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题名东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析
被引量：2
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作者
周鲁明
刘殿辰
孙欢欢
赵博生
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机构
山东理工大学生命科学学院发育与进化生物学实验室
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出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期609-614,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(编号:31172074)
山东省自然科学基金项目(编号:ZR2009DM029)资助
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文摘
通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21中,利用IPTG诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Westernblotting鉴定,获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱。
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关键词
东亚三角涡虫
胰蛋白酶
蛋白表达
酶活
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Keywords
Dugesia japonica
trysin
protein expression
enzyme activity
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分类号
Q55
[生物学—生物化学]
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