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题名SrtA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与活性鉴定
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作者
张秀娟
于海威
刘栋琦
赵晋彤
熊向华
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机构
哈尔滨商业大学药学院
军事科学院军事医学研究院生物工程研究所
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出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第10期83-88,共6页
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基金
国家科技重大专项资助项目(2018X09J18105-003)。
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文摘
按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srt A基因,构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA,转入大肠杆菌BL21(DE3)后低温诱导表达,通过Ni^(2+)柱亲和层析纯化SrtA蛋白,连接LH_N-LPETG和G-H_C蛋白检测SrtA蛋白活性。菌液PCR鉴定和测定序列比对结果显示,构建pTIG-srtA载体成功;SDS-PAGE及Western Blot分析结果显示,在大肠杆菌中实现了SrtA蛋白的可溶性高表达,Ni^(2+)柱亲和层析后得到纯度大于95%的SrtA蛋白,LH_N-LPETG和G-H_C蛋白成功连接表明,原核系统表达纯化的SrtA蛋白具有良好的转肽酶活性。
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关键词
SrtA
密码子优化
酶连接法
A型肉毒毒素
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Keywords
Sortase A
codon optimization
enzyme ligation method
botulinum neurotoxin A
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分类号
TS201.2
[轻工技术与工程—食品科学]
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