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影响猪流行性腹泻病毒复制的关键lncRNA筛选及其功能验证
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作者 杨荔 杜小妹 +3 位作者 刘梦媛 吴圣龙 包文斌 吴正常 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期792-800,共9页
[目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)过程中的作用。[方法]利用感染复数(MOI)为1的PEDV感染IPEC-J2细胞构建细胞病变模型,通过RNA-Seq进行lncRNA测... [目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)过程中的作用。[方法]利用感染复数(MOI)为1的PEDV感染IPEC-J2细胞构建细胞病变模型,通过RNA-Seq进行lncRNA测序,筛选出影响PEDV复制的关键lncRNA;利用实时荧光定量PCR和核质分离检测lncRNA表达和细胞定位;构建RNA干扰载体并转染IPEC-J2细胞,通过病毒拷贝数测定、Western blotting、半数组织培养感染剂量(TCID_(50))以及间接免疫荧光试验(IFA)检测lncRNA表达对PEDV复制水平的影响。[结果]PEDV感染IPEC-J2细胞24 h时,细胞病变最为明显,成功构建细胞病变模型。与对照组相比,PEDV感染组中存在61个差异表达lncRNA,其中19个上调,42个下调,筛选出1个显著上调且差异倍数较大的lncRNA——lncMSTRG.10733.2。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,PEDV感染IPEC-J2细胞后,lncMSTRG.10733.2表达水平显著上调(P<0.05)。核质分离测定结果显示,lncMSTRG.10733.2主要分布在IPEC-J2细胞质中。成功构建了lncMSTRG.10733.2瞬时干扰IPEC-J2细胞,干扰效率为45.9%。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,lncRNA干扰后,PEDV-M基因mRNA相对表达量和PEDV N蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TCID_(50)测定结果显示,lncRNA干扰后PEDV滴度极显著上升(P<0.01);IFA结果显示,lncRNA干扰后IPEC-J2细胞中的PEDV N蛋白荧光分布水平明显增加。[结论]本研究基于高通量测序从细胞水平上筛选鉴定出1个与PEDV感染密切相关的lncRNA,其表达水平上调有利于提高猪对PEDV感染的抵抗能力。研究结果揭示了lncRNA在PEDV感染宿主过程中的重要作用,为今后制定PEDV的抗病育种工作策略和筛选分子标记物奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) lncRNA IPEC-J2 病毒复制
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干扰素刺激基因ISG15对猪流行性腹泻病毒复制的作用及机制分析 被引量:2
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作者 刘莉莉 边缘 +2 位作者 吴圣龙 包文斌 吴正常 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2545-2555,共11页
【目的】探究干扰素刺激基因ISG15在猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制中所发挥的作用及机制。【方法】利用实时荧光定量PCR检测ISG15基因组织表达谱及肠道组织差异表达情况,同时以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究模型,检测PEDV CV777毒株感染... 【目的】探究干扰素刺激基因ISG15在猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制中所发挥的作用及机制。【方法】利用实时荧光定量PCR检测ISG15基因组织表达谱及肠道组织差异表达情况,同时以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究模型,检测PEDV CV777毒株感染细胞不同时间点PEDV M基因mRNA和N蛋白表达量,并从RNA和蛋白水平检测ISG15表达变化;分别构建猪ISG15基因干扰和过表达细胞,通过实时荧光定量PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验检测ISG15基因表达对PEDV复制水平的影响;对ISG15基因过表达前后进行转录组测序分析,筛选其下游调控基因及信号通路。【结果】ISG15基因在仔猪肠道组织中特异性高表达,其中空肠和回肠中表达量极显著高于其他组织(P<0.01);PEDV感染组十二指肠、空肠及回肠中ISG15基因表达量显著或极显著高于健康组(P<0.05;P<0.01);M基因mRNA和N蛋白表达量出现上升趋势,与0 h相比,ISG15基因表达水平在24 h出现极显著上调(P<0.01);ISG15基因过表达后PEDV复制出现显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01),而ISG15基因干扰后PEDV复制出现极显著上调(P<0.01);转录组测序发现,过表达ISG15基因前后存在1 532个差异表达基因,且其主要富集在自噬、MAPK、内吞等信号通路中。【结论】本研究揭示了PEDV感染过程中ISG15基因的调控功能及作用机制,发现ISG15基因上调可显著抑制PEDV复制,增进了对PEDV与宿主细胞互作分子机制的认识。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) ISG15基因 病毒复制 转录组
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苏山猪和巴克夏猪全基因组ROH检测和选择信号分析
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作者 戴超辉 崔乐康 +8 位作者 李辉 赵为民 付言峰 李碧侠 王学敏 廖超 陈彦羽 包文斌 程金花 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5452-5463,共12页
旨在明确苏山猪群体和巴克夏猪群体的遗传变异位点和多态信息,本研究首先对43个苏山猪样本和21个巴克夏猪样本进行DNA提取,然后利用“中芯一号”50K SNP芯片对DNA的SNP位点进行检测;使用Plink软件对SNP位点进行主成分分析;使用DetectRUN... 旨在明确苏山猪群体和巴克夏猪群体的遗传变异位点和多态信息,本研究首先对43个苏山猪样本和21个巴克夏猪样本进行DNA提取,然后利用“中芯一号”50K SNP芯片对DNA的SNP位点进行检测;使用Plink软件对SNP位点进行主成分分析;使用DetectRUNS软件包对样本进行全基因组ROH检测;选用3种方法(ROH、CLR和iHS)对选择信号进行分析。本研究总共鉴定到苏山猪42282个SNPs位点和巴克夏猪27718个SNPs位点。其中,苏山猪和巴克夏猪均被划分为3个家系。本研究在苏山猪中共检测到2071个ROH片段,F_(ROH)平均值为0.096。巴克夏猪中共检测到1853个ROH片段,F_(ROH)平均值为0.199。在苏山猪和巴克夏猪群体中分别检测到4个和40个高频ROH区域,分别注释到8个和103个基因,通过富集分析鉴定了50个显著的候选基因。另外,通过ROH、CLR和iHS共3种选择信号分析方法,对苏山猪和巴克夏猪的选择信号区域进行了鉴定,发现有42个基因可能受到选择。本研究初步揭示了苏山猪和巴克夏猪的基因组SNP图谱,并通过高频ROH分析和选择信号检测鉴定到一些可能影响猪的生长发育、肉质、营养和一般抗病力的基因,为苏山猪和巴克夏猪的选育利用提供了理论基础。 展开更多
关键词 ROH CLR IHS 选择信号
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基于CRISPR/Cas9技术构建猪KLF4基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析
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作者 董娇 陆繁 +3 位作者 方晓敏 陈瑜哲 包文斌 王海飞 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期893-902,共10页
【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(... 【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3),经退火形成的双链DNA与线性化pGK1.1载体连接,产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞进行鉴定,并将重组载体转染至猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)。PCR扩增敲除位点附近序列,并通过测序判断sgRNA敲除效率;利用CruiserTMEnzyme酶切鉴定阳性细胞克隆,通过TA克隆测序鉴定敲除序列;利用Western blotting检测基因敲除细胞中KLF4蛋白表达情况。利用CCK-8和流式细胞术检测KLF4基因敲除后细胞活性和细胞周期的变化。【结果】重组载体测序结果显示,sgRNAs与pGK1.1成功连接。分析敲除效率发现,3个sgRNAs均可对靶序列进行敲除,其中sgRNA3有较高的敲除效率。PCR产物经CruiserTMEnzyme酶切筛选出2个阳性单克隆细胞。TA克隆测序分析发现,KLF4基因2个等位基因序列分别缺失116和137 bp。Western blotting结果表明,KLF4基因敲除细胞中未见KLF4蛋白表达。细胞活性及细胞周期分析显示,敲除KLF4基因极显著抑制了细胞活性(P<0.01),并导致G0/S细胞周期阻滞。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了KLF4基因敲除的IPEC-J2细胞,且KLF4基因敲除可抑制细胞活性,并引起G0/S细胞周期阻滞。KLF4基因敲除细胞可为进一步探究KLF4基因功能及分子机制提供材料。 展开更多
关键词 KLF4基因 CRISPR/Cas9技术 细胞活性 细胞周期
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中国家鸡和红色原鸡mtDNA控制区遗传多态性及系统进化分析 被引量:61
5
作者 包文斌 束婧婷 +3 位作者 王存波 张红霞 Steffen Weigend 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1449-1459,共11页
通过线粒体DNA控制区的结构和多态性来研究中国家鸡和红色原鸡的遗传多态性与系统进化。测定14个中国地方鸡种和红色原鸡2个亚种的256个个体线粒体DNA控制区部分序列约560bp,结果表明,A、C、G、T这4种核苷酸的平均比例分别为25.∞%... 通过线粒体DNA控制区的结构和多态性来研究中国家鸡和红色原鸡的遗传多态性与系统进化。测定14个中国地方鸡种和红色原鸡2个亚种的256个个体线粒体DNA控制区部分序列约560bp,结果表明,A、C、G、T这4种核苷酸的平均比例分别为25.∞%、37.40%、4.40%和33.20%。共发现44个变异位点,约占分析位点总数的7.86%,没有观测到插入/缺失,颠换和转换之比为0.13;共具有32种单倍型,9种为共享单倍型;16个群体内单倍型多样度从0到0.964,单倍型变异度总体为0.909±0.014,整体的平均核苷酸差异数为7.276,核苷酸多样度为1.851%。群体间核苷酸分歧度(Dxy)在0.747%~3.125%之间变化,核苷酸净遗传距离(Da)为0.015%~2.633%。16个群体表现出较高水平的遗传多态性,群体间表现出显著的遗传分化。群体遗传多态性和亲缘关系分析表明,一些中国家鸡的群体(如固始鸡和仙居鸡)起源于泰国红色原鸡Gallus gallu sgallus亚种,一些中国家鸡的群体(如茶花鸡和藏鸡等)起源于中国红色原鸡Gallus gallus spadiceus亚种,在一些中国地方鸡种还同时具有这2种红色原鸡的遗传贡献;认为中国家鸡起源于泰国或单纯起源于中国的观点都是不全面的。 展开更多
关键词 红色原鸡 家鸡 线粒体DNA控制区 遗传多样性 起源
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19个猪种SLA-DQB基因外显子2多态性分析 被引量:10
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作者 包文斌 吴圣龙 +3 位作者 曹晶晶 鞠慧萍 朱国强 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1550-1554,共5页
本研究旨在系统分析国内外猪种SLA-DQB基因的多态性,以期为进一步研究猪SLA-DQB与疾病抗性的相关性提供理论依据。采用PCR-RFLP方法,野猪、14个中国地方猪种和4个引进猪种SLA-DQB基因第2外显子经限制性内切酶HaeⅢ酶切后,共检测到5个等... 本研究旨在系统分析国内外猪种SLA-DQB基因的多态性,以期为进一步研究猪SLA-DQB与疾病抗性的相关性提供理论依据。采用PCR-RFLP方法,野猪、14个中国地方猪种和4个引进猪种SLA-DQB基因第2外显子经限制性内切酶HaeⅢ酶切后,共检测到5个等位基因,9种基因型。其中野猪中仅存在A、B 2种等位基因;家猪群体中出现了野猪群体中所没有的6种基因型和3种等位基因。中国地方猪种与引进猪种相比,RFLP带型较为丰富,五指山猪和淮猪中具有8种基因型,多态性最为丰富。除野猪群体中A等位基因为优势等位基因外,其它所有家猪群体中均以B和C基因为优势等位基因;临高猪中出现其它猪种所没有的D等位基因,表现出独特的特性。本研究结果提示,生态环境和遗传纯度均可能影响SLA-DQB等位基因的多样性,总体上,引进猪种、培育猪种和地方猪种SLA-DQB基因外显子2的基因型分布并不存在明显的差异,但PCR-RFLP带型在具体的品种之间的差别较大。 展开更多
关键词 SLA-DQB基因 野猪 地方猪种 引进猪种
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猪TLR4基因在F18大肠杆菌抗性型和敏感型资源群体间的差异表达分析 被引量:7
7
作者 包文斌 潘章源 +6 位作者 朱璟 叶兰 杜子栋 蔡家嘉 黄小国 朱国强 吴圣龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期278-283,共6页
本研究旨在检测TLR4基因mRNA在猪各个组织的分布以及在F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间差异表达水平,为探讨该基因在免疫识别和F18大肠杆菌抗性中发挥的作用提供理论依据。本试验运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行定量测定。首... 本研究旨在检测TLR4基因mRNA在猪各个组织的分布以及在F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间差异表达水平,为探讨该基因在免疫识别和F18大肠杆菌抗性中发挥的作用提供理论依据。本试验运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行定量测定。首先,各取8头35日龄F18大肠杆菌抗性型和敏感型苏太仔猪组织样,包括心脏、肝脏、脾脏等11个组织,提取总RNA,以GAPDH基因为内参基因,进行实时荧光定量PCR。对TLR4基因mR-NA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算TLR4基因mRNA在各个组织以及F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间表达量。结果显示,TLR4 mRNA在猪各种组织中广泛表达,在肺、淋巴结、肾脏和脾脏等免疫器官中表达量较高,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量普遍高于抗性型个体的表达量,在各个组织中(除胃外)TLR4表达量差异倍数从1.083到2.980不等;在肺、淋巴结、肾脏和胸腺组织中,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量显著高于抗性型个体的表达量(P<0.05)。本研究结果表明,TLR4基因通过天然免疫识别机制对猪F18大肠杆菌病等革兰氏阴性疾病有一定的影响,TLR4基因表达量的下调与F18大肠杆菌的抗性具有一定程度的关系。 展开更多
关键词 TLR4基因 F18大肠杆菌 REAL-TIME PCR 表达谱
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苏太猪SLA-DQB基因外显子2多态性及其与繁殖性能的关联分析 被引量:15
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作者 包文斌 吴圣龙 +3 位作者 陈国宏 鞠慧萍 华金第 黄雪根 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期636-640,共5页
采用PCR-RFLP法对苏太猪SLA-DQB基因外显子2的PCR产物进行分析,结果显示,SLA-DQB基因外显子2经RsaⅠ酶切后,共分出4种基因型;经HaeⅢ酶切,共分出3种基因型。χ2适合性检验结果表明,苏太猪SLA-DQB基因外显子2在RsaⅠ和HaeⅢ酶切位点都已... 采用PCR-RFLP法对苏太猪SLA-DQB基因外显子2的PCR产物进行分析,结果显示,SLA-DQB基因外显子2经RsaⅠ酶切后,共分出4种基因型;经HaeⅢ酶切,共分出3种基因型。χ2适合性检验结果表明,苏太猪SLA-DQB基因外显子2在RsaⅠ和HaeⅢ酶切位点都已经达到了Hardy-Weinberg平衡状态。在RsaⅠ和HaeⅢ酶切后分出的4种组合带型中,组合带型为BBEE的种母猪第3胎总产仔数、产活仔数、初生窝重、断奶仔猪数和断奶窝重均显著高于组合带型为AADD的个体(P<0.05),也高于组合带型为ABDE和ACDE的个体,但是差异不显著(P>0.05)。 展开更多
关键词 SLA-DQB PCR-RFLP
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苏太猪FUT1基因M307位点多态性及其对部分免疫指标的遗传效应分析 被引量:7
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作者 包文斌 叶兰 +4 位作者 潘章源 朱璟 黄雪根 华金第 吴圣龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1219-1224,共6页
本研究旨在分析苏太猪抗F18大肠杆菌病育种基础群FUT1基因M307位点对部分免疫指标的遗传效应,为下一步苏太猪抗病育种工作提供一定的理论依据。采用PCR-RFLP方法对苏太猪抗F18大肠杆菌病育种基础群FUT1基因M307多态性进行分析,并探讨其... 本研究旨在分析苏太猪抗F18大肠杆菌病育种基础群FUT1基因M307位点对部分免疫指标的遗传效应,为下一步苏太猪抗病育种工作提供一定的理论依据。采用PCR-RFLP方法对苏太猪抗F18大肠杆菌病育种基础群FUT1基因M307多态性进行分析,并探讨其与部分免疫指标的关系。结果表明,基础群中576个个体FUT1基因M307位点经Hin6Ⅰ酶切后,产生AA、AG和GG3种基因型,基因型频率分别为0.235、0.609和0.156,抗性基因A为优势等位基因,频率为0.540;群体显著偏离了Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.01)。AA基因型个体的血红蛋白(HGB)和白细胞计数(WTBC)显著高于AG和GG型个体(P<0.05),AG和GG型个体间差异不显著(P>0.05);AA基因型个体的异嗜性粒细胞与淋巴细胞比率(H/L值)显著低于AG和GG型个体(P<0.05),AG和GG型个体间差异不显著(P>0.05);AA基因型个体与AG和GG型个体间SRBC抗体滴度差异不显著(P>0.05)。本试验结果初步说明苏太猪F18抗性型群体具有抗逆性强的优良特性,AA基因型不仅对仔猪断奶后水肿病和腹泻病具有抗性,而且具有较高的一般抗病力。 展开更多
关键词 FUT1基因 F18大肠杆菌 免疫指标 苏太猪 抗病育种
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微卫星标记与仙居鸡体重的相关性 被引量:8
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作者 包文斌 周群兰 +4 位作者 吴信生 卢克伦 张学余 王克华 陈国宏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2005年第4期652-653,共2页
利用29个微卫星标记的多态性分析仙居鸡12周龄体重与微卫星标记的相关性。试验结果表明:位于3号染色体和连锁群E27C36W25W26上的2个微卫星标记MCW222、MCW165与仙居鸡12周龄体重显著相关。
关键词 仙居鸡 微卫星 体重
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鸟类性别鉴定的分子生物学方法 被引量:17
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作者 包文斌 胡飞 +1 位作者 徐琪 陈国宏 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期33-36,共4页
性别鉴定对鸟类特别是濒危珍稀鸟类的饲养管理、人工繁育、遗传疾病的防治和进化研究等方面都有非常重要的意义,作者总结了以往鸟类性别鉴定形态学和细胞生物学方法,分析比较了现行的较为先进可行的分子生物学方法,指出与其他鸟类性别... 性别鉴定对鸟类特别是濒危珍稀鸟类的饲养管理、人工繁育、遗传疾病的防治和进化研究等方面都有非常重要的意义,作者总结了以往鸟类性别鉴定形态学和细胞生物学方法,分析比较了现行的较为先进可行的分子生物学方法,指出与其他鸟类性别鉴定方法相比,PCR鉴定方法尤其是CHD-W基因鉴定是到目前为止最为简单快捷、准确可靠的鸟类性别鉴定的途径,在未来存在广阔的应用前景。 展开更多
关键词 鸟类 性别鉴定 分子生物学
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11个地方鸡品种性状间的典型相关分析 被引量:30
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作者 吴信生 徐琪 +5 位作者 肖小珺 张学余 吴圣龙 包文斌 李碧春 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期576-581,共6页
对中国部分地方鸡品种的体尺性状、屠宰性状、产蛋性状和生态性状等4组性状间的17个变量关系进行了典型相关分析。结果表明,体尺性状和屠宰性状间、体尺性状与生态性状间以及屠宰性状与生态性状间的第1个典型相关系数达极显著水平,分别... 对中国部分地方鸡品种的体尺性状、屠宰性状、产蛋性状和生态性状等4组性状间的17个变量关系进行了典型相关分析。结果表明,体尺性状和屠宰性状间、体尺性状与生态性状间以及屠宰性状与生态性状间的第1个典型相关系数达极显著水平,分别占总相关信息的38.17%、42.73%和42.13%,其典型相关系数分别为0.998、0.997和0.998;体尺性状与产蛋性状间和产蛋性状与生态性状间的第1个典型相关系数达显著水平,分别占总相关信息的42.55%和66.79%,其典型相关系数分别为0.965和0.984。研究结果对于鸡的遗传育种具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 地方鸡品种 体尺性状 屠宰性状 产蛋性状 生态性状 典型相关
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鸡ADSL基因和GARS-AIRS-GART基因对鸡肉肌苷酸(IMP)含量的影响 被引量:17
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作者 束婧婷 吉文林 +3 位作者 包文斌 陈国宏 张学余 季从亮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期786-791,共6页
以鸡ADSL基因、GARS-AIRS-GART基因为侯选基因,以隐性白羽鸡、丝羽乌骨鸡、萧山鸡、白耳鸡、藏鸡为试验材料,采用PCR-SSCP方法对ADSL外显子2、GARS-AIRS-GART基因5′侧翼序列进行SNPs检测。结果各发现了一个单核苷酸多态性位点。各种基... 以鸡ADSL基因、GARS-AIRS-GART基因为侯选基因,以隐性白羽鸡、丝羽乌骨鸡、萧山鸡、白耳鸡、藏鸡为试验材料,采用PCR-SSCP方法对ADSL外显子2、GARS-AIRS-GART基因5′侧翼序列进行SNPs检测。结果各发现了一个单核苷酸多态性位点。各种基因型与胸肌IMP含量的最小二乘分析结果表明:ADSL基因TT型个体的胸肌肌苷酸含量极显著地高于CC型、显著地高于CT型个体,CT型个体也高于CC型,但差异不显著;GARS-AIRS-GART基因TT型个体的胸肌肌苷酸含量极显著地高于CT型和CC型个体,CT型个体也高于CC型,但差异不显著。ADSL和GARS-AIRS-GART基因的合并基因型对IMP含量也有显著的影响,合并基因型为TTTT的个体IMP含量显著高于CCCC合并基因型的个体,高出1.584 mg/g,因此可以利用该合并基因型对鸡的肉质风味性状进行标记辅助选择。 展开更多
关键词 腺苷琥珀酸裂解酶基因 GARS-AIRS-GART基因 单核苷酸多态性 肌苷酸
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LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析 被引量:17
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作者 孙丽 夏日炜 +4 位作者 殷学梅 喻礼怀 朱国强 吴圣龙 包文斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1095-1101,共7页
本试验通过0.1和1μg·mL-1浓度的LPS诱导处理猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),分别在2、4、6h时利用实时荧光定量PCR方法检测TLR4及其信号通路相关基因(CD14、MyD88、TNF-α、IL-1β和IFN-α)mRNA水平相对表达量,初步探讨猪小肠上皮细胞... 本试验通过0.1和1μg·mL-1浓度的LPS诱导处理猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),分别在2、4、6h时利用实时荧光定量PCR方法检测TLR4及其信号通路相关基因(CD14、MyD88、TNF-α、IL-1β和IFN-α)mRNA水平相对表达量,初步探讨猪小肠上皮细胞受到产肠毒素大肠杆菌侵扰发生炎症反应的相关分子反应机理。结果发现,两种浓度的LPS均使得所检测的TLR4及其信号通路相关基因表达量上调,诱导后4~6h的表达量急速上升,且高浓度的LPS诱导处理后各基因表达量上调倍数明显高于低浓度LPS诱导时各基因表达量上调倍数,高浓度的LPS对机体肠道的刺激引起了更为强烈的免疫反应,使正常机体更快地产生炎症反应。由此推测,大肠杆菌侵染猪肠道后将释放LPS,TLR4作为LPS的受体,受LPS诱导其表达量上调,进而引起TLR4信号途径的信号传递,传递过程中由于MyD88的依赖机制,MyD88表达量上调相对稳定,再经过级联免疫放大效应,大量的促炎细胞因子释放,导致炎症及腹泻水肿病的产生。 展开更多
关键词 TLR4基因 信号通路 细胞因子
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复合氨基酸络合铁、锌对肥育猪生产性能和部分血液生化指标的影响 被引量:15
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作者 詹康 李艳 +3 位作者 包文斌 赵国琦 喻礼怀 霍永久 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期769-774,共6页
本试验旨在研究复合氨基酸络合铁、锌对肥育猪生产性能、屠宰性能、血液生化指标、肝和肌肉铁、锌含量的影响。试验选择初始体重相近((55.63±1.33)kg)的杜×长×大育肥猪36头,随机分为3个组,每个组3个重复,每个重复4头猪,... 本试验旨在研究复合氨基酸络合铁、锌对肥育猪生产性能、屠宰性能、血液生化指标、肝和肌肉铁、锌含量的影响。试验选择初始体重相近((55.63±1.33)kg)的杜×长×大育肥猪36头,随机分为3个组,每个组3个重复,每个重复4头猪,公母各半,饲养期8周。对照组饲喂铁、锌含量均为100mg·kg-1(由硫酸亚铁、硫酸锌提供)的基础日粮,试验1组饲喂铁、锌含量均为50mg·kg-1(由硫酸亚铁、硫酸锌提供)+50mg·kg-1(由氨基酸络合铁锌提供)的基础日粮,试验2组饲喂铁、锌含量均为100mg·kg-1(由氨基酸络合铁锌提供)的基础日粮。结果表明,试验2组的末重、平均日增重、体斜长、体直长、总蛋白、肝和肌肉铁含量均显著高于对照组(P<0.05),血清铁和锌显著高于对照组和试验1组(P<0.05),料重比显著低于对照组(P<0.05)。结果提示,日粮中添加复合氨基酸络合铁、锌各100mg·kg-1可提高肥育猪的生产性能,降低料重比,最终提高饲料转化效率。 展开更多
关键词 肥育猪 生产性能
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胎次对杜洛克、长白和大白母猪繁殖性能的影响 被引量:42
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作者 朱世平 孙丽 +3 位作者 殷学梅 侯小亮 包文斌 吴圣龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期197-200,共4页
为了研究胎次对杜洛克、长白和大白母猪繁殖性能的影响,根据江苏省某国家级生猪核心育种场2009—2011年出生的繁殖母猪资料,分别选取128头杜洛克、681头长白和610头大白母猪共7280窝生产数据,统计分析不同胎次母猪的总产仔数、产活仔数... 为了研究胎次对杜洛克、长白和大白母猪繁殖性能的影响,根据江苏省某国家级生猪核心育种场2009—2011年出生的繁殖母猪资料,分别选取128头杜洛克、681头长白和610头大白母猪共7280窝生产数据,统计分析不同胎次母猪的总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重及校正21日龄窝重。此外,依据胎次将母猪分为3个繁殖阶段(1-2胎、3-6胎及7-8胎)来探究品种差异对母猪繁殖性能的影响。结果表明:胎次对母猪繁殖性能有显著影响(P〈0.05),母猪1-4胎的总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数及初生窝重随胎次呈增加趋势,第4胎达到高峰,且显著高于其他胎次(P〈0.05);3-6胎繁殖性能较好,7胎之后出现迅速下降趋势;除在第4胎略有下降外,其他胎次的校正21日龄窝重随胎次递增。品种对母猪繁殖性能的影响显著(P〈0.05),长白和大白母猪的繁殖性能均极显著高于杜洛克母猪(P〈0.01);长白母猪的产活仔数和校正21日龄窝重显著高于大白母猪(P〈0.05),2个品种其他繁殖性能无显著差异(P〉0.05)。综上所述,杜洛克、长白和大白母猪的最佳繁殖胎次为3-6胎,长白猪的繁殖性能总体上优于大白猪,就本试验所在的育种场而言,长白猪可能更适合作为二元母猪生产中的母本。 展开更多
关键词 胎次 母猪 繁殖性能
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大白猪、长白猪和杜洛克猪RBP4基因多态性及其与繁殖性能的相关分析 被引量:18
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作者 刘璐 梁永晔 +5 位作者 吴正常 苏先敏 郑先瑞 王瑾 吴圣龙 包文斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期169-172,共4页
本试验通过PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪和杜洛克猪的视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因第4外显子MspⅠ酶切位点进行多态性分析,并对各基因型母猪的第2、3胎次产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄的窝... 本试验通过PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪和杜洛克猪的视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因第4外显子MspⅠ酶切位点进行多态性分析,并对各基因型母猪的第2、3胎次产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄的窝重及断奶成活率进行测定,进而分析RBP4基因多态性与繁殖性能的关系。结果表明,RBP4基因在3个品种中均存在多态位点;χ2适合性检验表明大白猪在该位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),而长白猪和杜洛克猪在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。其中,大白猪中优势基因型为BB基因型,而长白猪和杜洛克猪中优势基因型为AA基因型。在繁殖性能上,长白猪BB基因型群体第2胎总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄断奶窝重分别高于AA基因型0.97头、1.28头、0.92头、1.74kg和4.42kg,高于AB基因型0.92头、1.02头、0.98头、1.43kg和4.98kg;第3胎次中总体上BB基因型也为有利基因型。 展开更多
关键词 RBP4基因 繁殖性能 大白猪 长白猪 杜洛克猪
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野猪和16个国内外猪种Mx1基因第14外显子多态性分析 被引量:12
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作者 吴圣龙 包文斌 +4 位作者 鞠慧萍 丁浩 李碧春 朱国强 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期257-261,共5页
采用PCR—RFLP方法对野猪和国内外16个猪种Mx1基因第14外显子的多态性进行分析,共检测到3个等位基因,6种基因型。其中外来猪种和松辽黑猪中出现AA、CC和AC3种基因型;野猪和中国地方猪种中出现AA、BB和AB3种基因型;培育猪种中苏太猪... 采用PCR—RFLP方法对野猪和国内外16个猪种Mx1基因第14外显子的多态性进行分析,共检测到3个等位基因,6种基因型。其中外来猪种和松辽黑猪中出现AA、CC和AC3种基因型;野猪和中国地方猪种中出现AA、BB和AB3种基因型;培育猪种中苏太猪中存在全部基因型。B等位基因仅在野猪和中国地方猪种中出现,而C等位基因仅在外来猪种和具有外来猪种血统的培育猪种中出现。根据Mx1基因第14外显子多态位点的基因频率构建的系统发生树也显示,中国地方猪种和外来猪种间的基因型分布存在明显差异,外来猪种和具有外来猪种血统的两个培育猪种聚在一起,野猪和中国地方猪种聚于另一类群,其中枫泾猪、二花脸和梅山猪首先聚在一起,且与野猪的遗传距离最近。野猪和藏猪中AB基因型的频率较高,分别为0.515和0.302,枫泾猪、二花脸和梅山猪中AB基因型频率为0.348-0.591。推测AB基因型可能具有较高的抗病毒能力,而且太湖猪(枫泾猪、二花脸和梅山猪)可能是进行猪流感病毒抗病育种的较好素材。 展开更多
关键词 Mx1基因 野猪 地方猪种 外来猪种
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鸭生长激素(GH)基因编码区及调控区多态性分析 被引量:12
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作者 许盛海 包文斌 +3 位作者 程金花 黄军 张红霞 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期907-912,共6页
根据鸭生长激素基因编码区及调控区的序列设计8对引物,利用PCR-SSCP方法对北京鸭、西湖野鸭、樱桃谷鸭、金定鸭、山麻鸭、荆江鸭、绍兴鸭、缙云麻鸭等8个鸭种进行单核苷酸多态性分析。结果共发现3个突变位点,分别为230处(C→G)、244处(C... 根据鸭生长激素基因编码区及调控区的序列设计8对引物,利用PCR-SSCP方法对北京鸭、西湖野鸭、樱桃谷鸭、金定鸭、山麻鸭、荆江鸭、绍兴鸭、缙云麻鸭等8个鸭种进行单核苷酸多态性分析。结果共发现3个突变位点,分别为230处(C→G)、244处(C→A)和3 701处(C→T)。前两处突变位于5′调控区,3 701处突变位于编码区第4外显子,但该编码区的突变是沉默突变,3′调控区表现了高度的保守性。统计结果发现:⑴在5′调控区基因座上,金定鸭的等位基因B频率显著高于其他品种;⑵在外显子4基因座上,基因型频率的分布与品种有关,且肉用型鸭的CC基因型频率显著高于蛋用型。可以推测,本研究所检测到的基因座可能与生产性能相关。 展开更多
关键词 生长激素基因 单核苷酸多态性
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胎次、产仔月份及纯繁/杂交对母猪产仔性能的影响 被引量:13
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作者 朱世平 夏日炜 +3 位作者 孙丽 霍永久 包文斌 吴圣龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期420-425,共6页
本研究统计分析了部分非遗传因素(胎次、产仔月份及纯繁/杂交)对长白、大白和杜洛克母猪产仔性能(总产仔数、产活仔数及初生窝重)的影响,旨在为后备母猪的选种提供指导。结果表明,2~5胎仔猪的初生窝重较重;其中2、3胎的初生窝... 本研究统计分析了部分非遗传因素(胎次、产仔月份及纯繁/杂交)对长白、大白和杜洛克母猪产仔性能(总产仔数、产活仔数及初生窝重)的影响,旨在为后备母猪的选种提供指导。结果表明,2~5胎仔猪的初生窝重较重;其中2、3胎的初生窝重极显著高于头胎及6胎之后的仔猪初生窝重(P〈0.01)。3月份总产仔数、产活仔数及初生窝重极显著高于其他月份(P〈0.01),且11月份初生窝重显著低于其他月份(P〈0.05)。长白纯繁母猪在产活仔数方面极显著优于大白纯繁母猪和长白×大白杂交母猪(P〈0.01);在初生窝重方面,大自×长白杂交母猪的初生窝重极显著高于大白纯繁母猪和长白×大白杂交母猪(P〈0.01)。第2胎与3~4胎、第3胎与第4胎的总产仔数呈极显著正相关(P〈0.01)。综上所述,该猪场母猪3~6胎的产仔性能较好,且以1~4月份的产仔性能为佳;配种方式以长白纯繁和大白×长白杂交为宜;第2胎产仔性能可作为后备母猪选留的重要依据。 展开更多
关键词 胎次 产仔月份 纯繁/杂交 产仔性能
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