柴达木盆地盐生植物根际解磷菌的分离、鉴定及盐胁迫下的促生特性 被引量：1

1

作者 郭思雨 李青慧 +3 位作者 任青措 沈才睿 冶贵生 马玉花 《福建农林大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期647-657,共11页

【目的】从柴达木盆地盐碱地盐生植物根际土壤中分离耐盐促生微生物,分析其促生特性,为筛选适用于盐碱环境的高效解磷促生菌提供优质菌种。【方法】利用含100 g·L^(-1)NaCl的LB固体培养基筛选生长良好的菌株,经平板划线法纯化。通... 【目的】从柴达木盆地盐碱地盐生植物根际土壤中分离耐盐促生微生物,分析其促生特性,为筛选适用于盐碱环境的高效解磷促生菌提供优质菌种。【方法】利用含100 g·L^(-1)NaCl的LB固体培养基筛选生长良好的菌株,经平板划线法纯化。通过形态学观察、生理生化测定及16S rDNA序列比对进行鉴定,并测定其解有机磷和无机磷能力;采用菌液浸种法,将油菜种子在盐胁迫条件下培养,评估菌株对种子发芽率及植株生长的影响。【结果】共获得6株耐盐解磷菌:1株肇东氏弗里兰德菌(Vreelandella zhaodongensis) P1,1株耐盐刘志恒菌(Zhihengliuella halotolerans) P2,2株表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis) P3、P5,2株腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus) P4、P6。培养5 d后,6株菌溶解有机磷的直径为6.70~14.81 mm,溶解无机磷的直径为5.95~11.96 mm,解有机磷量2.81~3.61μg·mL^(-1),解无机磷量为4.05~12.04μg·mL^(-1),其中P3表现最佳,显著高于其他菌株。促生试验表明,6株菌均能提高油菜发芽率,其中P3处理组在无胁迫和盐胁迫条件下发芽率分别为90.67%和74.67%,较对照CK1(无菌水浸泡20 h后喷淋无菌水)和CK2(无菌水浸泡20 h后喷淋含100 g·L^(-1)NaCl的无菌水)分别提高29.34%和30.00%。在植株生长方面,P3和P5表现突出:P3处理组鲜质量达28.48 g,较CK提高120.85%;P5处理组在株高(104.21 mm,增加42.42%)和根长(64.89 mm,增加80.67%)方面效果最佳。【结论】柴达木盆地分离获得的6株耐盐解磷菌均具显著促生作用,可在盐胁迫下提高油菜发芽率并促进植株生长,显示出改良旱区盐渍化土壤的应用潜力,其中P3和P5效果最为优异。 展开更多

关键词 柴达木盆地 盐渍化 菌种鉴定 解磷菌 促生能力

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野生肋果沙棘根际3株固氮菌的分离、鉴定及其促生能力比较

2

作者 郭思雨 罗程月 +1 位作者 冶贵生 马玉花 《江苏农业科学》 北大核心 2025年第14期245-251,共7页

从肋果沙棘(Hippophae neurocarpa)根际土壤中筛选出具有固氮能力的菌株,为挖掘高效根际促生菌株创造条件。利用筛选培养基进行菌株分离,筛选出在Ashby固体培养基上生长良好的菌株,利用平板划线法对菌株进行纯化。通过形态学观察、生理... 从肋果沙棘(Hippophae neurocarpa)根际土壤中筛选出具有固氮能力的菌株,为挖掘高效根际促生菌株创造条件。利用筛选培养基进行菌株分离,筛选出在Ashby固体培养基上生长良好的菌株,利用平板划线法对菌株进行纯化。通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列比对法鉴定菌株;并对固氮菌的固氮能力进行测定;将固氮菌配置成单一菌剂及复合菌剂接种于油菜幼苗验证其促生能力。鉴定出1株弗雷德里克斯堡假单胞菌(Pseudomonas frederiksbergensis)、1株居泉沙雷氏菌(Serratia fonticola)、1株基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)。培养5 d,3株菌株固氮透明圈为5.25~13.52 mm,固氮酶含量为220.52~227.50 U/L。促生试验结果表明,3株固氮菌组成的单一及复合菌剂均可提高油菜种子的发芽率及生长发育指标,其中,单一菌剂中N2处理的油菜发芽率最高,较CK提高18.40%,N2处理的油菜株高、根长较CK分别增长了82.79%、336.87%;复合菌剂中N1+N2+N3发芽率最高,较CK提高了20.08%。综合评价可知,不同固氮菌处理下油菜的生长状况均得到一定程度的改善,其中单一菌剂中N2效果最好;复合菌剂比单一菌剂对油菜幼苗鲜重、株高、根长的促进作用更为显著。 展开更多

关键词 肋果沙棘 固氮菌 分离 鉴定 根际促生菌 促生能力

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细菌荚膜多糖的生物学功能及抗宿主细胞吞噬作用机制的研究进展

3

作者 龙金桃 冶贵生 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期767-772,共6页

荚膜是包裹在某些细菌外表面的一层松散的黏液物质,是细菌表面的一种特殊结构[1]。根据组成成分差异,荚膜可以分为多糖型荚膜(也称荚膜多糖)、多肽型荚膜以及由多糖和多肽共同形成的荚膜类型[2-3],大多数致病菌表面主要以多糖型荚膜为... 荚膜是包裹在某些细菌外表面的一层松散的黏液物质,是细菌表面的一种特殊结构[1]。根据组成成分差异,荚膜可以分为多糖型荚膜(也称荚膜多糖)、多肽型荚膜以及由多糖和多肽共同形成的荚膜类型[2-3],大多数致病菌表面主要以多糖型荚膜为主。荚膜多糖能与菌体细胞壁的肽聚糖层共价相连。 展开更多

关键词 抗宿主细胞 荚膜多糖 生物学功能 细菌

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高校细胞生物学教学改革与效果探究 被引量：6

4

作者 冶贵生 马玉花 《安徽农业科学》 CAS 2014年第15期4907-4908,共2页

结合近年来细胞生物学课程的教学实践,就细胞生物学教学模式与效果进行探讨,旨在推动细胞生物学教学方式、方法的发展,提高学生学习细胞生物学课程的兴趣,提升学生分析与解决实验过程与结果中存在的问题及理论联系实验的能力。

关键词 细胞生物学 教学改革 教学效果

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青海野生中国沙棘P5CS基因的扩增及序列分析 被引量：4

5

作者 马玉花 冶贵生 +2 位作者 刘宝尧 张亚波 郑娜 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期88-91,114,共5页

以青海野生中国沙棘的嫩叶为材料,扩增其P5CS基因并进行序列测定。结果表明:所得的中国沙棘的P5CS基因的碱基数量为434bp,其中A碱基115个,T碱基119个,G碱基107个,C碱基93个。另外,通过对中国沙棘P5CS基因的氨基酸的序列分析显示,所得P5C... 以青海野生中国沙棘的嫩叶为材料,扩增其P5CS基因并进行序列测定。结果表明:所得的中国沙棘的P5CS基因的碱基数量为434bp,其中A碱基115个,T碱基119个,G碱基107个,C碱基93个。另外,通过对中国沙棘P5CS基因的氨基酸的序列分析显示,所得P5CS基因片段编码144个氨基酸,其中强碱性氨基酸21个,强酸性氨基酸8个,疏水性氨基酸53个,亲水性氨基酸34个。 展开更多

关键词 青海野生中国沙棘 P5CS基因 扩增 序列分析

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青海野生中国沙棘AQP基因的扩增及序列分析 被引量：2

6

作者 马玉花 冶贵生 +1 位作者 张亚波 刘宝尧 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期90-93,共4页

以青海野生中国沙棘的嫩叶为材料,扩增其AQP基因并测序。结果表明,所得中国沙棘AQP基因的碱基数量为481个,其中A碱基103个,T碱基143个,G碱基126个,C碱基109个。序列分析表明,QP基因片段编码160个氨基酸,其中强碱性氨基酸有10个,强酸性... 以青海野生中国沙棘的嫩叶为材料,扩增其AQP基因并测序。结果表明,所得中国沙棘AQP基因的碱基数量为481个,其中A碱基103个,T碱基143个,G碱基126个,C碱基109个。序列分析表明,QP基因片段编码160个氨基酸,其中强碱性氨基酸有10个,强酸性氨基酸有7个,疏水性氨基酸有73个,亲水性氨基酸有31个。同源性比对表明,中国沙棘与杨、山核桃、栎树、葡萄等植物的AQP基因具有较高的同源性。为深入研究青海野生中国沙棘在干旱胁迫下的抗旱分子机制及沙棘抗旱分子改良积累了资料。 展开更多

关键词 中国沙棘 AQP基因 扩增 序列分析

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提高分子生物学课程教学效果的教学模式探讨 被引量：3

7

作者 马玉花 冶贵生 《安徽农业科学》 CAS 2014年第15期4911-4912,共2页

结合近年来分子生物学课程的教学经验,就分子生物学教学模式进行探讨,为学生更好地掌握分子生物学相关知识和技能,并推动分子生物学教学的理论研讨和经验交流,推进高校分子生物学教学工作的良好稳步发展奠定基础。

关键词 分子生物学 教学模式 教学效果

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青海野生中国沙棘资源表型性状多样性分析 被引量：15

8

作者 刘青青 李雄杰 +8 位作者 马亚琼 成美佳 王晨兆 高佩 马福林 郝静雯 刘瑞 冶贵生 马玉花 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1057-1064,共8页

为探究青海省野生中国沙棘资源表型性状多样性,本研究以青海省10个地区150份野生中国沙棘为材料,对其12个表型性状进行了表型多样性分析。结果表明:青海省内中国沙棘资源具有丰富的表型多样性,12个表型性状的变异系数为16.49%~58.76%。... 为探究青海省野生中国沙棘资源表型性状多样性,本研究以青海省10个地区150份野生中国沙棘为材料,对其12个表型性状进行了表型多样性分析。结果表明:青海省内中国沙棘资源具有丰富的表型多样性,12个表型性状的变异系数为16.49%~58.76%。其中地径、树高和刺长是变异较大的性状,变异系数均超50%。相关性分析显示,除树高、分枝、地径以及叶宽与其他性状间没有显著的相关关系外,其他性状均存在显著或极显著的相关关系。同时,中国沙棘表型性状与纬度和海拔有一定的相关关系,且不同性状受地理因子影响也不同,其中叶片性状受影响最大。主成分分析筛选出4个特征值大于1的主成分,累计贡献率为86.35%,包含了中国沙棘表型性状的大部分信息,百果重对中国沙棘表型性状多样性的影响最大。上述结果表明青海中国沙棘资源的表型性状具有丰富的多样性,具有极大的开发利用潜力。本研究为中国沙棘优良种质资源的选育及保存提供了科学依据。 展开更多

关键词 中国沙棘 表型性状 多样性分析

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西藏沙棘根瘤内生假单胞菌的分离鉴定及促生性研究 被引量：6

9

作者 马福林 仁增卓玛 +3 位作者 王昌玲 邓得坤 冶贵生 马玉花 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期624-631,共8页

【目的】获取西藏沙棘根瘤内生菌中具有多重生物学活性的假单胞菌属菌株,探究筛选所得菌株的促生作用,为研发高效生物菌肥提供基础材料。【方法】利用纯培养方法,从西藏沙棘根瘤中分离假单胞菌,通过形态、生理生化及16S rDNA序列比对鉴... 【目的】获取西藏沙棘根瘤内生菌中具有多重生物学活性的假单胞菌属菌株,探究筛选所得菌株的促生作用,为研发高效生物菌肥提供基础材料。【方法】利用纯培养方法,从西藏沙棘根瘤中分离假单胞菌,通过形态、生理生化及16S rDNA序列比对鉴定菌株,测定菌株溶磷、产IAA、产铁载体及产降解纤维素酶的能力,接种宿主植物验证其促生效果。【结果】4株根瘤内生菌与参考假单胞菌属同源性为99%以上,鉴定为假单胞菌属。溶磷和产IAA的定性及定量结果表明,4株菌均具有溶解无机磷和产IAA的能力,其中溶解无机磷能力较强的菌株是QY-X10和QY-X22,均达到400 mg·L^(-1);菌株QY-X4产IAA能力较其他菌株强,达1.9 mg·L^(-1);4株菌株具有产铁载体的能力,除QY-X10以外,均具产降解纤维素酶的能力;促生试验结果表明,QY-X6可有效促进种子的萌发;QY-X6、QY-X10处理组叶片数显著高于对照;QY-X6、QY-X10处理组苗长显著高于对照;QY-X10、QY-X22处理组最大叶片长显著高于对照。【结论】分离筛选出4株假单胞菌,均可溶解无机磷和产IAA,兼具产铁载体;3株兼具产降解纤维素的能力;接种试验发现,4株菌株处理组可有效促进植株的生长发育,分离菌株可为研发生物菌肥提供基础材料。 展开更多

关键词 假单胞菌属 西藏沙棘 菌种鉴定 促生作用

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藏羊源枯草芽孢杆菌的分离鉴定与生物学特性 被引量：7

10

作者 徐淑琴 马祥兆 +3 位作者 陈晓慧 贺曦 贺晓龙 冶贵生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期5-11,共7页

为了分离得到藏羊瘤胃中具有纤维素降解能力的芽孢杆菌并分析其生物学特性,本试验选用纤维素刚果红选择性培养基从藏羊瘤胃内容物中筛选纤维素降解菌,采用形态学观察筛选、生化试验、16S rDNA序列测定、序列分析和同源性分析鉴定分离菌... 为了分离得到藏羊瘤胃中具有纤维素降解能力的芽孢杆菌并分析其生物学特性,本试验选用纤维素刚果红选择性培养基从藏羊瘤胃内容物中筛选纤维素降解菌,采用形态学观察筛选、生化试验、16S rDNA序列测定、序列分析和同源性分析鉴定分离菌株,并利用抑菌试验、生长曲线测定、药敏试验、耐高温试验和耐酸试验分析分离菌株的生物学特性。结果显示:分离菌株在纤维素刚果红选择培养基上菌落呈红色,氧化酶试验、触酶试验、硝酸盐还原试验、V-P试验等呈阳性,可发酵甘露醇、山梨醇等;分离菌株16S rDNA序列与NCBI中枯草芽孢杆菌同源性达100%,并在系统进化树中处于同一分支,明确分离菌株是枯草芽孢杆菌,命名为BS1-ql;分离菌株BS1-ql对沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和产气荚膜梭菌有较好的抑制效果;分离菌株生长迅速,接种2 h后进入对数生长期;分离菌株对四环素和多黏菌素B表现为中度敏感,对青霉素、头孢曲松、卡那霉素等28种抗菌药物均敏感;且该分离菌株于60℃、80℃、pH 7.0、pH 8.0条件下培养仍可存活。结果表明,本试验获得的藏羊源枯草芽孢杆菌分离株生物学特性良好,具有潜在的应用前景。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 分离 鉴定 16S rDNA

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贝莱斯芽孢杆菌的生物学特性及其农业应用现状 被引量：16

11

作者 徐淑琴 贺曦 +3 位作者 龚紫凤 马祥兆 陈晓慧 冶贵生 《饲料研究》 CAS 北大核心 2022年第9期143-147,共5页

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)作为芽孢杆菌属的一个新种,在自然界中广泛分布,具有产酶能力强、次生代谢产物丰富、抗逆性强、抗菌活性高等特点。B.velezensis能够促进动植物生长、有效防控动植物病害,已在生物防控、饲料加工、... 贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)作为芽孢杆菌属的一个新种,在自然界中广泛分布,具有产酶能力强、次生代谢产物丰富、抗逆性强、抗菌活性高等特点。B.velezensis能够促进动植物生长、有效防控动植物病害,已在生物防控、饲料加工、水产养殖等农业方面广泛研究应用。文章就B.velezensis的生物学特性及其在农业方面的应用进行综述,以期为B.velezensis相关研究提供参考。 展开更多

关键词 贝莱斯芽孢杆菌 生物学特性 抑菌能力

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野生中国沙棘根际假单胞属菌株的筛选鉴定及其对雍菜促生效果的影响 被引量：2

12

作者 高佩 徐淑琴 +3 位作者 贺曦 三鸿源 马玉花 冶贵生 《福建农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期1402-1411,共10页

【目的】从青海野生中国沙棘根际土中筛选出具有多重功能的假单胞属菌株,为生物菌肥的研发创造条件。【方法】利用筛选培养基对沙棘根际土中的微生物进行分离,利用平板划线法对菌株进行纯化。通过形态、生理生化及16S rDNA序列比对鉴定... 【目的】从青海野生中国沙棘根际土中筛选出具有多重功能的假单胞属菌株,为生物菌肥的研发创造条件。【方法】利用筛选培养基对沙棘根际土中的微生物进行分离,利用平板划线法对菌株进行纯化。通过形态、生理生化及16S rDNA序列比对鉴定菌株,并测定菌株解有机磷、解无机磷、解钾、固氮和降解纤维素能力。以雍菜为试验材料,检测各假单胞菌属菌株促进雍菜种子萌发以及雍菜幼苗生长能力。【结果】从中国沙棘根际土壤中分离出7株假单胞菌,培养3 d,7株假单胞菌溶解有机磷浑浊圈直径为4.28~13.71 mm,溶解无机磷透明圈直径为3.51~7.62 mm,解有机磷菌液中磷的质量浓度为5.15~25.41μg·mL^(−1),解无磷菌液中磷的质量浓度为2.15~22.26μg·mL^(−1),解钾黄色光圈直径为11.12~21.85 mm,解钾菌液中K^(+)质量浓度为5.07~14.33μg·mL^(−1),固氮透明圈直径(D)和菌落生长直径(d)的比值(D/d)为1.33~1.86,降解纤维素透明圈直径为4.61~10.22 mm。平板促生试验结果表明,假单胞菌可提高雍菜种子发芽率,并且可显著提高雍菜幼苗生长。其中菌株ZGSJ-3促生效果最好,其叶宽和茎长分别为3.69 mm和50.25 mm,较CK显著增加35.2%和41.2%。【结论】经综合评价后得出,不同假单胞菌菌液处理下雍菜的生长状况均得到一定程度改善,发芽率得到显著提高,其中ZGSJ-3和ZGSJ-7效果较好。 展开更多

关键词 中国沙棘 雍菜 假单胞菌 根际促生菌 促生能力

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西藏沙棘根瘤内生菌假单胞菌属的分离与鉴定 被引量：2

13

作者 马福林 王昌玲 +3 位作者 仁增卓玛 刘瑞 冶贵生 马玉花 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第3期76-81,90,共7页

【目的】获取西藏沙棘根瘤内生菌中具有生物学活性的假单胞菌。【方法】采用细菌纯培养方法,从西藏沙棘根瘤中分离假单胞菌,通过细菌染色镜检、生化试验及16S rDNA基因序列分析等方法进行鉴定,通过生长曲线、耐受性、解磷及固氮能力定... 【目的】获取西藏沙棘根瘤内生菌中具有生物学活性的假单胞菌。【方法】采用细菌纯培养方法,从西藏沙棘根瘤中分离假单胞菌,通过细菌染色镜检、生化试验及16S rDNA基因序列分析等方法进行鉴定,通过生长曲线、耐受性、解磷及固氮能力定性筛选等实验对分离菌株生物学特性进行检测。【结果】分离菌株在YMA培养基上呈白色或乳白色,革兰氏阴性菌,杆状,16S rDNA序列比对结果表明分离株与参考假单胞菌属同源性为99%,命名为QY-X8。QY-X8在pH为5~8、氯化钠浓度0%~2%仍能存活,具有较强的抗逆性,溶解无机磷和有机磷的溶磷圈/菌圈均大于2 mm,具有较好的溶磷能力,但不具有固氮能力。【结论】QY-X8菌株具有较强的耐受性和解磷作用,可为研发生物菌肥提供基础材料。 展开更多

关键词 假单胞菌属 西藏沙棘 菌种鉴定

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藏羊源沙克乳酸杆菌的分离、鉴定及体外益生特性研究 被引量：1

14

作者 马祥兆 徐淑琴 +3 位作者 陈晓慧 贺曦 贺晓龙 冶贵生 《饲料研究》 CAS 北大核心 2021年第23期69-72,共4页

研究旨在获得可用于微生态制剂的优良乳酸杆菌,无菌采集藏羊胃肠道内容物,通过MRS琼脂培养基选择分离,利用细菌形态、生理生化特性、16S rDNA基因序列同源分析等方法进行菌株鉴定,通过抑菌试验、耐受性试验、生长曲线产酸能力试验和药... 研究旨在获得可用于微生态制剂的优良乳酸杆菌,无菌采集藏羊胃肠道内容物,通过MRS琼脂培养基选择分离,利用细菌形态、生理生化特性、16S rDNA基因序列同源分析等方法进行菌株鉴定,通过抑菌试验、耐受性试验、生长曲线产酸能力试验和药敏试验等对分离菌株的益生特性进行鉴定。结果显示,分离菌株可发酵纤维二糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖,16S rDNA序列与参考沙克乳酸杆菌同源性达99%以上。分离菌株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌等菌株均具有一定的抑制作用,对高温有较强耐受性,对酸性和碱性环境有较强抵抗力,产酸能力强,对新霉素等11种药物敏感。研究表明,试验所得沙克乳酸杆菌对酸碱、高温环境均具有较强耐受性,抑菌能力较强,生长速度和产酸能力也较强,可以为制备藏羊源微生态制剂提供良好的基础菌株。 展开更多

关键词 乳酸杆菌 藏羊 分离 鉴定 益生性

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载体介导的shRNA抑制猪瘟病毒在PK-15细胞中增殖特性的研究 被引量：5

15

作者 冶贵生 张彦明 徐浩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期500-505,共6页

利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGe... 利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGene-NS3-Negative。重组干扰载体经纯化后转染PK-15细胞,并进行G418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后,接种猪瘟病毒Shimen株,收集细胞分别进行实时定量PCR和ELISA光吸收度分析。Real-time PCR分析表明,与对照细胞比较,pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3转录产生的shRNA分子均在一定程度上沉默了病毒的基因,抑制率约为63%、46%、49%。ELISA检测结果表明,转染pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3重组载体的PK-15细胞均在不同程度上抑制了猪瘟病毒粒子的增殖。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 RNAI NS3基因 SHRNA PK-15细胞

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靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体的构建与鉴定 被引量：3

16

作者 冶贵生 张彦明 +1 位作者 徐浩 郭抗抗 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第3期7-10,共4页

利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定... 利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中,构建重组载体pGene-NS3-1,pGene-NS3-2和pGene-NS3-3,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对转化产物进行kan+筛选,碱裂解法提取重组质粒,将酶切鉴定为阳性的质粒测序。结果显示,双链干扰片段克隆方向正确,序列中未出现核苷酸的插入,缺失等突变现象。表明靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体构建成功。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 NS3基因 RNA干扰 小发卡RNA

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A型产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因分析及其蛋白结构与抗原表位预测 被引量：2

17

作者 冶贵生 马玉花 +2 位作者 韩志辉 邹勇 贾跃宁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期12-18,共7页

应用PCR技术对A型产气荚膜梭菌青海分离株的α毒素基因进行扩增,并进行测序,利用生物软件对α毒素基因序列进行分析,对蛋白结构、B细胞抗原表位进行预测。结果表明,A型产气荚膜梭菌青海分离株的α毒素基因长度为1 110bp,编码370个氨基... 应用PCR技术对A型产气荚膜梭菌青海分离株的α毒素基因进行扩增,并进行测序,利用生物软件对α毒素基因序列进行分析,对蛋白结构、B细胞抗原表位进行预测。结果表明,A型产气荚膜梭菌青海分离株的α毒素基因长度为1 110bp,编码370个氨基酸。与参考菌株T0、S16、NRRLB-23744、KZ211和CER89L1216的α毒素基因核苷酸序列同源性依次为99.9%、99.9%、99.9%、99.9%和99.7%,氨基酸序列同源性均为100%。综合α毒素蛋白亲水性、表面可能性、抗原指数及二级结构预测结果显示在26-29、71-78、111-114、182-185、189-192、264-268、272-275、282-285、294-297、362-365位氨基酸残基存在可能的B细胞抗原表位,结合三级结构预测结果显示,α毒素294位-297位氨基酸残基形成表位并结合抗体的可能性较高。研究结果可为A型产气荚膜梭菌表位疫苗的设计与研制提供基础。 展开更多

关键词 A型产气荚膜梭菌 Α毒素 序列分析 表位 蛋白结构

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A型产气荚膜梭菌青海分离株tetA(P)耐药基因序列分析及蛋白结构预测 被引量：2

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作者 冶贵生 马玉花 +4 位作者 张爽 张晓芬 韩志辉 邹勇 贾跃宁 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期54-59,共6页

应用PCR技术对A型产气荚膜梭菌青海分离株的tetA(P)耐药基因进行扩增、测序,利用生物软件对tetA(P)基因进行序列分析与蛋白结构预测。结果表明,A型产气荚膜梭菌青海分离株的tetA(P)基因长度为1 263bp,编码420个氨基酸。与参考菌株EHE-N... 应用PCR技术对A型产气荚膜梭菌青海分离株的tetA(P)耐药基因进行扩增、测序,利用生物软件对tetA(P)基因进行序列分析与蛋白结构预测。结果表明,A型产气荚膜梭菌青海分离株的tetA(P)基因长度为1 263bp,编码420个氨基酸。与参考菌株EHE-NE18、Wakayama、CW92的核苷酸序列同源性依次为100%、99.8%和98.7%,氨基酸序列同源性依次为100%、100%和98.3%。分离株TetA(P)蛋白疏水性较强,具有10个跨膜区,含有4个N-糖基化位点,1个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,5个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点,12个N-豆寇酰化位点,三级结构主要是由α-螺旋和无规则卷曲形成。研究结果可为A型产气荚膜梭菌tetA(P)基因功能研究提供依据。 展开更多

关键词 A型产气荚膜梭菌 tetA(P)基因 序列分析 蛋白结构

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C型产气荚膜梭菌β毒素蛋白结构及抗原表位预测 被引量：2

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作者 冶贵生 韩志辉 +1 位作者 马玉花 贾跃宁 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期12-16,共5页

利用DNASTAR、I-Tasser软件对C型产气荚膜梭菌β毒素的蛋白结构、抗原表位进行预测与分析.综合β毒素蛋白亲水性、表面可能性、抗原指数、二级结构预测结果显示,B细胞抗原表位可能位于肽链2-4、7-16、23-26、36-40、55-58、72-75、172-... 利用DNASTAR、I-Tasser软件对C型产气荚膜梭菌β毒素的蛋白结构、抗原表位进行预测与分析.综合β毒素蛋白亲水性、表面可能性、抗原指数、二级结构预测结果显示,B细胞抗原表位可能位于肽链2-4、7-16、23-26、36-40、55-58、72-75、172-179、190-193、196-203、211-214、246-249位氨基酸区域;结合三级结构预测结果显示,190-193、211-214成为表位的可能性较大. 展开更多

关键词 C型产气荚膜梭菌 Β毒素 表位 蛋白结构

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A型产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因核苷酸序列与蛋白结构分析 被引量：1

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作者 冶贵生 马玉花 +5 位作者 张爽 梅成和 张晓芬 韩志辉 贾跃宁 邹勇 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期160-164,共5页

为了对产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因进行分析,通过生物软件设计引物,扩增A型产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因,测序后对tetB(P)基因核苷酸序列与蛋白结构进行分析.结果表明:分离株tetB(P)基因长度为1 959bp,编码652个氨基酸.与参考菌株CW92... 为了对产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因进行分析,通过生物软件设计引物,扩增A型产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因,测序后对tetB(P)基因核苷酸序列与蛋白结构进行分析.结果表明:分离株tetB(P)基因长度为1 959bp,编码652个氨基酸.与参考菌株CW92、EHE-NE18的核苷酸序列同源性依次为99.7%、99.9%,氨基酸序列同源性依次为99.4%、99.8%.分离株tetB(P)蛋白亲水性氨基酸较多,无跨膜区,含有4个N-糖基化位点,1个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,9个蛋白激酶C磷酸化位点,12个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,7个N-豆寇酰化位点,1个ATP/GTP结合位点基序,1个翻译型鸟苷酸结合域,三级结构主要是由α-螺旋、β折叠和无规则卷曲形成. 展开更多

关键词 A型产气荚膜梭菌 tetB(P)基因 序列分析 蛋白结构

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