育基地病死雏鸡组织中分离出的1株致病性菌CCGGD201101株并测定其致病性。对疑似致病菌进行生理生化试验、16SrDNA测序鉴定,并人工接种昆明鼠,测定其半数致死量,验证细菌毒力。经鉴定该菌为鲍曼不动杆菌(Acin... 试验旨在鉴定吉林省某雏鸡孵育基地病死雏鸡组织中分离出的1株致病性菌CCGGD201101株并测定其致病性。对疑似致病菌进行生理生化试验、16SrDNA测序鉴定,并人工接种昆明鼠,测定其半数致死量,验证细菌毒力。经鉴定该菌为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。以鲍曼不动杆菌CCGGD201101分离株为研究对象,并以鲍曼不动杆菌标准株(ATCC 19606)为对照,测得半数致死量,进一步证明鲍曼不动杆菌病死鸡分离株CCGGD201101具有较强致病性。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 生理生化鉴定 16S RDNA 半数致死量

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乳品中的酵母活菌数PMA-qPCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3

16

作者 李畅 赵柯 +11 位作者 常江 张嵩 李萌 关玉婷 孟宪梅 柳增善 胡盼 任洪林 卢士英 李岩松 孙宇 刘熙 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第22期128-132,共5页

本实验旨在对乳品中酵母菌活菌总数进行准确的定量检测,深入研究PMA处理乳品中酵母热损伤菌的最佳工作条件,去除热损伤死菌DNA的影响。针对从乳品中分离的三株酵母菌26S rDNA D1/D2区域序列设计引物Y3和Y4,运用实时荧定定量PCR进行序列... 本实验旨在对乳品中酵母菌活菌总数进行准确的定量检测,深入研究PMA处理乳品中酵母热损伤菌的最佳工作条件,去除热损伤死菌DNA的影响。针对从乳品中分离的三株酵母菌26S rDNA D1/D2区域序列设计引物Y3和Y4,运用实时荧定定量PCR进行序列扩增,以重组质粒pMD-18T-26S拷贝数对数与扩增循环数(Ct)值为坐标轴建立标准曲线,建立PMA-qPCR检测方法,并对实际样品中的酵母菌活菌富集后进行数量检测。PMA-q PCR法可达到国标规定的食品中酵母菌最高限量值1×10~2CFU/mL的检测标准,对应Ct值为36.67±0.43,重复性良好,总耗时6～7 h,可对酵母菌数量进行准确和快速的定量分析,为乳品中腐败微生物的鉴定与监控提供有价值的借鉴。 展开更多

关键词 乳品 PMA qPCR 酵母活菌计数

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小尾寒羊白介素1β全长cDNA序列克隆及生物信息学分析 被引量：2

17

作者 郭兴 刘楠楠 +9 位作者 陈晓峰 张文惠 胡盼 李岩松 李兆辉 王光明 卢士英 周玉 柳增善 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期20-24,共5页

本研究旨在克隆白介素1β(IL-1β)全长cDNA,为深入研究其生物学功能提供全长cDNA信息和试验材料。本试验利用前人构建的布鲁氏菌强、弱毒株感染小尾寒羊白细胞层抑制性差减杂交(SSH)cDNA文库,获得小尾寒羊IL-1β部分cDNA序列信息,利用c... 本研究旨在克隆白介素1β(IL-1β)全长cDNA,为深入研究其生物学功能提供全长cDNA信息和试验材料。本试验利用前人构建的布鲁氏菌强、弱毒株感染小尾寒羊白细胞层抑制性差减杂交(SSH)cDNA文库,获得小尾寒羊IL-1β部分cDNA序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE),克隆小尾寒羊IL-1β全长cDNA,并申请GenBank登录号KC425612.2。该cDNA全长1494bp,含有801bp开放阅读框(ORF),可编码266个氨基酸残基,预测其编码蛋白分子质量为30.622ku,与林麝、牛、海豚、虎鲸的IL-1β一致性较高,亲缘关系较近。 展开更多

关键词 白介素1Β 小尾寒羊 克隆 生物信息学 分析

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猪无名高热综合征临床病例研究 被引量：4

18

作者 李金栋 张茂林 +4 位作者 周玉 杜运生 卢士英 任洪林 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第7期115-119,共5页

通过电镜直接观察从吉林省、辽宁省部分地区收集到的猪无名高热综合征病料,发现主要为猪繁殖与呼吸综合征病毒、副粘病毒、猪瘟病毒;将从吉林省的无名高热综合征病料中分离到的副粘病毒、病料原液以及由病料制得的自家灭活疫苗分别接种... 通过电镜直接观察从吉林省、辽宁省部分地区收集到的猪无名高热综合征病料,发现主要为猪繁殖与呼吸综合征病毒、副粘病毒、猪瘟病毒;将从吉林省的无名高热综合征病料中分离到的副粘病毒、病料原液以及由病料制得的自家灭活疫苗分别接种到血清检测无名高热综合征主要病原抗体阴性的健康仔猪,同时设立阴性对照,对临床感染的仔猪进行了病理变化、病毒分离、细菌检测等方面的鉴定分析,对无名高热综合征病原的致病特点、发病规律和灭活疫苗使用中出现的抗体依赖性增强作用(ADE)进行了探讨研究。结果表明:初步认定两省部分地区无名高热综合征的主要病原体为PRRSV,由病料所制得灭活疫苗在活体中具有抗体依赖性增强现象。 展开更多

关键词 猪无名高热综合征 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪副粘病毒 猪瘟病毒 抗体依赖性增强作用

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展青霉素人工抗原的制备与鉴定 被引量：2

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作者 王欣然 聂虹霞 +8 位作者 李岩松 谭彩云 胡盼 冯小丽 任洪林 郭一平 周玉 柳增善 卢士英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期14-20,共7页

为探讨展青霉素(patulin,PAT)不同抗原合成方法对完全抗原制备及抗体产生的影响,本试验利用琥珀酸酐联合活泼酯法,分别制备免疫原PAT-BSA和包被原PAT-OVA。为提高PAT与偶联蛋白的结合率,尝试将BSA修饰为EDA-BSA后与PAT进行偶联,并对比2... 为探讨展青霉素(patulin,PAT)不同抗原合成方法对完全抗原制备及抗体产生的影响,本试验利用琥珀酸酐联合活泼酯法,分别制备免疫原PAT-BSA和包被原PAT-OVA。为提高PAT与偶联蛋白的结合率,尝试将BSA修饰为EDA-BSA后与PAT进行偶联,并对比2种偶联方法制备的完全抗原免疫动物后抗血清的效价水平。同时利用琼脂糖凝胶电泳、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、凝胶渗透色谱多种方法分析鉴定偶联结果,为PAT单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 展青霉素 偶联 鉴定 完全抗原

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适配子筛选中随机寡核苷酸文库的构建和PCR条件的优化 被引量：2

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作者 田瑞云 卢士英 +7 位作者 李琳 吴宗澄 任洪林 周玉 李岩松 胡盼 柳增善 王光明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期61-65,共5页

本试验旨在构建用于核酸适配子筛选的随机寡核苷酸文库并对筛选过程中的PCR条件进行优化。利用Primer Premier 5.0构建了随机寡核苷酸文库并据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的上、下游引物的比例、模板量、退火... 本试验旨在构建用于核酸适配子筛选的随机寡核苷酸文库并对筛选过程中的PCR条件进行优化。利用Primer Premier 5.0构建了随机寡核苷酸文库并据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的上、下游引物的比例、模板量、退火温度、循环数等条件进行优化并验证其重复性,得到了对称PCR和间接不对称PCR的最佳反应条件,获得较理想的dsDNA和ssDNA并具有良好的重复性。本试验成功构建了寡核苷酸文库,优化了PCR条件,为适配子筛选和后续试验奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 适配子 寡核苷酸文库 PCR 优化

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