杨叶枯病病原菌生物学特性、防治药剂筛选及杨树抗病性评价 被引量：3

1

作者 冯连荣 矫丽曼 +5 位作者 张妍 王乃锐 王诗琦 彭儒胜 宋立志 池玉杰 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期103-109,共7页

为防治杨树叶枯病,利用单因素试验,对中荷64杨(P.×euramericana cv.‘N3016’)上分离获得的链格孢菌(Alternaria alternata)进行了生物学特性及室内防治药剂筛选研究,并开展了不同品种杨树抗叶枯病综合评价。结果表明:链格孢菌菌... 为防治杨树叶枯病,利用单因素试验,对中荷64杨(P.×euramericana cv.‘N3016’)上分离获得的链格孢菌(Alternaria alternata)进行了生物学特性及室内防治药剂筛选研究,并开展了不同品种杨树抗叶枯病综合评价。结果表明:链格孢菌菌丝生长的适宜培养基为马铃薯蔗糖琼脂培养基,适宜碳源为玉米粉,适宜氮源为酵母提取物,适宜培养温度范围为25~30℃,适宜pH为8,光照条件对菌丝生长影响不大,致死温度为52℃。采用生长速率法进行室内防治药剂筛选,结果显示,选用的5种生物制剂防治效果优于2种化学药剂,各药剂抑制作用排序从大到小依次为哈茨木霉(3亿菌落/g)、枯草芽孢杆菌(100亿芽孢/g)、质量分数为10%的多抗霉素、质量分数为3%的中生菌素、质量分数为2%的宁南霉素、质量分数为50%的多菌灵、质量分数为75%的百菌清,将哈茨木霉(3亿菌落/g)和枯草芽孢杆菌(100亿芽孢/g)作为防治链格孢菌的适宜药剂。选用7个黑杨派品种杨树,利用模糊数学隶属度函数法,开展了杨树抗叶枯病综合评价,确定中荷64杨为高感品种,中辽1号杨和欧美杨177为中感品种,渤丰1号杨、渤丰3号杨、辽育3号杨和欧美杨111为高抗品种。 展开更多

关键词 杨树 叶枯病 生物学特性 药剂筛选 抗病性评价

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花粉管通道法介导山葡萄VaCBF3基因转化杨树的初步研究 被引量：3

2

作者 冯连荣 王占斌 +3 位作者 尹杰 宋立志 彭儒胜 赵鑫闻 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期500-504,共5页

以美洲黑杨‘D189’和辽宁杨为杂交亲本,利用花粉管通道法,经柱头滴注,将携带山葡萄CBF3(VaCBF3)基因的质粒导入杨树中。结果显示:在杂交授粉后,经过目的基因导入,共获得了52株转化后代,经PCR检测,有5株扩增出目的条带,初步推断目的基... 以美洲黑杨‘D189’和辽宁杨为杂交亲本,利用花粉管通道法,经柱头滴注,将携带山葡萄CBF3(VaCBF3)基因的质粒导入杨树中。结果显示:在杂交授粉后,经过目的基因导入,共获得了52株转化后代,经PCR检测,有5株扩增出目的条带,初步推断目的基因已导入到杨树中。本研究结果可为进一步利用花粉管通道培育抗寒杨树新品系提供参考。 展开更多

关键词 山葡萄VaCBF3基因 美洲黑杨'D189’ 辽宁杨 花粉管通道法 遗传转化

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白桦漆酶BpLAC1基因生物信息学分析 被引量：2

3

作者 冯连荣 宋立志 +2 位作者 赵大根 王玉成 池玉杰 《南方林业科学》 2017年第3期19-22,共4页

为了深入了解白桦漆酶BpLAC1基因的功能,利用生物信息学方法对其结构域及功能进行预测,包括开放阅读框分析、信号肽预测、基本理化性质分析、糖基化位点预测、保守结构域分析、系统进化分析、蛋白质二级及三级结构预测。结果如下:BpLAC... 为了深入了解白桦漆酶BpLAC1基因的功能,利用生物信息学方法对其结构域及功能进行预测,包括开放阅读框分析、信号肽预测、基本理化性质分析、糖基化位点预测、保守结构域分析、系统进化分析、蛋白质二级及三级结构预测。结果如下:BpLAC1基因序列全长为1 677 bp,开放阅读框ORF长为1 677 bp,编码558个氨基酸,蛋白相对分子量为58.6 k Da,理论等电点为9.53,是稳定的亲水蛋白;具有2个糖基化位点和13个磷酸化位点;该蛋白含有一个信号肽,属于分泌型蛋白;含有3个Cu-oxidase保守区,属于Cupredoxin superfamily家族;系统发育树分析表明,BpLAC1蛋白与川桑亲缘关系较近,与柑橘属Citrus、鹰嘴豆属Cicer等亲缘关系相差较远。二级结构中α-螺旋占14.04%,β-转角占11.99%,不规则卷曲链39.51%,延伸链占据34.46%。 展开更多

关键词 白桦 漆酶 LAC1基因 生物信息学分析

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偏肿革裥菌锰过氧化物酶酶学性质和染料脱色 被引量：3

4

作者 张玉龙 池玉杰 冯连荣 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第9期73-80,共8页

【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条... 【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条带切割,采用Nano液相色谱-电喷雾串联质谱法联用(Nano LC-ESI-MS/MS)多肽测序技术对蛋白氨基酸序列进行测定。利用该SDS-PAGE图谱,建立蛋白分子量与迁移率的标准直线,从标准直线上求出MnP纯酶样品的表观分子量;参照酶活测定方法检测最适反应温度及温度稳定性、最适反应p H值及p H稳定性;采用lineweaver-Burk双倒数作图法求解米氏动力学常数Km值。研究L.gibbosa菌种培养液和MnP纯酶液对蒽醌类的茜素红、偶氮类的刚果红、杂环类的中性红和三苯基甲烷类的结晶紫等4种不同类型染料的脱色能力。【结果】串联质谱扫描出2条MnP的保守序列肽段,与克隆到的基因Lg-mnp1编码的Lg-MnP1(Gen Bank登录号:ACO92620)序列完全吻合,表明其所代表的酶蛋白Lg-MnP1就是唯一电泳带中主要的蛋白。Lg-MnP1的表观分子量为45.39 k Da,最适反应温度为35℃,在低于40℃的条件下都具有一定的催化能力,但温度超过50℃后迅速失活;其最适反应pH值为3.5,p H超过4.5反应程度就迅速下降,在p H为2~3时最稳定;在以2,6-DMP为底物时,在21℃条件下其米氏常数Km为6.124 mmol·L^(-1)。L.gibbosa培养液对染料在1 h的脱色率分别为茜素红100%、中性红22.17%、刚果红19.09%,对结晶紫的脱色率很低,在36 h脱色率仅为0.018%。纯化后的Lg-MnP1溶液对染料的最大脱色率在2 h分别为中性红100%、刚果红95.55%、茜素红75.85%和结晶紫36.57%。【结论】SDS-PAGE得到的唯一一条电泳带中的MnP是Lg-MnP1。Lg-MnP1是一种中温性、偏酸性的酶,与2,6-DMP的亲和力较大。L.gibbosa含有菌丝的培养液对茜素红具有彻底的降解效果,但Lg-MnP1纯酶液对中性红、刚果红和结晶紫的降解效率要远高于同时含有菌丝、漆酶和MnPs的培养液。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 纯化 酶学性质 染料脱色

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偏肿革裥菌在木质环境下转录组构建与相关基因表达分析 被引量：2

5

作者 赵清泉 池玉杰 +1 位作者 张健 冯连荣 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期95-105,共11页

【目的】对白腐菌偏肿革裥菌在木质和非木质环境下的转录组进行测序,为白腐菌降解木材的机制研究提供支持。【方法】采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO、KEGG等数据库对转录本进行... 【目的】对白腐菌偏肿革裥菌在木质和非木质环境下的转录组进行测序,为白腐菌降解木材的机制研究提供支持。【方法】采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO、KEGG等数据库对转录本进行注释和比较分析,预测和筛选出偏肿革裥菌与木材降解有关的基因。应用荧光定量PCR(qPCR)检测mnp2等11个与木质素降解相关的差异基因在木屑处理5天条件下的表达量,结合转录组数据对这些基因的表达量变化趋势进行分析。【结果】偏肿革裥菌转录组测序共得到38.9 Gb Clean Data,各样品Clean Data平均达到6.49 Gb,各样品的Reads与参考基因组的比对效率在71.23%~74.25%之间。使用edgeR软件进行差异表达分析,得到差异表达基因898个,其中上调351个、下调547个。差异基因被注释到GO数据库的有251个,注释到KEGG数据库的有223个,注释到eggNOG数据库的有704个。eggNOG分析表明,差异基因表达多聚集在能量产生和转换、转录后修饰、蛋白质代谢、伴侣关系、次生代谢物的生物合成、碳水化合物的运输和分解代谢等功能分类下。GO分析表明,显著性富集与频率较高的生物过程是丙酮酸代谢过程、类异戊二烯生物合成过程、天冬氨酸家族氨基酸代谢过程和木质素分解过程。在KEGG通路分析中,差异基因分布到86个不同的生物途径,差异基因显著富集的代谢通路主要为:碳代谢、柠檬酸循环、芳香化合物降解、乙醛酸代谢。qPCR结果表明在木屑处理条件下基因mnp2、mnp3、lip9、lip2、laccase1和nadp的表达量明显上调;mnp10 s、mrp、cyp450-1、GroES1和GroES2的表达量明显下调,qPCR与转录组测序结果在表达量差异倍数上存在较小偏差,但整体趋势一致,可以证明转录组测序结果是正确可靠的。【结论】偏肿革裥菌降解木材与碳代谢、芳香化合物降解等通路密切相关;与木质素分解等生物过程密切相关。根据基因功能注释的结果得到11个与白腐菌降解木质素相关的重要差异表达基因。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 白腐菌 转录组 木质素 降解

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偏肿革裥菌锰过氧化物酶的分级纯化 被引量：1

6

作者 张玉龙 池玉杰 冯连荣 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第8期64-70,共7页

【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶(MnP)的分级纯化,以期得到L.gibbosa MnP的纯品和进行后续酶学性质研究。【方法】在对L.gibbosa所产MnPs进行优化培养、获得大量MnPs粗酶液的基础上,通过硫酸铵(NH4)2SO4分... 【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶(MnP)的分级纯化,以期得到L.gibbosa MnP的纯品和进行后续酶学性质研究。【方法】在对L.gibbosa所产MnPs进行优化培养、获得大量MnPs粗酶液的基础上,通过硫酸铵(NH4)2SO4分级盐析、聚乙二醇(PEG)沉淀进行粗酶液浓缩、在起始缓冲液中进行透析、经DEAE-琼脂糖CL-6B离子交换柱层析进行梯度洗脱和葡聚糖G-75凝胶过滤柱层析等方法对MnPs粗酶液进行纯化,并对分级纯化方法进行优化,对纯化浓缩后的纯酶样品采用SDS-PAGE方法进行酶纯度检验。【结果】在75%、80%和85%这3种(NH_4)_2SO_4饱和度中,85%的(NH_4)_2SO_4是沉淀MnPs的适宜饱和度,在该饱和度下测得上清液中酶活为3.63 U·L^(-1),蛋白浓度为0.132 mg·mL^(-1),表明MnPs已基本沉淀完全;试管小试法确定离子交换柱层析中上样的最适缓冲体系为pH7的Na_2HPO_4-NaH_2PO_4起始缓冲液;离子交换柱层析后收集的洗脱液检测到3个蛋白吸收峰,其中只在第2个蛋白吸收峰中检测出MnP活性,该MnP活性值变化曲线与蛋白吸光值一致。这个活性峰经凝胶过滤柱层析后,洗脱结果只出现1个明显的蛋白吸收峰,在其中检测出较高的MnP活性;浓缩后的冻干样品经SDS-PAGE电泳检测只在约40 k Da处有1条清晰的蛋白谱带,表明对MnP的纯化已达到电泳纯。【结论】筛选出85%饱和度的(NH_4)2_SO_4盐析法是初期沉淀与纯化L.gibbosa所产MnPs的最适方法;PEG浓缩法简便、易行、有效;初期浓缩后再经过离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析可以得到电泳纯的MnP纯化样品。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 纯化 离子交换柱层析 电泳纯

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婴儿宋氏痢疾菌败血症的诊断

7

作者 潘绍武 田洪明 +1 位作者 解晓珍 冯连荣 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期388-388,共1页

婴儿宋氏痢疾菌败血症的诊断ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＳｈｉｇｅｌｌａｓｏｎｎｅｉｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａｉｎｉｎｆａｎｔ潘绍武（第三军医大学检验系临床微生物学教研室）６３００３８田洪明，解晓珍，冯连荣（第三军医大学新桥医院... 婴儿宋氏痢疾菌败血症的诊断ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＳｈｉｇｅｌｌａｓｏｎｎｅｉｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａｉｎｉｎｆａｎｔ潘绍武（第三军医大学检验系临床微生物学教研室）６３００３８田洪明，解晓珍，冯连荣（第三军医大学新桥医院检验科）６３００３７病例摘要：患者... 展开更多

关键词 宋氏痢疾杆菌 败血症 诊断 婴儿

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ANEPⅢ毒蛋白的表达调控及其抗虫效果的生物测定

8

作者 王占斌 李勍 +1 位作者 严善春 冯连荣 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期480-487,共8页

蝎体内产生一系列毒素蛋白,ANEPⅢ是其中一种。试验构建重组表达载体pPIC9K-ANEPⅢ,将质粒pNJUTRXA-ANEPⅢ转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导目标蛋白ANEPⅢ,并用Tricine-SDS-PAGE电泳进行定性分析,检测得到8000 kD目的蛋白。通过电转化的... 蝎体内产生一系列毒素蛋白,ANEPⅢ是其中一种。试验构建重组表达载体pPIC9K-ANEPⅢ,将质粒pNJUTRXA-ANEPⅢ转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导目标蛋白ANEPⅢ,并用Tricine-SDS-PAGE电泳进行定性分析,检测得到8000 kD目的蛋白。通过电转化的方法将pPIC9K-ANEPⅢ转入毕赤酵母宿主菌GS115中,筛选得到一株耐受2.0 mg/mL G418表型为His^+Mut^+的菌株。经0.5%的甲醇诱导,取不同诱导时间的表达上清液进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析,确认7800 kD毒性目的蛋白已经获得分泌表达,在诱导72 h时表达量最高。对ANEPⅢ基因的原核与真核表达产物进行提取、初步纯化后进行了抗虫试验。结果表明,原核表达产物没有显示出生物活性,真核表达产物具有较好的生物学活性。浓度为1 mg/mL的真核表达产物,喂食舞毒蛾2龄幼虫5 d后,校正死亡率达37.9%,幼虫食叶量下降50%。黄粉虫的生物测定结果表明,喂食1 mg/mL的真核表达产物5 d后,黄粉虫幼虫的校正死亡率为20%。 展开更多

关键词 抗神经兴奋肽 载体构建 蛋白表达 生物测定

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山杨组培扩繁体系技术研究

9

作者 冯连荣 李文颖 +3 位作者 王诗琦 矫丽曼 王乃锐 李仁平 《南方林业科学》 2025年第2期8-14,共7页

【目的】建立山杨高效组培扩繁体系及适宜容器苗生长的基质配方,为山杨工厂化育苗和培育优质山杨容器苗提供参考依据。【方法】以山杨嫩叶为外植体,通过设置不同培养基及激素配比,筛选适宜的叶片分化培养基配方;利用模糊数学隶属函数法... 【目的】建立山杨高效组培扩繁体系及适宜容器苗生长的基质配方,为山杨工厂化育苗和培育优质山杨容器苗提供参考依据。【方法】以山杨嫩叶为外植体,通过设置不同培养基及激素配比,筛选适宜的叶片分化培养基配方;利用模糊数学隶属函数法综合评价组培苗生根情况、生长指标及根系形态特征,筛选适宜生根培养基配方;设置不同组分的栽培基质,分析组培苗生长指标、生根情况及根系形态特征,筛选适宜组培苗移栽基质。【结果】叶片分化培养基配方L1叶片分化率为93.3%,不定芽数量多且粗壮,增殖系数为6.5,确定为山杨适宜分化培养基;茎段生根阶段宜采用WPM作为基础培养基,采用模糊数学隶属函数对10个生根培养基配方进行综合评价,综合排名依次为配方T8、配方T2、配方T7、配方T9、配方T6、配方T4、配方T3、配方T10、配方T5、配方T1。组培苗移栽基质S2在根系总长度、投影面积、表面积、体积、平均直径、节点数、根尖数和分叉数上与其他基质差异显著(P<0.05),表现最佳。【结论】山杨叶片适宜分化培养基为配方L1:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6 g/L,pH值6.0;山杨适宜生根培养基为配方T8:WPM+IBA 0.3 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6 g/L,pH值6.0;组培苗移栽基质以S2(丹麦草炭土+珍珠岩+蛭石,体积配比为3∶1∶1)为宜。 展开更多

关键词 山杨 组织培养 隶属函数法 栽培基质

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偏肿革裥菌降解木质素关键基因挖掘 被引量：5

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作者 赵清泉 池玉杰 +1 位作者 张健 冯连荣 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期79-83,共5页

通过对白腐菌偏肿革裥菌( Lenzites gibbosa )在木质和非木质环境下的转录组进行测序,从而预测和筛选出 L.gibbosa 与木材降解有关的基因。采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO等数据... 通过对白腐菌偏肿革裥菌( Lenzites gibbosa )在木质和非木质环境下的转录组进行测序,从而预测和筛选出 L.gibbosa 与木材降解有关的基因。采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO等数据库注释方法对转录本进行比较分析,预测和筛选出 L.gibbosa与木材降解有关的基因。L.gibbosa 转录组测序两组试验组分别设置3个生物学重复样本,共得到6个样本42.71 Gb Clean Data,各样品Clean Data平均达到7.11 Gb,各样品的Reads与参考基因组的比对效率在88.51~91.37%。差异表达分析得到差异表达基因1 120个,其中上调370个,下调750个。差异基因被注释到GO数据库的有493个,注释到eggNOG数据库的有857个。eggNOG分析表明,差异基因表达多聚集在翻译后修饰、蛋白质折叠、蛋白分子伴侣;碳水化合物的运输和代谢;能量产生和转化;次生代谢产物的生物合成、运输和分解代谢等功能分类下。GO分析表明,显著性富集与频率较高的生物过程是氧化还原过程、氧化还原酶活性和木质素代谢过程。 L.gibbosa 降解木材与木质素分解代谢过程(GO:0046274)、氧化还原过程(GO:0055114)和氧化还原酶活性(GO:0016491)等3个基因本体功能类目密切相关。根据基因功能注释的结果得到7个与白腐菌降解木质素相关的重要差异表达基因。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 白腐菌 转录组 木质素 降解

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辽宁省杨树叶锈病病原菌的鉴定

11

作者 柏乾 王占斌 +3 位作者 冯连荣 王诗琦 刘巍 彭儒胜 《浙江农林大学学报》 北大核心 2025年第6期1192-1200,共9页

【目的】栅锈菌属Melampsora病原菌引起的杨树Populus spp.叶锈病是分布最广、危害最严重的杨树叶部病害之一。明确辽宁省杨树国家林木种质资源基地杨树叶锈病的发生情况及病原菌物种多样性,为东北地区杨树叶锈病的早期预警和防控提供... 【目的】栅锈菌属Melampsora病原菌引起的杨树Populus spp.叶锈病是分布最广、危害最严重的杨树叶部病害之一。明确辽宁省杨树国家林木种质资源基地杨树叶锈病的发生情况及病原菌物种多样性,为东北地区杨树叶锈病的早期预警和防控提供重要依据。【方法】于2024年10月在辽宁省杨树国家林木种质资源基地和辽宁省杨树研究所共采集到39份杨树叶锈病样本。通过光学显微镜和扫描电镜对发生在两地的杨树叶锈病菌的夏孢子和冬孢子的形态特征进行观察,同时提取病原菌的基因组DNA,基于rDNA ITS和28S测序分析,构建系统发育树,结合形态学和分子系统发育分析对病原菌进行鉴定。【结果】在39份病原菌中,36份被鉴定为松杨栅锈菌M.laricis-populina,2份为北美栅锈菌M.medusae,1份为山杨栅锈菌M.populnea。其中,北美栅锈菌是中国重要的对外检疫有害生物,本次检测为在中国东北地区首次发现。【结论】共发现3种栅锈菌属病原菌,并首次在中国东北地区发现了对外检疫性有害生物北美栅锈菌。 展开更多

关键词 杨树叶锈病 形态学观察 分子检测 栅锈菌属

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迷宫栓孔菌热激蛋白基因的生物信息学与表达分析

12

作者 杨旭欣 冯连荣 +1 位作者 池玉杰 韩树英 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期776-786,共11页

为了探究迷宫栓孔菌(Trametes gibbosa)热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)家族的功能及结构,对经木屑处理不同时间点的菌丝样品进行cDNA建库,然后根据转录组数据筛选该菌株的所有HSPs基因并进行生物信息学分析;针对HSP100家族进行基... 为了探究迷宫栓孔菌(Trametes gibbosa)热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)家族的功能及结构,对经木屑处理不同时间点的菌丝样品进行cDNA建库,然后根据转录组数据筛选该菌株的所有HSPs基因并进行生物信息学分析;针对HSP100家族进行基因克隆和序列结构分析,并利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)对其在木屑处理下的表达量进行验证。结果如下:在迷宫栓孔菌中共筛选出32个HSPs基因,其编码的蛋白分为5个亚类,分别为HSP100(2个)、HSP90(2个)、HSP70(7个)、HSP60(1个)和小分子热激蛋白[small HSPs(sHSPs),20个],它们在菌体生长调控中具有蛋白翻译后修饰、蛋白质折叠、伴侣蛋白等重要功能。这些HSPs都为疏水蛋白,不同亚类的HSPs理化性质有所差异。HSP100由N-端、核苷酸结合域1(nucleotide-binding domain 1,NBD1)、NBD2、2个NBDs间的接头构成,其中,NBDs具有十分保守的Walker A、Walker B基序及精氨酸指残基。qRT-PCR扩增结果表明,在木屑处理下迷宫栓孔菌HSP100基因表达量有明显上调趋势。综上所述,迷宫栓孔菌中HSPs家族种类多且复杂,在应激情况下HSP100家族承担了重要的蛋白质解聚功能,其序列及结构相对保守。本研究结果为迷宫栓孔菌在胁迫应激方面的研究提供了理论依据。 展开更多

关键词 迷宫栓孔菌 白腐菌 热激蛋白 热激蛋白104 基因克隆 生物信息学

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2种启动子驱动下的VaCBF3基因植物表达载体构建 被引量：2

13

作者 冯连荣 王占斌 宋立志 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期559-564,共6页

为了探索山葡萄CBF3基因(VaCBF3)对杨树的遗传转化的影响,及组成型启动子和诱导型启动子对转基因植株生长的影响,分别构建由2种类型启动子调控的植物表达载体。根据GenBank上公布的rd29A基因序列设计特异性引物,利用PCR方法从拟南芥基因... 为了探索山葡萄CBF3基因(VaCBF3)对杨树的遗传转化的影响,及组成型启动子和诱导型启动子对转基因植株生长的影响,分别构建由2种类型启动子调控的植物表达载体。根据GenBank上公布的rd29A基因序列设计特异性引物,利用PCR方法从拟南芥基因组DNA中克隆rd29A基因启动子片段,利用限制性内切酶通过酶切、连接构建由组成型启动子35S和诱导型启动子rd29A基因启动子驱动的VaCBF3基因植物表达载体,利用冻融法完成重组质粒对根癌农杆菌LBA4404的转化。试验结果表明,所克隆的rd29A基因启动子片段序列分析表明该启动子片段长度为945bp,与GenBank中基因序列同源性达99%,具有DRE、ABRE、TATA box和CAAT box4个完整的顺式作用元件,具有启动子功能。经过酶切、连接成功地将目的基因与载体质粒连接,并将重组质粒导入至根癌农杆菌LBA4404中,为下一步利用农杆菌介导法对杨树的遗传转化及研究2种启动子的启动效率奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 启动子 RD29A 35S VaCBF3基因 植物表达载体

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根癌农杆菌介导杨树遗传转化的影响因素 被引量：15

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作者 冯连荣 宋立志 +2 位作者 张妍 彭儒胜 赵大根 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期120-126,共7页

针对根癌农杆菌介导杨树遗传转化过程中杨树受体系统的建立、质粒转化载体的构建、目的基因转化和转化体选择4部分影响因子进行综述。影响因子包括杨树基因型、外植体类型等内部因素,培养基、培养条件、vir基因诱导物、抗生素等外部因... 针对根癌农杆菌介导杨树遗传转化过程中杨树受体系统的建立、质粒转化载体的构建、目的基因转化和转化体选择4部分影响因子进行综述。影响因子包括杨树基因型、外植体类型等内部因素,培养基、培养条件、vir基因诱导物、抗生素等外部因素。总结了在实际操作中应该注意的问题,为更好地利用根癌农杆菌介导法开展杨树遗传转化,提高转化效率提供借鉴和参考。 展开更多

关键词 根癌农杆菌 杨树 遗传转化 影响因素

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杨树上一株链格孢菌的分离、鉴定及室内防治药剂筛选 被引量：9

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作者 冯连荣 彭儒胜 +4 位作者 周宏民 赵鑫闻 张妍 梁德军 田云峰 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2018年第6期106-111,共6页

2010年以来新疆塔城地区杨树发生大面积杨树枝干病害,给杨树生产带来巨大损失。在研究俄罗斯杨枝干病害时,以5年生新疆塔城地区俄罗斯杨枝干为材料,采用组织分离法分离获得了一株链格孢属真菌,根据其菌丝及孢子形态结合ITS序列进行了菌... 2010年以来新疆塔城地区杨树发生大面积杨树枝干病害,给杨树生产带来巨大损失。在研究俄罗斯杨枝干病害时,以5年生新疆塔城地区俄罗斯杨枝干为材料,采用组织分离法分离获得了一株链格孢属真菌,根据其菌丝及孢子形态结合ITS序列进行了菌种鉴定,因链格孢属真菌可引起多种植物病害,采用5种常用的杀菌剂对其进行室内抑菌试验。结果表明,分离获得的链格孢属真菌鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)。室内药剂筛选结果显示,10%多抗霉素对供试菌株毒力最强,EC50值为0. 035 1mg/m L,其他依次为80%代森锰锌、65%代森锌、50%多菌灵和70%甲基硫菌灵。 展开更多

关键词 链格孢菌 菌种分离 ITS序列鉴定 药剂筛选

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杨树农杆菌介导遗传转化中抗生素浓度的筛选 被引量：3

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作者 冯连荣 张兴芬 +5 位作者 尹杰 宋立志 赵继梅 彭儒胜 矫丽曼 张妍 《西南林业大学学报（自然科学）》 CAS 2014年第4期31-35,共5页

研究头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢拉啶、头孢他啶4种头孢类抗生素对根癌农杆菌LBA4404和EHA105的抑制作用;以欧美杨111和盖杨组培苗为材料,研究卡那霉素(Km)对2种杨树叶片分化及茎段生根的影响,并分析头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化及... 研究头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢拉啶、头孢他啶4种头孢类抗生素对根癌农杆菌LBA4404和EHA105的抑制作用;以欧美杨111和盖杨组培苗为材料,研究卡那霉素(Km)对2种杨树叶片分化及茎段生根的影响,并分析头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化及茎段生根的影响。结果表明,头孢噻肟钠、头孢曲松钠和头孢他啶对LBA4404具有良好的抑菌效果,使用浓度为50 mg/L,其中头孢噻肟钠对农杆菌EHA105的抑菌效果最好,头孢拉啶抑菌效果较差。不同杨树品种对卡那霉素的耐受性差异不大,欧美杨111在叶片转化筛选培养时,使用浓度为10 mg/L,抗性芽生根阶段为20 mg/L;盖杨在叶片转化筛选培养时,卡那霉素使用浓度为20 mg/L,抗性芽生根阶段为25 mg/L,头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化和茎段生根影响不大。 展开更多

关键词 杨树 抗生素 根癌农杆菌 抑菌效果 遗传

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一株野生金针菇菌种的分离、鉴定与生物学特性研究 被引量：3

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作者 冯连荣 张妍 +2 位作者 赵鑫闻 宋立志 梁德军 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第5期1088-1096,共9页

为给野生食用菌开发利用提供候选菌种资源,以采自杨树树桩上的野生大型真菌JC423为研究对象,通过形态学鉴定、出菇试验、ITS序列分析和系统发育分析,明确其分离地位。采用单因素试验,研究不同碳源、氮源、无机盐、维生素、pH值和温度对J... 为给野生食用菌开发利用提供候选菌种资源,以采自杨树树桩上的野生大型真菌JC423为研究对象,通过形态学鉴定、出菇试验、ITS序列分析和系统发育分析,明确其分离地位。采用单因素试验,研究不同碳源、氮源、无机盐、维生素、pH值和温度对JC423菌丝生长的影响。结果表明,采集的野生食用菌依据子实体形态初步鉴定为金针菇。ITS序列分析获得773 bp目的片段;BLAST序列比对显示,目的片段与Flammulina filiformis strain F007相似性最高,为99.34%;下载部分相似性序列,用MEGA 7.0构建进化树,JC423与序列号为MN337400.1的F.filiformis strain F007聚为一支,结合形态学特征将JC423鉴定为金针菇。生物学特性结果表明,JC423菌丝生长适宜碳源为果糖,适宜氮源为蛋白胨,适宜pH值范围为9~10,适宜生长温度为25℃,无机盐和维生素对菌丝生长影响不大。该研究明确了野生金针菇菌丝生长的营养需求和条件,研究结果可以为金针菇开发利用奠定基础。 展开更多

关键词 金针菇 菌种分离 ITS序列 生物学特性

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盖杨叶片高频植株再生体系建立 被引量：5

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作者 冯连荣 《安徽农业科学》 CAS 2016年第11期209-211,共3页

[目的]利用生物技术手段提高盖杨抗寒性并扩大其栽培区域。[方法]以盖杨叶片为外植体,研究不同激素组合对盖杨叶片分化及生根的影响,建立盖杨叶片高频植株再生体系。[结果]盖杨不定芽分化最适培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.20 mg... [目的]利用生物技术手段提高盖杨抗寒性并扩大其栽培区域。[方法]以盖杨叶片为外植体,研究不同激素组合对盖杨叶片分化及生根的影响,建立盖杨叶片高频植株再生体系。[结果]盖杨不定芽分化最适培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.20 mg/L+蔗糖25 g/L+琼脂6.0 g/L,p H 6.5,不定芽再生频率为96.67%,平均分化芽数20.3个;最适生根培养基配方为1/2MS+IBA0.3 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.0 g/L,p H 6.0,生根率可达100%,平均生根数15.8条。[结论]该研究建立了盖杨高效组织培养再生系统,为该杨树品种的快速无性繁殖和基因的遗传转化提供了依据。 展开更多

关键词 盖杨 叶片 再生体系

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根癌农杆菌介导山葡萄VaCBF3基因转化欧美杨111的研究

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作者 冯连荣 矫丽曼 +4 位作者 王占斌 赵继梅 尹杰 宋立志 梁德军 《西南林业大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2019年第5期21-27,共7页

以欧美杨111为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘法进行了山葡萄VaCBF3基因的遗传转化,分析了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间对转化效率的影响,并对获得抗性植株进行PCR检测。结果表明:欧美杨111遗传转化过程中适宜的预培养... 以欧美杨111为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘法进行了山葡萄VaCBF3基因的遗传转化,分析了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间对转化效率的影响,并对获得抗性植株进行PCR检测。结果表明:欧美杨111遗传转化过程中适宜的预培养时间为3 d,适宜菌液浓度为OD600为0.3~0.4,适宜侵染时间为2~4 min,适宜共培养时间为3 d。经过对转化子的PCR鉴定,获得4株阳性转基因植株,初步说明外源山葡萄CBF3基因已导入至欧美杨111号中,转化体系已成功建立。 展开更多

关键词 欧美杨111 农杆菌介导法 遗传转化 山葡萄 CBF3基因

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杨树叶锈病研究进展及控制策略探讨 被引量：5

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作者 冯连荣 宋立志 +1 位作者 张兴芬 尹杰 《防护林科技》 2012年第1期117-119,123,共4页

杨树叶锈病是危害杨树幼苗及幼林的主要叶部病害之一,危害极为严重。文章就杨树叶锈病分布与为害、病原菌种类与生物学特性、生理小种分化、寄主抗病性及抗病机制、防治技术等方面的研究进展进行了概述,并探讨了杨树叶锈病的控制策略。

关键词 杨树 叶锈病 栅锈菌 控制策略

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