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盐霉素及mTOR信号通路对前列腺癌DU145干细胞的影响 被引量:7
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作者 蒋鸿涛 吴涛 +6 位作者 章运生 刘罗根 蒋茂林 彭潋 张弘 周明澍 王毅 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第13期2092-2096,共5页
目的探讨盐霉素对前列腺癌DU145干细胞的影响及其可能的机制,为盐霉素的临床应用提供理论依据。方法盐霉素处理DU145细胞,以ALDH为肿瘤干细胞标记物,用流式细胞仪检测处理后ALDH阳性的DU145干细胞的百分比。盐霉素处理DU145细胞后,用Wes... 目的探讨盐霉素对前列腺癌DU145干细胞的影响及其可能的机制,为盐霉素的临床应用提供理论依据。方法盐霉素处理DU145细胞,以ALDH为肿瘤干细胞标记物,用流式细胞仪检测处理后ALDH阳性的DU145干细胞的百分比。盐霉素处理DU145细胞后,用Western Blot法检测mTOR信号通路相关蛋白m-TOR、p-70s6k、p-p70s6、p-s6等的表达变化。盐霉素结合mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素处理DU145细胞,利用流式细仪检测ALDH阳性的DU145干细胞百分比。结果盐霉素显著性抑制ALDH阳性的DU145干细胞(抑制率为77.78%),是紫杉醇的2倍(抑制率为38.64%)。盐霉素抑制mTOR信号通路相关分子m-TOR、p-70s6k、p-p70s6、p-s6等蛋白的表达,具有时间依赖性和剂量依赖性。盐霉素结合雷帕霉素能够抑制ALDH阳性的DU145干细胞比例(抑制率为77.95%)。结论盐霉素可能通过抑制mTOR通路信号来发挥抑制肿瘤干细胞的作用。 展开更多
关键词 盐霉素 肿瘤干细胞 乙醛脱氢酶 MTOR信号通路
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自噬相关基因3过表达促进乳腺癌细胞自噬并抑制盐霉素诱导的细胞凋亡 被引量:7
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作者 李芳 黄果 +4 位作者 彭平 李双辉 刘罗根 章运生 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期162-168,共7页
目的研究人自噬相关基因3(ATG3)过表达对乳腺癌细胞自噬及盐霉素诱导细胞凋亡的影响和机制。方法采用慢病毒的方法,构建了稳定过表达ATG3的乳腺癌MCF-7细胞株;通过Western blotting、免疫荧光和透射电镜等方法分析了ATG3过表达对乳腺癌M... 目的研究人自噬相关基因3(ATG3)过表达对乳腺癌细胞自噬及盐霉素诱导细胞凋亡的影响和机制。方法采用慢病毒的方法,构建了稳定过表达ATG3的乳腺癌MCF-7细胞株;通过Western blotting、免疫荧光和透射电镜等方法分析了ATG3过表达对乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响;并用AKT/mTOR的激动剂(SC79和MHY1485)分析AKT/mTOR信号通路对ATG3过表达促进细胞自噬的影响;通过Western blotting和流式细胞术,同时结合盐霉素和自噬抑制剂(3-MA),分析了自噬对ATG3过表达抑制盐霉素诱导细胞凋亡的影响。结果成功构建稳定高表达ATG3的MCF-7细胞株。ATG3能够促进MCF-7细胞自噬,并且抑制AKT/mTOR信号通路。ATG3明显抑制了盐霉素诱导的细胞凋亡(P<0.01),且ATG3过表达组中促凋亡分子cleaved-caspase 3(P<0.01)和Bax表达明显减少(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多(P<0.05)。自噬的阻滞能够削弱ATG3对盐霉素诱导细胞凋亡的抑制作用。结论 ATG3可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬,并通过细胞自噬减少盐霉素诱导的细胞凋亡。综上提示诱发细胞自噬可能是乳腺癌细胞耐药的机制之一。 展开更多
关键词 自噬相关基因3 慢病毒 细胞自噬 盐霉素 乳腺癌
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F-box结构域参与FBXO39蛋白对MCF-7细胞增殖的调控
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作者 李芳 刘罗根 +3 位作者 黄果 戈欣 欧阳靖霖 章运生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1810-1818,共9页
目的:探讨F-box结构域对FBXO39蛋白调控MCF-7细胞增殖的影响。方法:以MCF-7细胞cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增FBXO39基因的全长cDNA序列并克隆到真核表达载体pEGFP-C2;以pEGFP-FBXO39质粒为模板,构建pEGFP-FBXO39ΔF(F-box结构域缺失... 目的:探讨F-box结构域对FBXO39蛋白调控MCF-7细胞增殖的影响。方法:以MCF-7细胞cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增FBXO39基因的全长cDNA序列并克隆到真核表达载体pEGFP-C2;以pEGFP-FBXO39质粒为模板,构建pEGFP-FBXO39ΔF(F-box结构域缺失)质粒;将重组质粒转染MCF-7细胞后,Western blot验证FBXO39和FBXO39ΔF的表达水平;激光共聚焦显微镜观察FBXO39和FBXO39ΔF的亚细胞定位情况;免疫荧光检测内源性FBXO39在MCF-7细胞中的定位。MTT和EdU试剂盒检测MCF-7细胞的增殖情况;流式细胞术检测MCF-7细胞周期;免疫组化检测FBXO39在乳腺癌及其癌旁组织中的表达差异。结果:本研究成功构建了pEGFP-FBXO39和pEGFP-FBXO39ΔF真核表达载体。F-box结构域对FBXO39蛋白的细胞定位没有影响。FBXO39促进了MCF-7细胞的增殖,而FBXO39ΔF对MCF-7细胞增殖无明显影响。FBXO39高表达于乳腺癌组织。结论:F-box结构域对FBXO39蛋白的细胞定位没有产生明显影响,但对维持FBXO39的生物学作用至关重要。FBXO39可能与乳腺癌的发生相关。 展开更多
关键词 F-box结构域 FBXO39蛋白 乳腺癌 细胞定位 细胞增殖
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