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斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因调控研究
被引量：
4
1
作者
包林珠
时灿
+5 位作者
卢玲儿
徐行
周泽斌
任建峰
李伟明
张庆华
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期160-168,共9页
旨在研究斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因的调控作用。通过生信网站分析斑马鱼tp53启动子序列与mapk1基因CDS序列,构建斑马鱼tp53启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-tp53-Luc和mapk1表达质粒pCMV-Tag2B-mapk1。利用Luciferase实...
旨在研究斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因的调控作用。通过生信网站分析斑马鱼tp53启动子序列与mapk1基因CDS序列,构建斑马鱼tp53启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-tp53-Luc和mapk1表达质粒pCMV-Tag2B-mapk1。利用Luciferase实验验证tp53启动子报告基因的活性,以及mapk1基因对tp53基因的活性影响。结果显示,斑马鱼tp53基因启动子区无CpG岛位点,包含Oct-1(TATGTAAAGC)、Sp-1(AGATCCCGCC)、c-Jun(CTGACGTCAC)、CREB(CTGACGTCAC)、CREBP1(CTGACGTCAC)、NF-kappa B1(AGGGGAATCC)和RAR-alpha1(TTGAACTTTT)共7个转录因子结合位点;斑马鱼与人和小鼠MAPK1氨基酸的一致性分别为91.33%和90.79%。pGL3-tp53-Luc在哺乳动物细胞系和鱼类细胞系中均具有很高的活性,分别是对照组的17倍和9倍。在HEK293T细胞中过表达pCMV-Tag2B-mapk1质粒后pGL3-tp53-Luc的luciferase活性是对照组的3倍左右。实验验证了斑马鱼mapk1基因可促进tp53基因的表达。
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关键词
斑马鱼
TP53
mapk1
报告基因
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职称材料
斑马鱼ddx27基因对tp53基因的调控作用
2
作者
陈改拓
周志杰
+4 位作者
周泽斌
包林珠
邱军强
李伟明
张庆华
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期201-207,共7页
为探究斑马鱼ddx27基因对tp53基因表达的影响,根据NCBI网站在线数据库中分析得到的ddx27基因编码序列(coding sequence,CDS),利用同源重组技术构建斑马鱼ddx27真核表达载体pCMV-3×Flagddx27。通过亚细胞定位试验和蛋白质免疫印迹...
为探究斑马鱼ddx27基因对tp53基因表达的影响,根据NCBI网站在线数据库中分析得到的ddx27基因编码序列(coding sequence,CDS),利用同源重组技术构建斑马鱼ddx27真核表达载体pCMV-3×Flagddx27。通过亚细胞定位试验和蛋白质免疫印迹技术验证ddx27基因的表达,并利用双荧光素酶试验验证ddx27基因的过表达对tp53基因转录活性的影响。结果显示,ddx27 CDS区及阳性克隆的电泳片段大小以及测序比对均与预期结果一致。蛋白质免疫印迹显示Ddx27重组质粒可正常表达,且蛋白大小与预测结果一致。亚细胞定位显示Ddx27蛋白表达于HEK293T细胞的细胞核中。而且,过表达pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体能够显著增强tp53启动子报告基因载体pGL3-tp53-Luc的活性,为对照组的1.8倍(P<0.05)。以上结果表明,斑马鱼pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体构建成功,能够在哺乳动物的细胞核中表达,且ddx27基因可以促进tp53基因的表达。
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关键词
斑马鱼
ddx27
亚细胞定位
真核表达载体
TP53
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职称材料
题名
斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因调控研究
被引量：
4
1
作者
包林珠
时灿
卢玲儿
徐行
周泽斌
任建峰
李伟明
张庆华
机构
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室
上海海洋大学中国科学技术部海洋生物科学国际联合研究中心
密歇根州立大学渔业与野生生物系
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期160-168,共9页
基金
教育部留学回国人员科研启动基金(D-8002-15-0042)
中美海洋研究中心基金(A1-0209-15-0806)
水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设和前沿科学研究(A1-3201-19-3013)。
文摘
旨在研究斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因的调控作用。通过生信网站分析斑马鱼tp53启动子序列与mapk1基因CDS序列,构建斑马鱼tp53启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-tp53-Luc和mapk1表达质粒pCMV-Tag2B-mapk1。利用Luciferase实验验证tp53启动子报告基因的活性,以及mapk1基因对tp53基因的活性影响。结果显示,斑马鱼tp53基因启动子区无CpG岛位点,包含Oct-1(TATGTAAAGC)、Sp-1(AGATCCCGCC)、c-Jun(CTGACGTCAC)、CREB(CTGACGTCAC)、CREBP1(CTGACGTCAC)、NF-kappa B1(AGGGGAATCC)和RAR-alpha1(TTGAACTTTT)共7个转录因子结合位点;斑马鱼与人和小鼠MAPK1氨基酸的一致性分别为91.33%和90.79%。pGL3-tp53-Luc在哺乳动物细胞系和鱼类细胞系中均具有很高的活性,分别是对照组的17倍和9倍。在HEK293T细胞中过表达pCMV-Tag2B-mapk1质粒后pGL3-tp53-Luc的luciferase活性是对照组的3倍左右。实验验证了斑马鱼mapk1基因可促进tp53基因的表达。
关键词
斑马鱼
TP53
mapk1
报告基因
Keywords
Danio rerio
tp53
mapk1
reporter gene
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
斑马鱼ddx27基因对tp53基因的调控作用
2
作者
陈改拓
周志杰
周泽斌
包林珠
邱军强
李伟明
张庆华
机构
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室/上海海洋大学国家水生动物病原库
密歇根州立大学农业和自然资源学院
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期201-207,共7页
基金
国家重点研发计划“蓝色粮仓科技创新”专项(2019YFD0900102)
教育部留学回国人员科研启动基金(D-8002-15-0042)
水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设和前沿科学研究(A1-3201-19-3013)。
文摘
为探究斑马鱼ddx27基因对tp53基因表达的影响,根据NCBI网站在线数据库中分析得到的ddx27基因编码序列(coding sequence,CDS),利用同源重组技术构建斑马鱼ddx27真核表达载体pCMV-3×Flagddx27。通过亚细胞定位试验和蛋白质免疫印迹技术验证ddx27基因的表达,并利用双荧光素酶试验验证ddx27基因的过表达对tp53基因转录活性的影响。结果显示,ddx27 CDS区及阳性克隆的电泳片段大小以及测序比对均与预期结果一致。蛋白质免疫印迹显示Ddx27重组质粒可正常表达,且蛋白大小与预测结果一致。亚细胞定位显示Ddx27蛋白表达于HEK293T细胞的细胞核中。而且,过表达pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体能够显著增强tp53启动子报告基因载体pGL3-tp53-Luc的活性,为对照组的1.8倍(P<0.05)。以上结果表明,斑马鱼pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体构建成功,能够在哺乳动物的细胞核中表达,且ddx27基因可以促进tp53基因的表达。
关键词
斑马鱼
ddx27
亚细胞定位
真核表达载体
TP53
Keywords
zebrafish
ddx27
subcellular localization
eukaryotic expression vector
tp53
分类号
S857.4 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因调控研究
包林珠
时灿
卢玲儿
徐行
周泽斌
任建峰
李伟明
张庆华
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
斑马鱼ddx27基因对tp53基因的调控作用
陈改拓
周志杰
周泽斌
包林珠
邱军强
李伟明
张庆华
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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职称材料
已选择
0
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