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利用绿色荧光蛋白建立包涵体变-复性新方法
被引量：
2
1
作者
张颋
冯延叶
+4 位作者
沈亚领
金维荣
杨忠
王菊芳
王小宁
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期141-146,共6页
为提高常规稀释复性方法的复性效率,以重组绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)包涵体为模型,开发一种新的双变性-稀释复性方法。新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GFP包涵体,通过梯度降低变性液的酸碱度...
为提高常规稀释复性方法的复性效率,以重组绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)包涵体为模型,开发一种新的双变性-稀释复性方法。新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GFP包涵体,通过梯度降低变性液的酸碱度析出溶解目的蛋白,再以尿素为第二变性剂溶解析出的蛋白,随后进行稀释复性。结果显示:与常规方法比,新方法复性的绿色荧光蛋白活性收率提高至1.5～2.3倍,复性蛋白对温度、溶液酸碱度及变性剂的稳定性提高。增强型绿色荧光蛋白(enhanced GFP,EGFP)及其融合蛋白的包涵体采用新方法进行复性,均取得80%以上的活性回收率,说明新方法对GFP系列融合蛋白的包涵体具有一定的适用性。新方法从变性剂使用与包涵体结构的关系出发,突破常规操作中变性剂单次使用的局限,既保留了简便性又提高了常规稀释复性方法的效率。
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关键词
大肠杆菌
包涵体
变性
复性
绿色荧光蛋白
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职称材料
题名
利用绿色荧光蛋白建立包涵体变-复性新方法
被引量：
2
1
作者
张颋
冯延叶
沈亚领
金维荣
杨忠
王菊芳
王小宁
机构
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
生物芯片上海国家工程研究中心
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期141-146,共6页
基金
国家"863"计划项目(2007AA021702)
国家"973"计划项目(2007CB512402)
广州市科技计划项目(2007J1-C0131)
文摘
为提高常规稀释复性方法的复性效率,以重组绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)包涵体为模型,开发一种新的双变性-稀释复性方法。新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GFP包涵体,通过梯度降低变性液的酸碱度析出溶解目的蛋白,再以尿素为第二变性剂溶解析出的蛋白,随后进行稀释复性。结果显示:与常规方法比,新方法复性的绿色荧光蛋白活性收率提高至1.5～2.3倍,复性蛋白对温度、溶液酸碱度及变性剂的稳定性提高。增强型绿色荧光蛋白(enhanced GFP,EGFP)及其融合蛋白的包涵体采用新方法进行复性,均取得80%以上的活性回收率,说明新方法对GFP系列融合蛋白的包涵体具有一定的适用性。新方法从变性剂使用与包涵体结构的关系出发,突破常规操作中变性剂单次使用的局限,既保留了简便性又提高了常规稀释复性方法的效率。
关键词
大肠杆菌
包涵体
变性
复性
绿色荧光蛋白
Keywords
Escherichia coli
inclusion body
denaturation
refolding
green fluorescent protein
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用绿色荧光蛋白建立包涵体变-复性新方法
张颋
冯延叶
沈亚领
金维荣
杨忠
王菊芳
王小宁
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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