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同源重组法衣原体RNA聚合酶表达载体的构建和应用
1
作者
石禹
包小峰
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025年第2期113-119,共7页
目的利用同源重组法构建衣原体RNA聚合酶(cRNAP)各亚基质粒,转化入大肠埃希菌中表达蛋白并探讨其在衣原体转录调控中的应用。方法根据Gen Bank中的基因序列设计特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增cRNAP各亚基的目的基因片段,对PCR产物...
目的利用同源重组法构建衣原体RNA聚合酶(cRNAP)各亚基质粒,转化入大肠埃希菌中表达蛋白并探讨其在衣原体转录调控中的应用。方法根据Gen Bank中的基因序列设计特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增cRNAP各亚基的目的基因片段,对PCR产物进行纯化,质粒载体进行质粒抽提、质粒酶切、胶回收等处理。采用同源重组法将基因片段插入到目的载体进行片段融合构建cRNAP各亚基表达质粒,融合产物转化后用特异性引物进行PCR验证和测序。构建好的融合产物转化入大肠埃希菌化学感受态细胞表达蛋白。结果成功构建cRNAP各亚基质粒并成功表达cRNAP各亚基蛋白,研究了衣原体转录调节因子GrgA与cRNAP的直接相互作用是GrgA与cRNAP的α、β′亚基有结合,与β亚基无结合。两者可以作为衣原体感染治疗和预防的药物作用新靶点。结论同源重组法可用于构建cRNAP各亚基质粒并成功表达相应蛋白,并用于研究转录调节因子GrgA与cRNAP各亚基蛋白的结合位点,为衣原体感染治疗和预防药物作用新靶点的研究提供参考信息。
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关键词
同源重组法
衣原体
cRNAP
亚基
质粒载体
融合蛋白
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职称材料
沙眼衣原体转录激活因子GrgA与RNA聚合酶β'亚基的相互作用
2
作者
石禹
包小峰
窦志华
《医学研究与战创伤救治》
CAS
北大核心
2024年第9期897-903,共7页
目的研究沙眼衣原体基因转录调控过程中转录激活因子GrgA与RNA聚合酶(RNAP)β'亚基相互作用的关系。方法制备沙眼衣原体RNA聚合酶(cRNAP)NH-β'(N末端携带His标签)质粒:根据GenBank中的基因序列设计特异性引物,以衣原体基因组DN...
目的研究沙眼衣原体基因转录调控过程中转录激活因子GrgA与RNA聚合酶(RNAP)β'亚基相互作用的关系。方法制备沙眼衣原体RNA聚合酶(cRNAP)NH-β'(N末端携带His标签)质粒:根据GenBank中的基因序列设计特异性引物,以衣原体基因组DNA(gDNA)为模板,聚合酶链式反应技术(PCR)扩增cRNAPβ'亚基的基因片段;采用同源重组法将基因片段插入到目的载体上构建表达质粒,同样方法制备β'亚单位和缺失亚单位质粒;cRNAPβ'亚基蛋白(包括亚单位和缺失亚单位)的表达:将构建的质粒转化ArcticExpress表达菌中,采用考马斯亮蓝染色法鉴定蛋白表达情况;cRNAPβ'亚基及其亚单位蛋白的纯化:采用固定化离子亲和层析法(IMAC)纯化得到相应蛋白;借助体外蛋白结合实验(Pull-down技术)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)分析鉴定出GrgA与cRNAPβ'亚基两者间相互结合的较为详细的某一段氨基酸序列。结果GrgA能与cRNAP的β'亚基结合;GrgA与cRNAP的β'亚基N端的(1-731)氨基酸序列有结合,与C端的(671-1396)氨基酸序列无结合。GrgA与β'亚基的(1-240)和(181-417)氨基酸序列有结合;与β'(360-598)、β'(533-731)氨基酸序列无结合。GrgA与β'△(1-180)和β'△(241-417)有结合,与β'△(1-417)无结合。结论GrgA能与cRNAP的β'亚基结合;cRNAP的β'亚基与GrgA的结合存在2个结合位点,分别位于β'亚基N末端的1-180和241-417位氨基酸序列。
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关键词
沙眼衣原体
cRNAP
GrgA
β'亚基
相互作用
融合蛋白
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职称材料
平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎98例的疗效观察
被引量：
2
3
作者
包小峰
《中国社区医师》
2018年第30期98-98,100,共2页
目的:分析平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎的临床效果。方法:收治慢性浅表性胃炎患者98例,运用平胃散加减治疗,观察临床效果。结果:98例患者中有效81例,显效16例,无效1例,总有效率达到98.97%。结论:平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎,效果确切...
目的:分析平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎的临床效果。方法:收治慢性浅表性胃炎患者98例,运用平胃散加减治疗,观察临床效果。结果:98例患者中有效81例,显效16例,无效1例,总有效率达到98.97%。结论:平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎,效果确切,症状消失明显,食欲明显改善。
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关键词
平胃散
慢性浅表性胃炎
疗效观察
胃镜检查
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职称材料
题名
同源重组法衣原体RNA聚合酶表达载体的构建和应用
1
作者
石禹
包小峰
机构
南通大学附属南通第三医院药学部
南通大学药学院
出处
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025年第2期113-119,共7页
基金
国家自然科学基金(31370209)
南通市卫生健康委员会面上指令课题(MS2022064)。
文摘
目的利用同源重组法构建衣原体RNA聚合酶(cRNAP)各亚基质粒,转化入大肠埃希菌中表达蛋白并探讨其在衣原体转录调控中的应用。方法根据Gen Bank中的基因序列设计特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增cRNAP各亚基的目的基因片段,对PCR产物进行纯化,质粒载体进行质粒抽提、质粒酶切、胶回收等处理。采用同源重组法将基因片段插入到目的载体进行片段融合构建cRNAP各亚基表达质粒,融合产物转化后用特异性引物进行PCR验证和测序。构建好的融合产物转化入大肠埃希菌化学感受态细胞表达蛋白。结果成功构建cRNAP各亚基质粒并成功表达cRNAP各亚基蛋白,研究了衣原体转录调节因子GrgA与cRNAP的直接相互作用是GrgA与cRNAP的α、β′亚基有结合,与β亚基无结合。两者可以作为衣原体感染治疗和预防的药物作用新靶点。结论同源重组法可用于构建cRNAP各亚基质粒并成功表达相应蛋白,并用于研究转录调节因子GrgA与cRNAP各亚基蛋白的结合位点,为衣原体感染治疗和预防药物作用新靶点的研究提供参考信息。
关键词
同源重组法
衣原体
cRNAP
亚基
质粒载体
融合蛋白
Keywords
homologous recombination method
chlamydia
cRNAP
subunit
plasmid vector
fusion protein
分类号
R374 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
沙眼衣原体转录激活因子GrgA与RNA聚合酶β'亚基的相互作用
2
作者
石禹
包小峰
窦志华
机构
南通市第三人民医院
南通大学医学院
出处
《医学研究与战创伤救治》
CAS
北大核心
2024年第9期897-903,共7页
基金
国家自然科学基金(31370209)
南通市卫生健康委员会面上指令课题(MS2022064)。
文摘
目的研究沙眼衣原体基因转录调控过程中转录激活因子GrgA与RNA聚合酶(RNAP)β'亚基相互作用的关系。方法制备沙眼衣原体RNA聚合酶(cRNAP)NH-β'(N末端携带His标签)质粒:根据GenBank中的基因序列设计特异性引物,以衣原体基因组DNA(gDNA)为模板,聚合酶链式反应技术(PCR)扩增cRNAPβ'亚基的基因片段;采用同源重组法将基因片段插入到目的载体上构建表达质粒,同样方法制备β'亚单位和缺失亚单位质粒;cRNAPβ'亚基蛋白(包括亚单位和缺失亚单位)的表达:将构建的质粒转化ArcticExpress表达菌中,采用考马斯亮蓝染色法鉴定蛋白表达情况;cRNAPβ'亚基及其亚单位蛋白的纯化:采用固定化离子亲和层析法(IMAC)纯化得到相应蛋白;借助体外蛋白结合实验(Pull-down技术)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)分析鉴定出GrgA与cRNAPβ'亚基两者间相互结合的较为详细的某一段氨基酸序列。结果GrgA能与cRNAP的β'亚基结合;GrgA与cRNAP的β'亚基N端的(1-731)氨基酸序列有结合,与C端的(671-1396)氨基酸序列无结合。GrgA与β'亚基的(1-240)和(181-417)氨基酸序列有结合;与β'(360-598)、β'(533-731)氨基酸序列无结合。GrgA与β'△(1-180)和β'△(241-417)有结合,与β'△(1-417)无结合。结论GrgA能与cRNAP的β'亚基结合;cRNAP的β'亚基与GrgA的结合存在2个结合位点,分别位于β'亚基N末端的1-180和241-417位氨基酸序列。
关键词
沙眼衣原体
cRNAP
GrgA
β'亚基
相互作用
融合蛋白
Keywords
Chlamydiatrachomatis
cRNAP
GrgA
β′subunit
interact
fusionprotein
分类号
R374.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎98例的疗效观察
被引量：
2
3
作者
包小峰
机构
甘肃省成县妇幼保健院
出处
《中国社区医师》
2018年第30期98-98,100,共2页
文摘
目的:分析平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎的临床效果。方法:收治慢性浅表性胃炎患者98例,运用平胃散加减治疗,观察临床效果。结果:98例患者中有效81例,显效16例,无效1例,总有效率达到98.97%。结论:平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎,效果确切,症状消失明显,食欲明显改善。
关键词
平胃散
慢性浅表性胃炎
疗效观察
胃镜检查
Keywords
Pingwei powder
Chronic superficial gastritis
Observation of curative effect
Gastroscopy
分类号
R259 [医药卫生—中西医结合]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
同源重组法衣原体RNA聚合酶表达载体的构建和应用
石禹
包小峰
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
沙眼衣原体转录激活因子GrgA与RNA聚合酶β'亚基的相互作用
石禹
包小峰
窦志华
《医学研究与战创伤救治》
CAS
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎98例的疗效观察
包小峰
《中国社区医师》
2018
2
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职称材料
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