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纤维二糖磷酸化酶表达条件的优化及其酶学性质研究 被引量:1
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作者 彭念 陈婷婷 +5 位作者 王璐 樊俊萍 高玉杉 冉小琴 刘露露 李勇昊 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第16期125-131,共7页
纤维二糖磷酸化酶(cellobiose phosphorylase,CBP)磷酸化裂解纤维二糖为葡萄糖-1-磷酸,它是木质纤维素转化淀粉的关键酶。该研究将来源于Clostridium thermocellum YM4的cbp基因通过表达载体pET-28a(+)构建重组菌Rosetta(DE3)/pET-28a-... 纤维二糖磷酸化酶(cellobiose phosphorylase,CBP)磷酸化裂解纤维二糖为葡萄糖-1-磷酸,它是木质纤维素转化淀粉的关键酶。该研究将来源于Clostridium thermocellum YM4的cbp基因通过表达载体pET-28a(+)构建重组菌Rosetta(DE3)/pET-28a-CBP用于表达CBP。对其诱导表达条件进行优化,结果显示当诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)浓度和诱导时间分别为15℃、0.2 mmol/L和12 h时CBP酶活力最高,为0.47 IU/mL。进一步利用Ni柱分离纯化出带有His标签的CBP,结果表明该重组酶分子质量为95 kDa,比酶活1.03 IU/mg;最适反应温度60℃,最适反应pH 6,半失活时间为60 min;金属离子Cu^(2+)显示出对该酶有强烈的抑制作用,然后依次是Zn^(2+)、Fe^(3+)、Ca^(2+)、Mn^(4+)(P<0.05);而K^(+)、Mg^(2+)和Na^(+)对该酶活力无显著性影响(P>0.05);最后对重组CBP的动力学参数进行了表征,K_(m)值为19.61μmol/mL,V_(max)值为1.19μmol/(mL·min)且K_(cat)值为21.38 s^(-1)。 展开更多
关键词 纤维二糖磷酸化酶 重组表达 大肠杆菌 酶学性质 生物催化
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基于GEO数据库的肺纤维化相关差异表达基因生物信息学分析
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作者 冉小琴 姚钦 +3 位作者 姜望予 屠思懿 龙梦 陈芳 《浙江临床医学》 2022年第12期1755-1758,共4页
目的利用生物信息学工具筛选在肺纤维化中差异表达的基因及信号通路,为肺纤维化的研究提供新思路.方法在高通量基因表达(GEO)数据库中搜索"Idiopathic pulmonary fibrosis",下载含正常肺组织和肺纤维化的芯片数据集GSE53845,... 目的利用生物信息学工具筛选在肺纤维化中差异表达的基因及信号通路,为肺纤维化的研究提供新思路.方法在高通量基因表达(GEO)数据库中搜索"Idiopathic pulmonary fibrosis",下载含正常肺组织和肺纤维化的芯片数据集GSE53845,使用GEO2R分析并筛选出IPF和正常肺组织之间的差异表达基因.通过DAVID网站对筛选出的基因进行富集分析,利用STRING数据库对获得的差异基因进行蛋白互作(PPI)网络构建.最终通过Cytoscape对PPI网络进行可视化分析并筛选核心基因.结果IPF组织中涉及差异表达基因共148个,其中高表达108个,低表达40个.GO富集分析显示差异表达基因主要富集于趋化因子活性、细胞因子活性等;KEGG通路富集分析显示差异表达基因主要富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路等.通过STRING数据库和Cytoscape软件筛选出趋化因子、基质金属蛋白酶等核心基因.其中趋化因子、细胞因子等基因与肺纤维化的发生发展关系密切.结论趋化因子、细胞因子等基因表达可能在肺纤维化的发生发展过程中起重要作用. 展开更多
关键词 肺纤维化 生物信息学 基因靶点
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过表达内源Trswo1基因提高里氏木霉纤维素酶对玉米秸秆水解效率的研究 被引量:2
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作者 莫易 冉小琴 +4 位作者 王赞丞 陈雨点 彭念 李江洪 李勇昊 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第14期60-66,共7页
利用β-葡萄糖苷酶的转糖苷活性制备廉价葡萄糖-槐糖混合物(mixture of glucose and sophorose, MGD)作为诱导物被成功用于诱导里氏木霉(Trichoderma reesei)高效合成纤维素酶,但蛋白质组学显示相比于纤维素作为诱导物,膨胀素基因(Trsw... 利用β-葡萄糖苷酶的转糖苷活性制备廉价葡萄糖-槐糖混合物(mixture of glucose and sophorose, MGD)作为诱导物被成功用于诱导里氏木霉(Trichoderma reesei)高效合成纤维素酶,但蛋白质组学显示相比于纤维素作为诱导物,膨胀素基因(Trswo1)显著性低表达导致纤维素酶水解效率低。因此利用组成型强启动子丙酮酸脱羧酶1(pyruvate decarboxylase1, PDC1)在T.reesei Rut C30中过表达内源Trswo1基因,2个T.reesei阳性转化子OEswo1-1和OEswo1-2的Trswo1基因转录水平分别提高了4.65倍和3.91倍,虽然T.reesei OEswo1-1和OEswo1-2在MGD诱导下合成的纤维素酶活性、内切纤维素酶活性和外切纤维素酶活性与野生菌酶活性均无显著性差异,但所产纤维素酶对玉米秸秆的水解效率分别提高了6.98%和13.93%。进一步通过X射线衍射(X-ray diffraction, XRD)和扫描电镜(scanning electron microscope, SEM)显示水解效率提高主要是由于木质纤维素结晶度的降低,同时纤维结构有不同程度的疏松和崩解。该研究成果对T.reesei利用可溶性诱导物合成纤维素酶系中纤维素降解辅助蛋白含量低的问题具有一定意义。 展开更多
关键词 生物炼制 里氏木霉 纤维素酶 膨胀素 玉米秸秆 水解
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红草止鼾胶囊治疗阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的临床疗效观察
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作者 姚钦 冉小琴 +3 位作者 姜望予 屠思懿 龙梦 陈芳 《浙江临床医学》 2023年第2期248-250,共3页
目的 探讨红草止鼾胶囊治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的疗效.方法 OSAHS患者96例,随机分为对照组及观察组,对照组患者鼓励适度减重,健康有氧运动,避免过度疲劳,认知干预,适度调整饮食结构等,观察组在此基础上予红草止鼾胶... 目的 探讨红草止鼾胶囊治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的疗效.方法 OSAHS患者96例,随机分为对照组及观察组,对照组患者鼓励适度减重,健康有氧运动,避免过度疲劳,认知干预,适度调整饮食结构等,观察组在此基础上予红草止鼾胶囊口服,4周为1个疗程,共治疗2个疗程.比较治疗前后两组患者临床症状、睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)、夜间最低血氧饱和度(LSpO_(2))水平、夜间平均血氧饱和度水平(MSaO_(2))、Epworth嗜睡量表(ESS)评分、中医证候积分等指标的变化.结果 治疗2个疗程后,两组患者AHI、ESS评分及中医证候评分均有不同程度的下降(P<0.05);观察组治疗后AHI、ESS评分及中医证候评分与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组临床总有效率约61.5%,明显优于对照组13.63%(P<0.05).结论 红草止鼾胶囊对OSAHS疗效显著,能有效提高患者生活质量,其中对合并鼻炎、咽炎的患者疗效尤为明显,且安全性良好. 展开更多
关键词 红草止鼾胶囊 临床疗效 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 中医药制剂
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过表达Trxyr1基因对里氏木霉合成纤维素酶的影响
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作者 刘文书 王赞丞 +4 位作者 高玉杉 莫易 彭念 冉小琴 李勇昊 《中国酿造》 CAS 北大核心 2023年第8期58-64,共7页
以里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C30为出发菌株,利用组成型启动子(PDC1)过表达同源Trxyr1基因,探究阳性转化子T.reesei OExyr1在不同诱导物及非诱导条件下合成纤维素酶的情况,最后粗酶液被用于水解碱预处理的玉米秸秆以分析其催化... 以里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C30为出发菌株,利用组成型启动子(PDC1)过表达同源Trxyr1基因,探究阳性转化子T.reesei OExyr1在不同诱导物及非诱导条件下合成纤维素酶的情况,最后粗酶液被用于水解碱预处理的玉米秸秆以分析其催化性能。结果表明,T.reesei OExyr1在葡萄糖-β二糖混合物诱导下纤维素酶活是野生型菌株的1.22倍;而以纤维素为诱导物,纤维素酶活可提高2.95倍;此外在非诱导条件下T.reesei OExyr1可合成纤维素酶;但T.reesei OExyr1所产纤维素酶对玉米秸秆的水解效率与野生型无显著性差异。以上结果说明不同诱导物下Trxyr1基因高表达均可提升纤维素酶产量,尤其对于固体纤维素诱导物,但Trxyr1基因表达量的提高对纤维素酶系影响不大。研究成果对阐明T.reesei合成纤维素酶的分子机制及构建高产纤维素酶菌株提供参考。 展开更多
关键词 里氏木霉 纤维素酶 诱导物 Trxyr1基因 转录因子 玉米秸秆
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