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抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定
被引量:
2
1
作者
朱小影
陶崑
+5 位作者
李身锋
张利军
李亚娟
王东
钟梁
冯文莉
(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1306-1311,共6页
目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒...
目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体中,转化BL21(DH3)宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA'与细胞结合的活性以及诱导细胞凋亡的能力。结果:限制性酶切图谱和序列分析证实,在pET32a(+)原核表达载体上成功地构建了hscFvETA'单链免疫毒素载体;该基因在pET32a(+)载体中获得高效表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符;经Western blot鉴定证实纯化后的重组免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正确的;经FCM证实hscFv-ETA'蛋白能特异性结合CML细胞并诱导细胞凋亡。结论:已成功构建并原核表达单链免疫毒素hscFv-ETA',证明该蛋白能发挥特异性结合并诱导CML细胞凋亡。
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关键词
慢性粒细胞白血病
重组免疫毒素
克隆
原核表达
凋亡
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职称材料
题名
抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定
被引量:
2
1
作者
朱小影
陶崑
李身锋
张利军
李亚娟
王东
钟梁
冯文莉
(
指导
)
机构
重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1306-1311,共6页
基金
国家自然科学基金(No.30871102)
重庆医科大学优秀博士论文基金(2009年)资助项目
文摘
目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体中,转化BL21(DH3)宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA'与细胞结合的活性以及诱导细胞凋亡的能力。结果:限制性酶切图谱和序列分析证实,在pET32a(+)原核表达载体上成功地构建了hscFvETA'单链免疫毒素载体;该基因在pET32a(+)载体中获得高效表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符;经Western blot鉴定证实纯化后的重组免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正确的;经FCM证实hscFv-ETA'蛋白能特异性结合CML细胞并诱导细胞凋亡。结论:已成功构建并原核表达单链免疫毒素hscFv-ETA',证明该蛋白能发挥特异性结合并诱导CML细胞凋亡。
关键词
慢性粒细胞白血病
重组免疫毒素
克隆
原核表达
凋亡
Keywords
Chronic myelogenous leukemia
Recombinant immunotoxin
Cloning
Prokaryotic expression
Apoptosis
分类号
R733.72 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定
朱小影
陶崑
李身锋
张利军
李亚娟
王东
钟梁
冯文莉
(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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