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急性疼痛应激对SD大鼠胃及颌下腺组织annexin5表达的影响 被引量:2
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作者 卢坤刚 韩雪峰 +1 位作者 张艳梅 姚兵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期198-200,共3页
目的研究在福尔马林致炎的急性疼痛应激状态下SD大鼠胃及颌下腺组织膜联蛋白5(annexin 5)表达的影响。方法单侧后足底皮下注射0.2 m l 5%福尔马林溶液,建立SD大鼠的急性疼痛应激模型,对照组注射等量的生理盐水,分别取对照组和应激组SD... 目的研究在福尔马林致炎的急性疼痛应激状态下SD大鼠胃及颌下腺组织膜联蛋白5(annexin 5)表达的影响。方法单侧后足底皮下注射0.2 m l 5%福尔马林溶液,建立SD大鼠的急性疼痛应激模型,对照组注射等量的生理盐水,分别取对照组和应激组SD大鼠胃及颌下腺组织通过western b lot分析急性应激状态下大鼠胃及颌下腺组织annexin 5表达的变化。结果在急性疼痛应激状态下,1 h和72 h组胃组织annexin 5表达水平与对照组相比均无显著性差异(P>0.05),而6 h和24h组annexin 5表达水平显著升高(P<0.01);1 h和24 h组颌下腺组织annexin 5表达水平与对照组相比均无显著性差异(P>0.05),而6 h和72 h组显著升高(P<0.01);结论annexin 5参与了胃及颌下腺对急性疼痛应激的反应,急性疼痛可能通过annexin 5影响胃及颌下腺的功能。 展开更多
关键词 炎性疼痛 福尔马林 膜联蛋白5 MRNA
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促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响 被引量:15
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作者 戈一峰 王大勇 +7 位作者 蒋超 张艳梅 韩雪峰 卢坤刚 崔英霞 黄宇烽 黄祝 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1138-1142,共5页
目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH... 目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。 展开更多
关键词 GNRH类似物 荧光定量PCR 大鼠睾丸间质细胞 膜联蛋白5 3β-羟类固醇脱氢酶
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促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达 被引量:10
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作者 柳海燕 时姗姗 +6 位作者 陶晓倩 卢坤刚 韩雪峰 张艳梅 崔英霞 李晓军 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第8期789-793,共5页
目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD... 目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h。GnRHa(10-7mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达。结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90 min后,p-ERK水平在5 min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10 min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90 min时恢复到正常水平。加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5 min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平。用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24 h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRH激动剂可能通过ERKMAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌。 展开更多
关键词 促性腺激素释放激素 ERK MAPK 睾丸间质细胞 3Β-HSD
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光照应激对SD大鼠小肠促性腺激素释放激素受体表达的影响 被引量:5
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作者 时姗姗 陶晓倩 +4 位作者 韩雪峰 卢坤刚 张艳梅 柳海燕 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第11期1127-1130,1135,I0003,共6页
目的:机体遭受各种创伤应激后,常出现各种胃肠道症状,并且已有研究表明大鼠的消化系统广泛分布有促性腺激素释放激素(GnRH)受体免疫反应阳性细胞。文中观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜GnRH受体的分布和表达变化。方法:建立SD大鼠光照... 目的:机体遭受各种创伤应激后,常出现各种胃肠道症状,并且已有研究表明大鼠的消化系统广泛分布有促性腺激素释放激素(GnRH)受体免疫反应阳性细胞。文中观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜GnRH受体的分布和表达变化。方法:建立SD大鼠光照应激模型,24 h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28 d),分别取应激组和相应对照组的小肠组织,采用免疫组化和Western blot技术分析GnRH受体在各时间段大鼠小肠组织中的分布和表达变化。结果:Western blot结果显示:与对照组相比,持续光照2、3、4、7 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体表达无明显变化;持续光照14 d和21 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量分别约升高了56.5%和59.9%,具有显著性差异(P<0.05);持续光照28 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量约升高了27.8%,但无显著性差异(P>0.05)。免疫组织化学显示,GnRH受体在大鼠小肠中的分布未见明显改变,但长期应激后期实验组(14、21、28 d)GnRH受体免疫组化显色较深,说明GnRH受体表达升高,这与Western blot的结果基本一致。结论:GnRH受体随着光照应激时间的延长,在大鼠小肠中表达量发生改变。提示在光照应激中,GnRH对消化功能具有潜在的生理调节功能。 展开更多
关键词 光照 应激 小肠 促性腺激素释放激素
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促性腺激素释放激素拮抗剂对In-R1-G9细胞表达胰高血糖素的影响 被引量:6
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作者 张艳梅 柳海燕 +7 位作者 陶晓倩 时姗姗 卢坤刚 韩雪峰 崔英霞 戈一峰 李晓军 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第11期1136-1139,共4页
目的:促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRHant)能降低小鼠糖尿病的发生率,文中在细胞水平研究GnRHant对In-R1-G9细胞内胰高血糖素(glucagon)表达的调控作用。方法:分别用终浓度为0.1、10、1 000 nmol/L的GnRHant处理培养的In-R1-G9细胞2 h(... 目的:促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRHant)能降低小鼠糖尿病的发生率,文中在细胞水平研究GnRHant对In-R1-G9细胞内胰高血糖素(glucagon)表达的调控作用。方法:分别用终浓度为0.1、10、1 000 nmol/L的GnRHant处理培养的In-R1-G9细胞2 h(对照组用甘露醇处理),通过Western blot和荧光定量PCR技术观察胰高血糖素在蛋白水平及转录水平的变化。结果:与对照组相比,低浓度的GnRHant(0.1 nmol/L)使胰高血糖素在蛋白水平和转录水平的表达均有所降低,但是无统计学意义(P>0.05);而高浓度的GnRHant(10 nmol/L、1 000 nmol/L)能明显地降低胰高血糖素的表达(P<0.05)。结论:一定浓度的GnRHant能降低In-R1-G9细胞内胰高血糖素的表达。 展开更多
关键词 GNRH拮抗剂 In—R1-G9细胞 胰高血糖素
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促性腺素释放素激动剂通过ERK MAPK途径调节In-R1-G9细胞胰高血糖素的分泌 被引量:1
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作者 陶晓倩 时姗姗 +4 位作者 张艳梅 柳海燕 卢坤刚 韩雪峰 姚兵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期63-65,共3页
目的研究促性腺素释放素激动剂(GnRHa)醋酸阿拉瑞林对In-R1-G9细胞分泌胰高血糖素的影响是否与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。方法无血清培养细胞24 h后,选用100 nmol/L GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞0、5、10、20、30、60、9... 目的研究促性腺素释放素激动剂(GnRHa)醋酸阿拉瑞林对In-R1-G9细胞分泌胰高血糖素的影响是否与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。方法无血清培养细胞24 h后,选用100 nmol/L GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞0、5、10、20、30、60、90 min,用western blotting检测磷酸化胞外信号调节激酶(P-ERK)、总ERK(T-ERK)、磷酸化p38(P-p38)、β-ac-tin的表达。用ERK选择性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞,用放射免疫法测定胰高血糖素的分泌水平。结果Gn-RHa刺激In-R1-G9细胞20 min后,p-ERK水平开始升高(P<0.05),在30 min时达到峰值,比对照组升高了169%(P<0.01),90 min恢复至正常水平;但P-p38与对照组比无显著性差异;PD98059组与本底对照(DMSO组)比较、GnRHa+PD98059组与GnRHa组比较均有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。结论GnRHa可能通过ERK MAPK途径调控In-R1-G9细胞胰高血糖素的分泌,而不是通过p38 MAPK途径。 展开更多
关键词 促性腺素释放素激动剂 In—R1-G9细胞 细胞外信号调节激酶 P38 胰高血糖素
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光照应激对SD大鼠小肠中annexin 5表达的影响 被引量:1
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作者 时姗姗 卢坤刚 +3 位作者 柳海燕 陶晓倩 林钗英 姚兵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期221-223,共3页
目的观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜组织中annexin 5的分布和表达变化。方法建立SD大鼠光照应激模型,24 h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28 d),分别取应激组和相应对照组的大鼠小肠组织,采用免疫... 目的观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜组织中annexin 5的分布和表达变化。方法建立SD大鼠光照应激模型,24 h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28 d),分别取应激组和相应对照组的大鼠小肠组织,采用免疫组织化学和western blot技术分析annexin 5在各时间段大鼠小肠组织中的分布和表达。结果western blot结果显示,与对照组相比,持续光照2、3、4、7 d,实验组大鼠小肠中annexin 5表达无明显变化;持续光照14 d和21 d,实验组大鼠小肠中annexin 5的表达量显著高于对照大鼠,具有统计学意义(P<0.05);持续光照28 d,实验组大鼠小肠中annexin 5表达量虽仍高于对照鼠,但无显著性差异(P>0.05)。免疫组织化学显示,annexin 5在大鼠小肠中的分布未见明显改变,但光照应激后期实验组(14、21、28 d)annexin 5免疫组化显色较深。结论在光照应激后期(14、21 d)annexin 5的表达量明显增加。随着应激时间的延长(28 d),机体内代偿机制的建立,实验组annexin 5逐渐恢复至正常水平。说明大鼠小肠中annexin 5参与了应激过程。 展开更多
关键词 光照 应激 小肠 annexin5
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促性腺激素释放激素类似物对In-R1-G9细胞中胰高血糖素分泌的影响 被引量:1
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作者 张艳梅 陶晓倩 +4 位作者 时姗姗 柳海燕 卢坤刚 韩雪峰 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2011年第1期11-14,共4页
目的研究表明促性腺激素释放激素(gonadotrop in-releasing hormone,GnRH)可能对胰高血糖素具有调节作用,文中观察GnRH类似物对仓鼠胰高血糖素瘤细胞(In-R1-G9)胰高血糖素分泌的影响。方法通过W estern blot和免疫细胞化学的方法检测GnR... 目的研究表明促性腺激素释放激素(gonadotrop in-releasing hormone,GnRH)可能对胰高血糖素具有调节作用,文中观察GnRH类似物对仓鼠胰高血糖素瘤细胞(In-R1-G9)胰高血糖素分泌的影响。方法通过W estern blot和免疫细胞化学的方法检测GnRH受体在In-R1-G9细胞中的表达和定位,然后分别用终浓度为0、0.1、10、1000 nmol/L的GnRH类似物处理培养的In-R1-G9细胞2 h,用放射免疫法分别检测对照组和实验组中胰高血糖素分泌量。结果 GnRH受体在In-R1-G9细胞中表达并定位在细胞膜上。低浓度的GnRH激动剂(GnRHa)(0.1 nmol/L)增强胰高血糖素分泌的作用不显著;而高浓度的GnRHa(10、1000 nmol/L)能显著增强胰高血糖素的分泌(P<0.05)。低浓度的GnRH拮抗剂(GnRHant)(0.1 nmol/L)降低胰高血糖素分泌的作用不显著;而高浓度的GnRHant(10、1000 nmol/L)能明显地抑制胰高血糖素的分泌(P<0.05)。结论促性腺激素释放激素类似物能以浓度依赖性的方式调节In-R1-G9细胞中胰高血糖素的分泌,这一过程可能通过GnRH受体作用。 展开更多
关键词 促性腺激素释放激素类似物 In-R1-G9细胞 胰高血糖素
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精浆果糖速率检测法的初步评价 被引量:6
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作者 陆金春 卢坤刚 +1 位作者 张红烨 冯瑞祥 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第1期6-8,共3页
目的建立精浆果糖速率检测法并进行性能评价。方法利用速率法检测精浆果糖浓度,在全自动生化分析仪上建立检测参数,评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围,与临床常用的精浆果糖吲哚显色法进行比较。结果试剂空白吸光... 目的建立精浆果糖速率检测法并进行性能评价。方法利用速率法检测精浆果糖浓度,在全自动生化分析仪上建立检测参数,评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围,与临床常用的精浆果糖吲哚显色法进行比较。结果试剂空白吸光度平均为0.032,空白吸光度变化率(△A/min)平均为0.000 2。3份高、中、低果糖浓度的精浆样本重复测定10次的变异系数(CV)值分别为1.40%、1.57%和2.79%。回收率范围为95.77%~100.97%。精浆果糖浓度在5~35 mmol/L时,具有良好的线性关系(r2=0.997 8)。以精浆果糖吲哚显色法作为对照试剂,速率法作为实验试剂,两者对115例精浆样本的检测结果差异无统计学意义[(20.92±8.62)mmol/L vs(21.15±8.37)mmol/L,t=-1.157,P=0.250],且呈显著正相关(r2=0.939 5,P<0.01)。结论本研究建立的精浆果糖速率检测法有较低的试剂空白,重复性和准确性较好,与目前临床使用的吲哚显色法有很好的一致性。本法操作简单、快速,精浆样本无需稀释,适合临床大批量样本的检测筛查,可节省人力和试剂成本。 展开更多
关键词 果糖 精浆 全自动分析 速率法 方法学评价
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坐骨神经选择性损伤对SD大鼠胃中annexin 5表达的影响
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作者 朱小蔚 卢坤刚 +9 位作者 韩雪峰 张艳梅 陶晓倩 柳海燕 时姗姗 崔英霞 李晓军 黄宇烽 戈一峰 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第6期570-573,I0003,共5页
目的:疼痛特别是慢性疼痛,是战争创伤引起的常见症状,也是近年来影响人们身心健康的主要因素之一,但其对消化系统功能的影响仍没有系统的研究。因此,文中通过建立坐骨神经选择性损伤模型研究慢性疼痛应激状态下SD大鼠胃中annexin 5表达... 目的:疼痛特别是慢性疼痛,是战争创伤引起的常见症状,也是近年来影响人们身心健康的主要因素之一,但其对消化系统功能的影响仍没有系统的研究。因此,文中通过建立坐骨神经选择性损伤模型研究慢性疼痛应激状态下SD大鼠胃中annexin 5表达的变化。方法:72只SD大鼠随机分成3组,手术组大鼠结扎并切断胫神经和腓总神经,但保留腓肠神经以建立坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型;假手术组只暴露坐骨神经干及其分支而不损伤神经;正常对照组不做任何处理。然后通过免疫组织化学和Western blot方法分别研究坐骨神经选择性损伤后14 d、21 d和28 d时大鼠胃中annexin 5蛋白定位及表达的变化。结果:免疫组化结果显示annexin 5存在于胃上皮及胃腺细胞中。术后14d,手术组胃黏膜上皮细胞中annexin 5的定位明显减少;Western blot结果显示,在坐骨神经分支选择性损伤引起的慢性疼痛应激状态下,14 d时手术组annexin 5蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.01)和假手术组(P<0.05),21 d时手术组annexin 5蛋白表达水平也显著低于对照组和假手术组(P<0.05),而48 d时手术组与其对应的对照组和假手术组相比均无显著性差异(P>0.05)。结论:坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激能下调SD大鼠胃中annexin 5的表达,annexin 5可能参与了胃对疼痛应激的反应。 展开更多
关键词 神经损伤 应激 annexin5 动物模型
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