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稳定表达牛分枝杆菌PPE13的THP-1细胞株的建立
1
作者
刘卓彤
毕斯琪
+3 位作者
孟祥苗
胡燕萍
宋厚辉
杨杨
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024年第5期179-184,共6页
为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒...
为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒表达质粒,将该质粒和慢病毒包装质粒转染至239T细胞中,72 h后收集病毒。然后,将获得的病毒感染THP-1细胞中,经1μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达PPE13的细胞株THP-1/PPE13。最后,使用ELISA方法检测稳定表达细胞系中TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的情况,以验证细胞系中PPE13的生物学活性。结果显示,相较于对照细胞THP-1/Con,THP-1/PPE13中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平均显著升高。该细胞系的建立为深入研究PPE13调控细胞信号通路的功能提供了实验基础。
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关键词
牛分枝杆菌
PPE13
慢病毒包装
稳定表达
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题名
稳定表达牛分枝杆菌PPE13的THP-1细胞株的建立
1
作者
刘卓彤
毕斯琪
孟祥苗
胡燕萍
宋厚辉
杨杨
机构
浙江农林大学动物科技学院动物医学院
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024年第5期179-184,共6页
基金
浙江省自然科学基金资助项目(Y21C180001)
浙江省属高校基本科研业务费(2020YQ008)。
文摘
为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒表达质粒,将该质粒和慢病毒包装质粒转染至239T细胞中,72 h后收集病毒。然后,将获得的病毒感染THP-1细胞中,经1μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达PPE13的细胞株THP-1/PPE13。最后,使用ELISA方法检测稳定表达细胞系中TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的情况,以验证细胞系中PPE13的生物学活性。结果显示,相较于对照细胞THP-1/Con,THP-1/PPE13中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平均显著升高。该细胞系的建立为深入研究PPE13调控细胞信号通路的功能提供了实验基础。
关键词
牛分枝杆菌
PPE13
慢病毒包装
稳定表达
Keywords
Mycobacterium bovis
PPE13
Lentivirus packaging
stable expression
分类号
S852.618 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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被引量
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1
稳定表达牛分枝杆菌PPE13的THP-1细胞株的建立
刘卓彤
毕斯琪
孟祥苗
胡燕萍
宋厚辉
杨杨
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024
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