聚合嵌合法制作黄牛和水牛种间嵌合胚的初步研究

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作者 卞桂华 覃琦丽 +2 位作者 冯贵雪 陆凤花 石德顺 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第9期44-46,共3页

通过聚合嵌合法初步建立一套黄牛和水牛种间嵌合的程序与方法。聚合嵌合法采用链酶蛋白酶消化透明带或用机械剥离法去除透明带,然后在含有100μg/ml PHA的培养液中聚合形成嵌合胚。结果发现,8-细胞黄牛胚胎聚合水牛桑椹胚与黄牛囊胚聚... 通过聚合嵌合法初步建立一套黄牛和水牛种间嵌合的程序与方法。聚合嵌合法采用链酶蛋白酶消化透明带或用机械剥离法去除透明带,然后在含有100μg/ml PHA的培养液中聚合形成嵌合胚。结果发现,8-细胞黄牛胚胎聚合水牛桑椹胚与黄牛囊胚聚合水牛桑椹胚相比,聚合胚存活率和囊胚发育率均无显著差异(P>0.05)。采用显微手术法分离黄牛和水牛8-细胞胚胎卵裂球进行聚合,聚合率为92.3%,囊胚发育率为58.3%,与用0.25%链酶蛋白酶分离胚胎卵裂球进行胚胎聚合的聚合率(86.7%)和囊胚发育率(46.2%)均无显著差异(P>0.05)。以上结果表明:①水牛和黄牛胚胎通过卵裂球聚合获得的种间嵌合胚胎能继续发育;②胚胎聚合前的发育阶段对其聚合成功率和随后的胚胎发育无明显影响。③胚胎卵裂球的分离方法(显微手术法和酶消化法)对其聚合率和囊胚发育率无明显影响。 展开更多

关键词 黄牛 水牛 胚胎聚合 嵌合体

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猪精原干细胞体外分离培养及诱导分化的研究 被引量：4

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作者 陈庭锋 王霄燕 +8 位作者 李东 施青青 张蕾 邱峰龙 刘志永 庄勋 卞桂华 宋成义 李碧春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1104-1112,共9页

本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况。采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性... 本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况。采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性;传至3代后通过添加不同诱导剂,诱导SSCs向脂肪细胞、神经元样细胞和成骨细胞分化,并通过生化染色、qRT-PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。结果表明:分离得到的pSSCs在饲养层上生长良好,碱性磷酸酶(AKP)及SOX2、integrinα6、SSEA1、Dazl抗体鉴定均呈阳性,表明SSCs处在未分化状态。诱导8d后,甲苯胺蓝染色及NSE抗体鉴定成阳性,成功诱导SSCs为神经元样细胞;诱导16d后,ALP、Von Kossa染色及Collagon l抗体鉴定均呈阳性,诱导SSCs为成骨细胞;诱导22d后,油红O染色可见脂滴被染成红色,诱导SSCs成为脂肪细胞。在SSCs诱导过程中,qRT-PCR结果显示,Nestin和β-tubulin在6d左右表达量最高,Cbfα1和Osterix在12d左右表达量最高,PPARγ和C/EBPα在18d左右表达量最高。本研究成功分离获得pSSCs,并且pSSCs可分别定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,表达细胞特有标记基因。 展开更多

关键词 精原干细胞 体外培养 诱导分化 基因表达

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表皮生长因子对水牛卵母细胞体外培养核质成熟的影响 被引量：5

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作者 冯贵雪 卞桂华 +1 位作者 王晓丽 石德顺 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第1期75-78,共4页

为了探讨表皮生长因子（EGF）对水牛卵泡卵母细胞体外培养核质成熟的影响，在以TCM199为基础的成熟液中加入不同浓度的EGF（0、10、25、50、100ng／ml），体外成熟培养24-26h，观察第一极体（PB1）的排放；随后进行孤雌激活检测其分裂... 为了探讨表皮生长因子（EGF）对水牛卵泡卵母细胞体外培养核质成熟的影响，在以TCM199为基础的成熟液中加入不同浓度的EGF（0、10、25、50、100ng／ml），体外成熟培养24-26h，观察第一极体（PB1）的排放；随后进行孤雌激活检测其分裂率、囊胚发育率、囊胚孵化率，并用Hoechst33342染色后计算囊胚的细胞数。结果发现添加EGF各组的卵母细胞第一极体排放率显著提高（P〈0．05）；成熟液中添加25ng／ml EGF时，卵裂率及囊胚发育率（分别为80．0％、44．8％）明显高于对照组（分别为69．3％、31．9％，P〈0．05），但对囊胚的细胞数影响不大。EGF不仅促进水牛卵母细胞体外培养的核成熟，而且有利于卵母细胞的胞质成熟，其中EGF的最佳浓度为25ng／ml。 展开更多

关键词 EGF 水牛 卵母细胞 体外成熟

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表皮生长因子和胰岛素样生长因子对水牛卵母细胞胞质成熟的影响 被引量：1

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作者 王晓丽 崔奎青 +4 位作者 舒金辉 冯贵雪 石德顺 卞桂华 韦精卫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期228-232,共5页

以皮层颗粒(CG)单层分布于质膜下做为卵母细胞胞质成熟的标志,利用CG荧光染色法,研究了不同浓度表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子(IGF-1)及其组合对水牛卵母细胞胞质成熟的影响。结果发现:(1)添加不同浓度的EGF(10、20、30、50 ng/... 以皮层颗粒(CG)单层分布于质膜下做为卵母细胞胞质成熟的标志,利用CG荧光染色法,研究了不同浓度表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子(IGF-1)及其组合对水牛卵母细胞胞质成熟的影响。结果发现:(1)添加不同浓度的EGF(10、20、30、50 ng/mL)都可以提高胞质的成熟率,但是组间差异不显著(P>0.05);皮质颗粒的分布随着EGF浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变;(2)在成熟液中添加IGF-130 ng/mL时效果较好,能显著提高卵母细胞胞质的成熟率;皮质颗粒的分布随着IGF-1浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变,在添加IGF-130 ng/mL时,在皮层分布最好,随着IGF-1量的进一步增加,皮质颗粒又向中间分布转变;(3)添加20ng/mL EGF+30 ng/mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率高于添加30 ng/mL的IGF-1组,显著高于添加20 ng/mLEGF组和对照组(P<0.05)。由此表明,EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟有协同作用。 展开更多

关键词 表皮生长因子 IGF-1 卵母细胞 胞质成熟 水牛

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Alloferon1体外抗犬细小病毒研究 被引量：2

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作者 沈晓鹏 卞桂华 +3 位作者 袁华根 罗有文 刘静 周伟伟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期2404-2405,共2页

[目的]开发出一种用于防治犬细小病毒病的新药物。[方法]将不同剂量的Alloferon1添加于病毒感染前、病毒感染同时、病毒感染后的细胞培养液中进行体外抗犬细小病毒试验。[结果]FK81细胞接种CPV后2 d,细胞开始变圆,胞质内颗粒增多;4～6 ... [目的]开发出一种用于防治犬细小病毒病的新药物。[方法]将不同剂量的Alloferon1添加于病毒感染前、病毒感染同时、病毒感染后的细胞培养液中进行体外抗犬细小病毒试验。[结果]FK81细胞接种CPV后2 d,细胞开始变圆,胞质内颗粒增多;4～6 d后病变细胞呈葡萄串状脱落。在80%细胞产生病变时收取病毒,TCID50为10-6.2～10-6.3/ml。对照组细胞上清的血凝反应为阴性,接种病毒细胞上清的血凝价为212。对照组的8孔细胞生长正常,接种病毒的8孔细胞全部产生病变。250.0和25.0μg/ml 2个浓度的抗病毒作用较强,2.5μg/ml的抗病毒作用较弱。在病毒感染前或同时加入多肽的抗病毒作用较好,而在病毒感染后加入多肽的抗病毒作用较弱。[结论]Alloferon1可以用于犬细小病毒病的防治。 展开更多

关键词 Alloferon1 犬细小病毒 抗病毒作用

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“三阶递进”人才培养模式的探索——以江苏畜牧兽医职业技术学院实验动物专业为例 被引量：4

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作者 沈晓鹏 贺生中 卞桂华 《安徽农业科学》 CAS 2012年第36期17946-17947,17949,共3页

为探索校企合作办学机制,推进工学结合人才培养模式改革,结合江苏畜牧兽医职业技术学院实验动物技术专业,依托行业协会,以合作企业、单位为试点,建立"基础训练—实训锻炼—顶岗实习"三阶递进的学生能力培养机制的创新探索,探... 为探索校企合作办学机制,推进工学结合人才培养模式改革,结合江苏畜牧兽医职业技术学院实验动物技术专业,依托行业协会,以合作企业、单位为试点,建立"基础训练—实训锻炼—顶岗实习"三阶递进的学生能力培养机制的创新探索,探讨如何在校企合作、工学结合模式下创新人才培养模式。 展开更多

关键词 工学结合 三阶递进 人才培养模式

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磷酸二酯酶抑制剂对水牛卵母细胞体外成熟的影响 被引量：3

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作者 陈明 朱云干 卞桂华 《安徽农业科学》 CAS 2012年第5期2724-2724,2745,共2页

[目的]探讨磷酸二酯酶抑制剂米力农(milrinone)对水牛卵母细胞成熟的影响。[方法]水牛卵母细胞分成3组,分别在含0、50、100μmol/L的milrinone的成熟液中培养16 h后,每组的一半卵母细胞用来染色,检验核成熟情况;另一半卵母细胞再在不含m... [目的]探讨磷酸二酯酶抑制剂米力农(milrinone)对水牛卵母细胞成熟的影响。[方法]水牛卵母细胞分成3组,分别在含0、50、100μmol/L的milrinone的成熟液中培养16 h后,每组的一半卵母细胞用来染色,检验核成熟情况;另一半卵母细胞再在不含milrinone的成熟液中培养12 h,挑选形态正常的卵母细胞受精后培养。[结果]添加50和100μmol/L milrinone的成熟液成熟的卵母细胞的生发泡破裂(GVBD)比率分别为25.9%和12.1%,显著低于对照组(76.9%);但另一半卵母细胞再培养、受精后试验组(50、100μmol/L mil-rinone)的分裂率(59.3%和61.2%)和囊胚率(35.9%和31.1%)与对照组(56.7%和28.8%)相比均无显著性差异(P>0.05)。[结论]milrinone对水牛卵母细胞的成熟具有明显的抑制作用,成熟抑制解除后水牛卵母细胞仍可保持较高的发育潜能。 展开更多

关键词 水牛 卵母细胞 米力农 体外成熟 体外受精

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无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟方法的初步探讨

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作者 冯贵雪 王晓丽 +3 位作者 卞桂华 石德顺 杨素芳 舒益民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期614-619,共6页

主要探讨无卵丘水牛卵母细胞体外成熟的可行性,以便为研究卵母细胞成熟机理提供模型。无卵丘的水牛卵母细胞随机分为5组,然后分别进行直接成熟培养(M1),与卵丘细胞单层共培养(M2),用未扩展的卵丘细胞块包围培养(M3),与扩展的卵丘细胞团... 主要探讨无卵丘水牛卵母细胞体外成熟的可行性,以便为研究卵母细胞成熟机理提供模型。无卵丘的水牛卵母细胞随机分为5组,然后分别进行直接成熟培养(M1),与卵丘细胞单层共培养(M2),用未扩展的卵丘细胞块包围培养(M3),与扩展的卵丘细胞团共培养(M4)和用卵巢组织包围培养(M5)。无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟培养24 h后检查第一极体(PB1)排出率,随后对这些卵母细胞进行孤雌激活,评定其成熟质量。结果发现,M4组的第一极体排出率明显高于M1组和M5组,其它各组间没有显著差异(P>0.05);M5组的孤雌激活卵裂率显著低于M1组和M4组(P<0.05),而与M2组和M3组没有显著差异(P>0.05),但M3和M4两组的囊胚发育率显著高于M1组和M5组(P<0.05)。这些研究结果表明:(1)未扩展卵丘细胞包围法和扩展卵丘细胞团支撑法可促进无卵丘水牛卵母细胞的体外成熟,但与卵丘细胞单层共培养没有作用;(2)卵巢组织包围培养不利于水牛卵母细胞的体外成熟。 展开更多

关键词 水牛 无卵丘的卵母细胞 体外成熟

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激活素Activin A对猪卵母细胞胞质成熟的影响

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作者 吉俊玲 吴正三 +1 位作者 卞桂华 石德顺 《安徽农业科学》 CAS 2012年第1期213-214,232,共3页

[目的]探讨体外成熟过程中在培养液中添加激活素Activin A对猪卵母细胞胞质成熟的影响。[方法]在TCM-199中添加不同剂量Activin A的培养猪卵母细胞40 h,以激光共聚焦显微镜观察到的着色的线粒体排布形态类型来判断卵母细胞胞质是否成熟... [目的]探讨体外成熟过程中在培养液中添加激活素Activin A对猪卵母细胞胞质成熟的影响。[方法]在TCM-199中添加不同剂量Activin A的培养猪卵母细胞40 h,以激光共聚焦显微镜观察到的着色的线粒体排布形态类型来判断卵母细胞胞质是否成熟。[结果]当Activin A剂量为100 ng/ml时,胞质中线粒体呈弥散型分布形态的卵母细胞数目极显著增加(P<0.01),同时线粒体呈圆周型排布与半周型排布的卵母细胞数目显著下降(P<0.05)。[结论]猪卵母细胞体外成熟过程中在成熟培养液中添加激活素Activin A,能促进卵母细胞胞质的成熟。 展开更多

关键词 ACTIVIN A 猪 卵母细胞 体外成熟 线粒体排布

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猪卵母细胞的皮质颗粒与多精受精

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作者 舒金辉 李秀林 +1 位作者 卞桂华 石德顺 《猪业科学》 2006年第12期12-15,共4页

猪卵母细胞的体外成熟（IVM）和体外受精（IVF）是进行体外生产胚胎（IVP）的重要方法。多精受精常会导致早期胚胎死亡。严重影响着猪胚的IVP技术。受精时皮质颗粒（CGs）中酶的释放使透明带（ZP）上的蛋白分子进行修饰，从而可阻止猪... 猪卵母细胞的体外成熟（IVM）和体外受精（IVF）是进行体外生产胚胎（IVP）的重要方法。多精受精常会导致早期胚胎死亡。严重影响着猪胚的IVP技术。受精时皮质颗粒（CGs）中酶的释放使透明带（ZP）上的蛋白分子进行修饰，从而可阻止猪卵的多精受精。 展开更多

关键词 猪的卵母细胞 多精受精 皮质颗粒 皮质反应

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水牛胚胎附植过程中瘦素及其受体在子宫内膜中的表达 被引量：1

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作者 朱云干 夏剑 卞桂华 《安徽农业科学》 CAS 2013年第4期1553-1554,共2页

[目的]探讨瘦素及其受体ob-Rb在水牛子宫内膜中的表达规律及其对水牛胚胎附植的影响。[方法]母水牛经孕马血清促性腺激素(PMSG)超排后与公牛交配,分别在交配后第0、5、7、9和15天各屠宰10头水牛,分别取胚胎附植部位的子宫组织,提取瘦素... [目的]探讨瘦素及其受体ob-Rb在水牛子宫内膜中的表达规律及其对水牛胚胎附植的影响。[方法]母水牛经孕马血清促性腺激素(PMSG)超排后与公牛交配,分别在交配后第0、5、7、9和15天各屠宰10头水牛,分别取胚胎附植部位的子宫组织,提取瘦素及其受体总RNA。利用RT-PCR方法检测不同时期瘦素mRNA及其受体表达情况。[结果]瘦素在胚胎附植过程中在水牛子宫内膜都有表达,各时期的表达水平差异不明显(P>0.05),Ob-Rb在胚胎附植过程中亦有表达,但是交配后第7、9和15天的表达水平与0和5天差异显著(P<0.05),并且在妊娠期0～7天内表达水平上升,7天达到峰值,然后下降。[结论]瘦素及其受体Ob-Rb可能不仅参与胚胎的附植,而且也可能参与附植后胚胎的生长发育。 展开更多

关键词 水牛 瘦素 Ob-Rb 子宫内膜 附植

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