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题名旱稻Tail-PCR技术主要影响因素的优化和验证
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作者
朱昀
李朝炜
刘嗣凡
刘颖
魏景芳
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机构
河北科技大学
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出处
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2018年第1期7-11,共5页
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基金
国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2016ZX08001003-006)
河北科技大学五大平台开放基金课题(SW21
+1 种基金
2015PT51)
河北省高等学校科学技术研究项目(QN2017071)
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文摘
以转基因旱稻为材料,对Tail-PCR方法进行了分析优化,包括DNA样品质量、扩增产物稀释程度、酶的种类、简并引物组合方式、引物结合偏好性等。结果表明,DNA样品质量的高低是影响试验成功的重要因素,样品纯度不高导致扩增无法正常进行;扩增后对产物稀释不充分会影响下轮扩增效果,适当增大产物稀释倍数可在下轮扩增中增大出带可能;LA Taq酶与普通Taq酶相比扩增效果没有明显不同,使用普通Taq酶即可进行Tail-PCR扩增;混合简并引物在旱稻中并没有获得更好的扩增效果。此外,发现简并引物对于不同物种存在偏好性,常规4种简并引物与旱稻基因组均可高效结合。优化后的Tail-PCR技术结果稳定,重复性好,可以准确地获得转基因旱稻插入位点的旁侧序列。
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关键词
旱稻
Tail-PCR技术
优化
影响因素
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Keywords
Upland r ice
Technology of Tail- PCR
Optimizing
Influence factors
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分类号
S511.6
[农业科学—作物学]
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