目的建立TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法。方法针对CYP2C19基因*2、*3和*17位点设计合成相应引物及双标记探针。选取2021年3月至2022年6月贵州省人民医院心内科门诊已知基因型的剩余全血样本42例,覆盖...目的建立TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法。方法针对CYP2C19基因*2、*3和*17位点设计合成相应引物及双标记探针。选取2021年3月至2022年6月贵州省人民医院心内科门诊已知基因型的剩余全血样本42例,覆盖每个位点的每个基因型各10例,提取DNA进行聚合酶链反应(PCR)检测,产物进行电泳和Sanger法测序分析。加样1、10、100、800 ng DNA,进行PCR检测以评价灵敏度。每个位点的每个基因型5例,每周1次对其检测,连续3周,以评价重复性。结果设计的引物扩增出目的基因片段,电泳显示明亮的单一的DNA条带;90个基因型的PCR结果与测序结果完全一致(P>0.05);不同加样量PCR法均可准确判读基因型,所有基因型在1 ng水平的Ct值均<34。同一基因型3次重复检测的结果一致。结论本研究成功建立了TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法,具有快速、准确、灵敏、简便的特点。展开更多
文摘目的建立TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法。方法针对CYP2C19基因*2、*3和*17位点设计合成相应引物及双标记探针。选取2021年3月至2022年6月贵州省人民医院心内科门诊已知基因型的剩余全血样本42例,覆盖每个位点的每个基因型各10例,提取DNA进行聚合酶链反应(PCR)检测,产物进行电泳和Sanger法测序分析。加样1、10、100、800 ng DNA,进行PCR检测以评价灵敏度。每个位点的每个基因型5例,每周1次对其检测,连续3周,以评价重复性。结果设计的引物扩增出目的基因片段,电泳显示明亮的单一的DNA条带;90个基因型的PCR结果与测序结果完全一致(P>0.05);不同加样量PCR法均可准确判读基因型,所有基因型在1 ng水平的Ct值均<34。同一基因型3次重复检测的结果一致。结论本研究成功建立了TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法,具有快速、准确、灵敏、简便的特点。
