洋葱WRKY基因家族鉴定及其在鳞茎发育过程中的表达分析

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作者 李艳伟 王振宝 +3 位作者 杨妍妍 霍雨猛 孙亚玲 刘冰江 《山东农业科学》 北大核心 2025年第1期1-11,共11页

为了探讨洋葱WRKY转录因子家族的功能,本研究基于洋葱全基因组和鳞茎不同发育时期的转录组数据,利用生物信息学方法筛选并鉴定到55个AcWRKY基因家族成员,其编码蛋白序列长度为144~683 aa,等电点为5.11~9.65,脂肪系数为47.14~77.24,均为... 为了探讨洋葱WRKY转录因子家族的功能,本研究基于洋葱全基因组和鳞茎不同发育时期的转录组数据,利用生物信息学方法筛选并鉴定到55个AcWRKY基因家族成员,其编码蛋白序列长度为144~683 aa,等电点为5.11~9.65,脂肪系数为47.14~77.24,均为亲水性蛋白。亚细胞定位预测结果表明,这55个AcWRKY蛋白都定位在细胞核中。进化树分析显示,洋葱WRKY家族基因分为GroupⅠ、GroupⅡ和GroupⅢ三大类,其中GroupⅡ组可进一步分为5个亚组,洋葱和拟南芥WRKY蛋白在各组中均有分布,推测相同组或亚组中洋葱与拟南芥的WRKY转录因子可能具有相似的功能。保守结构域分析发现,所有AcWRKYs均具有高度保守的WRKYGQK基序及其特有的锌指结构,少数成员存在保守结构域的变异。基因结构和保守基序分析结果显示,不同AcWRKY成员的外显子和motif在数量和分布上存在一定差异,同一组或亚组的成员表现出一定的相似性。转录组数据分析结果表明,绝大多数AcWRKYs基因直接或者间接参与了洋葱鳞茎的发育与形成。本研究结果可为深入研究AcWRKY基因在洋葱鳞茎形成中的机制提供参考。 展开更多

关键词 洋葱 WRKY基因家族 生物信息学分析 基因表达 转录组分析

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不同浓度NaCl胁迫对洋葱种子发芽的影响

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作者 徐子龙 刘波 +4 位作者 李艳伟 王振宝 霍雨猛 刘冰江 孙秀东 《山东农业科学》 北大核心 2024年第8期74-79,共6页

为明确不同浓度NaCl胁迫对洋葱种子发芽的影响,本研究采用模拟试验方法,设置5个浓度NaCl溶液处理即0(CK)、50、100、150 mmol/L和200 mmol/L,测定并分析其对洋葱品种‘早黄金’‘天正105’‘火星1号’种子发芽势、发芽率、根长、活力指... 为明确不同浓度NaCl胁迫对洋葱种子发芽的影响,本研究采用模拟试验方法,设置5个浓度NaCl溶液处理即0(CK)、50、100、150 mmol/L和200 mmol/L,测定并分析其对洋葱品种‘早黄金’‘天正105’‘火星1号’种子发芽势、发芽率、根长、活力指数、盐害系数等指标的影响,并对各洋葱品种进行耐盐性筛选。结果表明,随着NaCl溶液浓度升高,3个洋葱品种的种子发芽势、发芽率、活力指数都随之降低,根长不同程度缩短,盐害系数增大。NaCl溶液浓度为200 mmol/L时,3个洋葱品种间的种子发芽势和发芽率均差异显著(P<0.05)。综合来看,洋葱种子发芽对中等浓度盐胁迫敏感,对低浓度盐胁迫敏感性低且种子萌发受到的抑制作用不强,高浓度盐胁迫显著抑制种子萌发。3个洋葱品种种子萌发期的耐盐能力表现为‘火星1号’>‘天正105’>‘早黄金’。 展开更多

关键词 NACL胁迫 洋葱 种子发芽 盐害系数

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大蒜有性生殖研究进展 被引量：9

3

作者 刘冰江 张海燕 +1 位作者 孔素萍 徐培文 《中国蔬菜》 北大核心 2008年第8期41-44,共4页

栽培大蒜通常是不育的,因而限制了大蒜的品种改良。本文解释了大蒜不育的原因,对大蒜开花结籽研究、大蒜自交后代性状、种间杂交研究、利用生物技术手段恢复大蒜育性等方面进行了综述,并对利用大蒜有性生殖改良大蒜品种提出了展望。

关键词 大蒜 有性生殖 育性 综述

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洋葱品质育种研究进展 被引量：7

4

作者 刘冰江 杨妍妍 吴雄 《山东农业科学》 2009年第4期38-41,共4页

本文对洋葱品质育种目标和主要品质性状的遗传特性及品质性状的分子标记辅助选择进行了综述,从鳞茎皮色、鳞茎形状和大小、可溶性固形物含量、紧实度、独心率、耐贮性等方面对品质性状的遗传特性进行了阐述,并对今后洋葱品质育种进行了... 本文对洋葱品质育种目标和主要品质性状的遗传特性及品质性状的分子标记辅助选择进行了综述,从鳞茎皮色、鳞茎形状和大小、可溶性固形物含量、紧实度、独心率、耐贮性等方面对品质性状的遗传特性进行了阐述,并对今后洋葱品质育种进行了展望。 展开更多

关键词 洋葱 品质育种目标 品质性状 研究进展

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洋葱细胞质雄性不育基因分子标记研究进展 被引量：2

5

作者 刘冰江 王玉涛 +3 位作者 缪军 霍雨猛 杨妍妍 吴雄 《中国蔬菜》 北大核心 2015年第9期14-19,共6页

洋葱是典型的异花授粉蔬菜作物，利用雄性不育系是进行洋葱杂交种选育的重要手段。传统的测交方法鉴定洋葱雄性不育基因型需要4-8a时间，通过开发洋葱细胞质雄性不育基因分子标记可以大大提高保持系选择效率，有助于揭示雄性不育作用机... 洋葱是典型的异花授粉蔬菜作物，利用雄性不育系是进行洋葱杂交种选育的重要手段。传统的测交方法鉴定洋葱雄性不育基因型需要4-8a时间，通过开发洋葱细胞质雄性不育基因分子标记可以大大提高保持系选择效率，有助于揭示雄性不育作用机理。本文介绍了洋葱细胞质雄性不育的几种类型，对控制洋葱育性的细胞质与细胞核基因分子标记的研究进展进行了综述，讨论了分子标记技术的现状及存在的问题，并对应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 洋葱 细胞质雄性不育 分子标记

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洋葱单倍体培养研究进展 被引量：1

6

作者 刘冰江 缪军 +4 位作者 王伟 张中宁 杨妍妍 张一卉 吴雄 《中国蔬菜》 北大核心 2010年第6期8-13,共6页

从雄核发育和雌核发育途径介绍了诱导洋葱单倍体的方法,对影响雌核发育途径诱导单倍体频率的因素进行了讨论,同时对再生植株的倍性鉴定方法和染色体加倍技术做了概述,并对洋葱单倍体的应用前景进行了展望。

关键词 洋葱 单倍体培养 雌核发育 综述

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大蒜种质创新和育种研究进展 被引量：17

7

作者 徐培文 刘冰江 +1 位作者 孔素萍 王精勇 《中国蔬菜》 北大核心 2006年第6期31-33,共3页

综述了国内外大蒜系统选育、诱变育种、有性杂交、体细胞杂交和转基因育种等方面的研究进展,并对我国大蒜育种工作提出了建议。

关键词 大蒜 种质 育种 有性生殖 有性杂交

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洋葱花青素合成酶基因的克隆和序列分析 被引量：8

8

作者 缪军 刘冰江 +5 位作者 杨妍妍 霍雨猛 张一卉 霍凤梅 修景润 吴雄 《山东农业科学》 2010年第1期1-5,共5页

采用PCR法克隆了洋葱的花青素合成酶基因AcANS，并对其进行序列比对和生物信息学分析。结果表明，其开放阅读框为1059bp，编码352个氨基酸残基；具有一个富含AT的内含子，符合GT—AG规则；其蛋白质第210～309肽段含有20G—Fe（Ⅱ）加氧... 采用PCR法克隆了洋葱的花青素合成酶基因AcANS，并对其进行序列比对和生物信息学分析。结果表明，其开放阅读框为1059bp，编码352个氨基酸残基；具有一个富含AT的内含子，符合GT—AG规则；其蛋白质第210～309肽段含有20G—Fe（Ⅱ）加氧酶家族基因的结构域。 展开更多

关键词 洋葱 花青素合成酶基因 基因克隆 序列分析

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高效TAIL-PCR的改良及在洋葱中的应用 被引量：6

9

作者 缪军 霍雨猛 +5 位作者 杨妍妍 修景润 刘冰江 张一卉 霍凤梅 吴雄 《山东农业科学》 2009年第10期1-4,共4页

高效TAIL-PCR是一种完全依赖PCR的方法,它利用5'端带尾巴的高简并倍数的LAD引物在未知序列上创造结合位点;LAD0引物是LAD系列简并引物5'端的部分序列,利用其可以保证PCR扩增中结合未知序列端的引物浓度;利用巢式PCR可提高扩增... 高效TAIL-PCR是一种完全依赖PCR的方法,它利用5'端带尾巴的高简并倍数的LAD引物在未知序列上创造结合位点;LAD0引物是LAD系列简并引物5'端的部分序列,利用其可以保证PCR扩增中结合未知序列端的引物浓度;利用巢式PCR可提高扩增产物特异性。本研究将该技术应用于洋葱的未知侧翼序列分离,建立了洋葱的高效TAIL-PCR技术体系。 展开更多

关键词 高效TAIL—PCR 特异性引物 简并引物 侧翼序列分离 洋葱

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洋葱黄酮醇合成酶基因的克隆与表达分析 被引量：3

10

作者 王振宝 杨妍妍 +4 位作者 刘冰江 霍雨猛 李艳伟 孙亚玲 吴雄 《山东农业科学》 北大核心 2022年第12期18-24,共7页

黄酮醇合成酶(flavonol synthase, FLS)是植物黄酮醇生物合成途径中的关键酶。本研究克隆了洋葱黄酮醇合成酶基因AcFLS,其编码序列长度为927 bp,编码309个氨基酸。AcFLS蛋白为亲水性胞质不稳定蛋白,二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主,... 黄酮醇合成酶(flavonol synthase, FLS)是植物黄酮醇生物合成途径中的关键酶。本研究克隆了洋葱黄酮醇合成酶基因AcFLS,其编码序列长度为927 bp,编码309个氨基酸。AcFLS蛋白为亲水性胞质不稳定蛋白,二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主,属于α-同戊二酸和二价铁离子依赖型加氧酶家族。AcFLS的氨基酸序列与洋葱、虎眼万年青、石刁柏FLs蛋白的同源性分别为91.34%、76.42%、74.63%。实时定量PCR结果显示,AcFLS基因在洋葱中的表达具有组织特异性,表现为叶鞘中表达量最高,叶片次之,根中极少表达;在鳞茎膨大过程中AcFLS基因的表达量呈先升高后降低的趋势,在膨大盛期达到最高值;但AcFLS基因在紫皮、黄皮洋葱中的表达水平并无显著差异。该研究为进一步探明洋葱鳞茎颜色产生的机理奠定了基础。 展开更多

关键词 洋葱 黄酮醇合成酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析

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洋葱atp6基因的克隆与系统进化分析 被引量：6

11

作者 王振宝 霍雨猛 +5 位作者 缪军 高莉敏 刘冰江 杨妍妍 吴雄 程斐 《山东农业科学》 2014年第1期10-14,共5页

细胞质雄性不育(CMS)在作物遗传育种研究中占有重要地位,多种植物的细胞质雄性不育均与线粒体基因结构变异及新嵌合基因的产生有关。为探索线粒体atp6基因与洋葱CMS的关系,以13份不育系和11份保持系为材料克隆洋葱atp6基因编码序列,测... 细胞质雄性不育(CMS)在作物遗传育种研究中占有重要地位,多种植物的细胞质雄性不育均与线粒体基因结构变异及新嵌合基因的产生有关。为探索线粒体atp6基因与洋葱CMS的关系,以13份不育系和11份保持系为材料克隆洋葱atp6基因编码序列,测序结果表明不同材料atp6基因间存在一个C/A多态性位点,该多态性位点在不育系和保持系间随机出现,而不是不育系与保持系的特征差异。蛋白质分析表明这一多态性位点的变异并未改变atp6蛋白跨膜结构。进一步的蛋白比对分析揭示了atp6蛋白在物种间有一定的保守性,特别是第IV跨膜结构域的Arg在所有物种中是高度保守的,也是H+转运所必需的。基于atp6蛋白序列的系统进化树显示细菌和病毒位于树的基部,其次是真菌、低等藻类以及原生生物,然后高等藻类、苔藓和蕨类,高等绿色开花植物处于树的顶端,单子叶植物处于树的最顶端。 展开更多

关键词 洋葱 雄性不育 atp6基因 系统进化

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洋葱查尔酮合成酶基因的分子克隆和表达分析 被引量：5

12

作者 霍凤梅 缪军 +5 位作者 张一卉 杨妍妍 刘冰江 霍雨猛 杨建平 吴雄 《山东农业科学》 2010年第5期1-4,共4页

查尔酮合成酶是类黄酮类物质合成的关键酶。本研究克隆了洋葱的查尔酮合成酶基因AcCHS1和AcCHS2。AcCHS1的ORF序列1182 bp,编码393个氨基酸残基;AcCHS2的ORF序列1 176 bp,编码391个氨基酸残基。在同等条件下,AcCHS2基因的表达明显高于Ac... 查尔酮合成酶是类黄酮类物质合成的关键酶。本研究克隆了洋葱的查尔酮合成酶基因AcCHS1和AcCHS2。AcCHS1的ORF序列1182 bp,编码393个氨基酸残基;AcCHS2的ORF序列1 176 bp,编码391个氨基酸残基。在同等条件下,AcCHS2基因的表达明显高于AcCHS1。 展开更多

关键词 洋葱 类黄酮 查尔酮合成酶基因 基因克隆 基因表达

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洋葱ANS基因启动子的克隆与瞬时表达分析 被引量：3

13

作者 刘畅 缪军 +6 位作者 霍雨猛 杨妍妍 刘冰江 王志峰 刘波 王富 吴雄 《山东农业科学》 2013年第5期13-17,共5页

通过PCR方法对洋葱花青素合成酶基因(AcANS)上游启动子序列进行扩增,获得长度为1.8 kb和2.2 kb的两种片段,命名为ANSPM1和ANSPM2。序列分析表明,克隆到的两个启动子除含有多个TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件,还含有与MYB转录因子... 通过PCR方法对洋葱花青素合成酶基因(AcANS)上游启动子序列进行扩增,获得长度为1.8 kb和2.2 kb的两种片段,命名为ANSPM1和ANSPM2。序列分析表明,克隆到的两个启动子除含有多个TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件,还含有与MYB转录因子结合的元件,以及参与光响应、逆境、激素应答的顺式作用元件。同时构建ANSPM1和ANSPM2驱动GUS报告基因的植物表达载体,通过洋葱表皮细胞瞬时表达分析,表明两个启动子均有活性。 展开更多

关键词 洋葱 花青素合成酶基因(ANS) 启动子 克隆 瞬时表达

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葱属主要蔬菜作物高质量RNA提取方法研究 被引量：3

14

作者 孙亚玲 陈立 +7 位作者 刘冰江 缪军 孔素萍 高莉敏 曹辰兴 吴雄 杨妍妍 霍雨猛 《山东农业科学》 2016年第9期6-9,16,共5页

葱属蔬菜作物(洋葱、大葱、大蒜和韭菜等)各组织部位富含多糖等次生代谢物质,严重影响了RNA的提取质量。本研究以洋葱叶片为样本,对多种RNA提取方法进行了比较分析,获得了一套适合葱属蔬菜作物RNA提取的系统方法。该方法将CTAB-GT连用... 葱属蔬菜作物(洋葱、大葱、大蒜和韭菜等)各组织部位富含多糖等次生代谢物质,严重影响了RNA的提取质量。本研究以洋葱叶片为样本,对多种RNA提取方法进行了比较分析,获得了一套适合葱属蔬菜作物RNA提取的系统方法。该方法将CTAB-GT连用、蛋白酶K替代DEPC和冰浴电泳检测相结合,其所提取的RNA样本产量约为152.35μg/g FW,RNA完整性RIN值约为7.5,条带清晰,无多糖、蛋白质和DNA残留,28S约为18S两倍,提取过程安全无强致癌物质DEPC,可满足下游RNA分子实验的要求。且该方法适合于大葱、洋葱、大蒜和韭菜不同组织部位样本RNA的提取。 展开更多

关键词 葱属蔬菜 RNA提取 多糖 CTAB-GT

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洋葱SRAP-PCR体系的优化研究 被引量：3

15

作者 霍雨猛 缪军 +4 位作者 杨妍妍 刘冰江 张一卉 吴雄 何启伟 《山东农业科学》 2011年第4期9-11,共3页

优化了洋葱SRAP-PCR反应体系的模板浓度和Mg2+浓度。采用8对不同的引物组合和2份不同的洋葱材料进行验证实验,结果表明,在20μl的反应体系中,模板的量在180～210 ng均可获得清晰的扩增,低于180 ng,扩增带模糊,高于210 ng扩增背景严重;... 优化了洋葱SRAP-PCR反应体系的模板浓度和Mg2+浓度。采用8对不同的引物组合和2份不同的洋葱材料进行验证实验,结果表明,在20μl的反应体系中,模板的量在180～210 ng均可获得清晰的扩增,低于180 ng,扩增带模糊,高于210 ng扩增背景严重;合适的Mg2+浓度在1.5～2.0 mmol/L之间;使用优化的反应体系,扩增条带清晰,可满足不同引物组合和洋葱材料的要求。 展开更多

关键词 洋葱 SRAP 分子标记

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不同皮色洋葱花青素合成酶基因片段的克隆及苗期表达分析 被引量：1

16

作者 王振宝 徐宏志 +5 位作者 刘冰江 霍雨猛 孙亚玲 李艳伟 吴雄 杨妍妍 《山东农业科学》 北大核心 2022年第11期19-24,共6页

花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)是植物花青素生物合成途径的关键酶,可催化无色花色素向有色花色素转变。根据已报道的花青素合成酶基因序列设计引物,分别以不同皮色洋葱苗期总DNA和cDNA为模板进行克隆和序列比对,结果显示,... 花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)是植物花青素生物合成途径的关键酶,可催化无色花色素向有色花色素转变。根据已报道的花青素合成酶基因序列设计引物,分别以不同皮色洋葱苗期总DNA和cDNA为模板进行克隆和序列比对,结果显示,从紫皮和黄皮洋葱中克隆到相同的目的条带,基因序列完全一致,且与已报道的ANS等位基因序列高度相似,确认克隆到AcANS基因片段序列。以Actin基因为内参,对AcANS在两种皮色洋葱苗期不同组织中的表达进行半定量分析,结果表明,AcANS在洋葱幼苗叶鞘中表达量最高,叶片中次之,根中不表达;紫皮洋葱中AcANS基因的表达量明显高于黄皮洋葱,这有利于紫皮洋葱积累更多的花色苷,从而使鳞茎产生颜色上的差异。本研究结果可为后续获得洋葱ANS基因全长序列、深入研究其功能奠定基础。 展开更多

关键词 洋葱 花青素合成酶 基因克隆 苗期 表达分析

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不同外植体和植物激素对大蒜愈伤组织诱导的影响 被引量：1

17

作者 孔素萍 杜红霞 +5 位作者 杨妍妍 霍雨猛 高莉敏 刘冰江 缪军 吴雄 《山东农业科学》 2016年第12期20-24,共5页

以大蒜鳞芽基部、茎尖、根尖和试管苗叶片为外植体,研究不同激素配比对大蒜愈伤组织诱导的影响。结果表明:大蒜根尖和鳞芽基部比茎尖和试管苗叶片易于诱导愈伤组织,根尖愈伤组织诱导率最高。不同激素配比对4种外植体愈伤组织诱导的影响... 以大蒜鳞芽基部、茎尖、根尖和试管苗叶片为外植体,研究不同激素配比对大蒜愈伤组织诱导的影响。结果表明:大蒜根尖和鳞芽基部比茎尖和试管苗叶片易于诱导愈伤组织,根尖愈伤组织诱导率最高。不同激素配比对4种外植体愈伤组织诱导的影响不同,根尖在6-BA和2,4-D不同激素配比下全部诱导出愈伤组织;鳞芽基部愈伤组织诱导的最适激素组合为0.3 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2,4-D或0.5 mg/L6-BA+2.0 mg/L 2,4-D,诱导率为100%;茎尖愈伤组织诱导的最适激素配比为0.7 mg/L 6-BA+1.5mg/L 2,4-D,诱导率为85.83%;试管苗叶片愈伤组织诱导的最适激素配比为0.3 mg/L 6-BA+2.0 mg/L2,4-D,诱导率为71.67%。 展开更多

关键词 大蒜 外植体 植物激素配比 愈伤组织

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“应用生物技术加速园艺作物种质创新和利用研究”通过成果鉴定

18

作者 徐培文 曲士松 刘冰江 《中国蔬菜》 北大核心 2005年第4期5-5,共1页

关键词 成果鉴定 利用研究 种质创新 园艺作物 生物技术 加速 应用 2004年12月 山东省农业科学院 国际领先水平 蔬菜研究所 总体研究 有性生殖 长期保存 保存技术 超低温 大蒜 生姜

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基于干种子DNA的洋葱杂交种纯度分子标记快速鉴定

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作者 孙亚玲 李艳伟 +3 位作者 王振宝 吴雄 刘冰江 杨妍妍 《山东农业科学》 北大核心 2023年第11期169-175,共7页

为了寻找一种从洋葱种子中快速提取高质量DNA的方法,并能满足大量准确鉴定洋葱杂交种纯度的要求,本研究首先对全式金PlantZol试剂盒、天根快捷型植物基因组DNA提取系统、TPS法和CTAB法提取的洋葱种子DNA质量进行比较,筛选出最佳提取方法... 为了寻找一种从洋葱种子中快速提取高质量DNA的方法,并能满足大量准确鉴定洋葱杂交种纯度的要求,本研究首先对全式金PlantZol试剂盒、天根快捷型植物基因组DNA提取系统、TPS法和CTAB法提取的洋葱种子DNA质量进行比较,筛选出最佳提取方法,并对不同发芽天数的种子及提取有效DNA的种子数量进行优化筛选,然后利用SCAR分子标记对洋葱杂交种的纯度进行鉴定,进一步验证洋葱种子DNA的提取质量。结果表明,天根快捷型植物基因组DNA提取系统未能成功得到洋葱干种子基因组总DNA;CTAB法提取的基因组总DNA带型整齐一致、单一明亮,条带无拖尾和降解现象,也没有明显的RNA和蛋白污染;洋葱干种子以1粒和发芽3 d提取的DNA更加完整,纯度更高。以CTAB法提取的1粒洋葱干种子基因组总DNA为模板,对杂交种Ms位点的基因型进行SCAR标记鉴定,PCR扩增条带清晰明亮,根据条带的迁移位置可以清楚区分洋葱不同细胞核基因型之间的差异。综上,本研究确定了CTAB法为洋葱干种子基因组总DNA提取的最佳方法,1粒洋葱干种子获得的有效DNA完全可以满足杂交种分子标记鉴定的要求,实现洋葱杂交种纯度的早期鉴定。 展开更多

关键词 洋葱 种子 DNA提取 纯度 快速鉴定

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洋葱二氢黄酮醇-4-还原酶基因的分子克隆

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作者 缪军 杨妍妍 +5 位作者 张一卉 刘冰江 霍雨猛 霍凤梅 修景润 吴雄 《山东农业科学》 2010年第2期8-12,共5页

鳞茎的皮色是洋葱的重要经济性状之一。洋葱的二氢黄酮醇-4-还原酶基因AcDFR1的开放阅读框为1 158 bp,编码385个氨基酸残基;具有5个内含子,均符合GT-AG规则。本研究为阐明洋葱皮色形成的分子机制以及开发分子标记奠定了基础。

关键词 二氢黄酮醇-4-还原酶基因 基因克隆 序列分析 洋葱

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