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鸡毒害艾美耳球虫ROP30蛋白的原核表达及其对鸡免疫保护效果的观察
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作者 李慧中 张弛 +6 位作者 严丹丽 宋鹏慧 汪飞燕 冯茜茜 刘丹丹 许金俊 陶建平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1419-1430,共12页
旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP3... 旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP30表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗rEnROP30的多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测子孢子(S Z)和MZ-2中的天然EnROP30蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析En ROP 30基因在SZ和MZ-2中的转录水平。用重组蛋白按高剂量(200μg·羽-1)、中剂量(100μg·羽-1)和低剂量(50μg·羽-1)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示:该基因全长1605 bp,编码534个氨基酸,推导相对分子质量为55.55 ku;重组蛋白大小约为65 ku,以可溶形式存在,能被小鼠抗His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在S Z和MZ-2中均检测到天然EnROP30蛋白,其分子质量大约为62 ku;EnROP30蛋白定位在S Z和MZ-2的顶端;MZ-2中En ROP 30转录水平显著高于S Z(P<0.05)。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加,病变记分显著降低(P<0.05);中剂量组的相对增重率(92.96%)、卵囊减少率(66.87%)和ACI值(158.96)均为最高。综上:成功克隆表达了En ROP 30基因,重组蛋白rEnROP30对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护力。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 En ROP 30 克隆 表达 免疫保护力
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化学氧化增产煤层气研究现状及展望
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作者 姜凤成 王璐瑶 +4 位作者 王籼铂 宋党育 张传兵 冯茜茜 王明仕 《能源与环保》 2025年第1期121-128,137,共9页
作为一种非常规天然气,煤层气的高效开发利用有利于减少矿区作业安全隐患,降低温室气体排放,确保能源的可持续发展。煤层气开发过程中,存在煤储层产气量远低于常规储层的问题,因而各种煤层气增产方法被广泛研究。其中,化学氧化具有成本... 作为一种非常规天然气,煤层气的高效开发利用有利于减少矿区作业安全隐患,降低温室气体排放,确保能源的可持续发展。煤层气开发过程中,存在煤储层产气量远低于常规储层的问题,因而各种煤层气增产方法被广泛研究。其中,化学氧化具有成本低廉、反应速率快、所需时间短的特点及提高煤生物成气率的潜力而受到青睐。从煤层气的成因及储存特征2个方面阐明煤层气氧化增产的必要性,分析煤层化学改性的增透机理,对具有应用潜力的次氯酸钠、二氧化氯、过氧化氢、过硫酸盐4种氧化剂增产煤层气的研究现状进行梳理,指出氧化增产过程中可能出现的问题并对其发展进行展望。利用化学氧化改造煤储层,有望形成煤层气增产新模式,增加煤层气资源开采综合经济效益。 展开更多
关键词 化学氧化 煤层气 煤的氧化降解 煤层增透 增产
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鸡球虫重组蛋白rEnApiAP2对鸡免疫保护效果的观察 被引量:3
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作者 王乐乐 王礼跃 +9 位作者 蔡为民 康喜龙 冯茜茜 张知之 范雪莲 朱玉 刘丹丹 许金俊 潘志明 陶建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1716-1727,共12页
将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活... 将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活率、排出血便数、平均增重、相对增重率、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)和血清抗体水平为指标,评价rEnApiAP2单免及与rEtGAM联免的免疫保护效果。结果显示:各试验组的成活率均为100%;与未免疫攻虫组比较,各免疫组鸡排血便堆数减少、平均增重增加。在rEnApiAP2单免组间,低剂量组的相对增重率(82.36%)、卵囊减少率(73.88%)和抗球虫指数(155.26)均为最高,平均病变记分最低(1.71)。攻毒害艾美耳球虫后,联免组的ACI值均大于相应的单免组,其中rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(169.83)最高。攻柔嫩艾美耳球虫后,rEnApiAP2单免组的ACI值(128.37)低于rEtGAM56、rEtGAM59单免组(130.12、151.88),rEnApiAP2与rEtGAM59联免组的ACI值(141.62)接近于rEtGAM59单免组,rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(115.46)小于rEtGAM56单免组。各免疫组血清抗体水平均显著高于空白对照组(P<0.05)。rEnApiAP2对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护效果,与rEtGAM联免可提高对毒害艾美耳球虫的免疫保护力。本研究结果为鸡球虫病重组亚单位疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 柔嫩艾美耳球虫 rEnApiAP2 rEtGAM 保护效果
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PBL教学法在妇科肿瘤临床护理教学查房中的应用分析 被引量:6
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作者 陈英 冯茜茜 +1 位作者 方坚 彭伟萍 《中国卫生产业》 2013年第35期35-36,共2页
目的对PBL教学法在妇科肿瘤临床护理教学查房中的应用进行分析。方法资料选自2012年2月—2013年2月在本院妇瘤科一、二病区临床实习的护生130名,将护生分为两组,每组各65名,研究组采用PBL教学法,对照组采用传统的教学方法,并对两组护生... 目的对PBL教学法在妇科肿瘤临床护理教学查房中的应用进行分析。方法资料选自2012年2月—2013年2月在本院妇瘤科一、二病区临床实习的护生130名,将护生分为两组,每组各65名,研究组采用PBL教学法,对照组采用传统的教学方法,并对两组护生的查房相关成绩进行分析。结果采用PBL的教学查房,研究组专科的理论成绩(91.2±1.79)分,明显高于对照组的(84.6±3.57)分;研究组护理文书书写成绩(90.1±2.64)分,明显高于对照组(83.2±4.02)分,差异有统计学意义(P<0.05);两组护生的专科操作成绩无明显差异(P>0.05)。结论对护生进行PBL的教学查房,对护生的理论知识及综合能力具有较大提升,还能够明显的提升临床护理的教学质量,在临床护理的教学查房应用中具有重要价值。 展开更多
关键词 PBL 护理教学查房 护生
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鸡毒害艾美耳球虫Api AP2转录因子的克隆、表达与虫体内定位 被引量:1
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作者 王礼跃 冯茜茜 +9 位作者 蔡为民 刘丹丹 候照峰 康喜龙 张知之 范雪莲 朱玉 许金俊 潘志明 陶建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4379-4388,共10页
顶复门原虫的AP2结构域蛋白(ApiAP2)可能是调控虫体生长发育的转录因子。本研究旨在克隆、表达毒害艾美耳球虫ApiAP2转录因子,检测其天然蛋白及其在虫体内的亚细胞定位。以毒害艾美耳球虫第3代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增毒害艾美... 顶复门原虫的AP2结构域蛋白(ApiAP2)可能是调控虫体生长发育的转录因子。本研究旨在克隆、表达毒害艾美耳球虫ApiAP2转录因子,检测其天然蛋白及其在虫体内的亚细胞定位。以毒害艾美耳球虫第3代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增毒害艾美耳球虫EnApiAP2基因后,连接至pMD18-T载体,测序后构建pET28a(+)-EnApiAP2表达载体,转化至表达菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化复性重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗rEnApiAP2多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测裂殖子中天然EnApiAP2蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析EnApiAP2基因在第2、3代裂殖子中的转录水平。结果显示,该基因全长1830 bp,编码610个氨基酸,含有一个AP2结构域,预测分子质量67.69 ku;重组蛋白大小约为74 ku,主要以包涵体形式存在,可以被6×HIS标签单抗、鸡抗毒害艾美耳球虫康复血清和鸡抗柔嫩艾美耳球虫康复血清识别;在第3代裂殖子中检测到天然EnApiAP2蛋白,分子质量约为85 ku;EnApiAP2蛋白定位在第2、3代裂殖子细胞核内;第3代裂殖子EnApiAP2转录水平显著高于第2代裂殖子(P<0.01)。成功克隆、表达了EnApiAP2基因,证实该基因表达的蛋白定位在裂殖子的细胞核内,为进一步研究EnApiAP2蛋白的转录因子功能奠定了基础。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 EnApiAP2基因 克隆 表达 定位
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64项新职业帮你打开64种风景
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作者 冯茜茜 《职业技术》 2006年第13期32-32,共1页
关键词 风景线 劳动保障部 体育经纪人 安全防范 发布制度 职业学校 毕业生 职业指导 新兴职业 就业市场 当代中国 社会变迁
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