人PRR11启动子的结构与功能初步分析 被引量：9

1

作者 艾青 卜友泉 +6 位作者 刘竹 兰欢 吉颖 杜刚 杨正梅 刘革力 宋方洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期356-363,共8页

PRR11(proline-rich protein 11,PRR11)是我们最近发现的一个新的肿瘤相关基因.初步研究表明,PRR11参与细胞增殖、细胞周期和细胞癌变等多种生物学过程.为了进一步研究PRR11基因的转录调控机制并全面解析其功能,本研究对PRR11基因的启... PRR11(proline-rich protein 11,PRR11)是我们最近发现的一个新的肿瘤相关基因.初步研究表明,PRR11参与细胞增殖、细胞周期和细胞癌变等多种生物学过程.为了进一步研究PRR11基因的转录调控机制并全面解析其功能,本研究对PRR11基因的启动子进行了克隆鉴定和初步分析.首先,应用5'RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了PRR11基因的转录起始位点,发现了其具有多个转录起始位点.通过PCR定向克隆和DNA blunting技术,构建了6个相互重叠并覆盖PRR11基因转录起始位点附近约2.0 kb区域的PRR 11基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,PRR 11基因启动子主要定位于转录起始位点附近-563 bp～+341 bp的区域内.采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明,PRR 11基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒、CCAAT盒以及潜在的经典转录因子E2F1和MYB的结合位点,提示Sp1、NF-Y、E2F1和MYB等经典转录因子可能参与PRR 11基因的转录调控. 展开更多

关键词 PRR11(proline-rich PROTEIN 11) 启动子 转录调控 肿瘤相关基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

siRNA介导的NFBD1表达沉默对HeLa细胞增殖与凋亡的影响 被引量：7

2

作者 卜友泉 杨正梅 +3 位作者 兰欢 镇磊 刘革力 宋方洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期943-949,共7页

NFBD1,也称MDC1,是1个参与细胞内DNA损伤后细胞应答反应的重要分子.为探讨NFBD1在细胞增殖和凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究采用siRNA技术抑制NFBD1的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞HeLa细胞增殖和细胞凋... NFBD1,也称MDC1,是1个参与细胞内DNA损伤后细胞应答反应的重要分子.为探讨NFBD1在细胞增殖和凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究采用siRNA技术抑制NFBD1的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞HeLa细胞增殖和细胞凋亡的影响.半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,筛选到的短链NFBD1 siRNA能有效抑制内源NFBD1的表达,抑制程度约100%.细胞生长曲线分析结果表明,siRNA介导的NFBD1表达沉默导致HeLa细胞生长增殖的显著抑制.FACS分析结果表明,NFBD1表达抑制导致sub-G1峰的出现,同时蛋白质印迹分析观察到了caspase 3和PARP(poly-ADP-ribose polymerase)的剪接激活,表明NFBD1表达抑制诱发了细胞凋亡.在该凋亡过程中,P53及其下游靶分子Bax和Puma的表达水平均没有发生明显变化,但Noxa的表达在mRNA和蛋白质水平上均显著上调,强烈提示该凋亡过程很可能是1个不依赖P53的凋亡途径,且Noxa的转录激活在该凋亡过程中可能起着重要作用.这些结果表明,NFBD1参与细胞生长增殖和凋亡的调节,是一个潜在的肿瘤治疗新靶点. 展开更多

关键词 NFBD1 SIRNA 细胞增殖 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定 被引量：5

3

作者 崔涛 兰欢 +4 位作者 杜刚 刘革力 易发平 卜友泉 宋方洲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期98-101,105,共5页

克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定。以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11。然后把PET-28a... 克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定。以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11。然后把PET-28a-PRR11重组载体转化到BL21中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。结果表明成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中,目的蛋白成功表达。成功构建的PRR11基因的原核表达载体,及PRR11的重组蛋白表达产物,为进一步研究PRR11的基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 PRR11基因 PET-28a 原核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

HPV 16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗诱导CTL致CaSki细胞凋亡体外实验研究 被引量：2

4

作者 焦庆昉 易发平 +6 位作者 汪长东 袁成福 刘勒 兰欢 符少月 艾青 宋方洲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期115-119,共5页

目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未... 目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测转染前后小鼠树突状细胞表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)。DC疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞,与CaSki细胞共培养后,采用DAPI、TUNEL及流式细胞术检测CaSki细胞凋亡情况。结果:pAd-E6E7成功转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞,体外转染效率约为40%～50%,成功制备了HPV16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗,诱导产生细胞毒性T淋巴细胞,经DAPI、TUNEL及流式细胞术检测证明CaSki出现凋亡。结论:以带有HPV16 E6E7基因的重组腺病毒载体转染DC制备基因修饰的DC疫苗,诱导CTL致使CaSki细胞出现凋亡。 展开更多

关键词 人乳头状瘤病毒 细胞毒性T淋巴细胞 CASKI细胞 树突状细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

人NFBD1启动子区域顺式作用元件CHR的定点突变分析 被引量：1

5

作者 朱江 兰欢 +1 位作者 洪苏玲 卜友泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1020-1023,共4页

目的对NFBD1启动子区域顺式作用元件CHR进行定点突变分析,以分析CHR在NFBD1转录调控中的作用。方法以原有NFBD1核心启动子荧光素酶报告基因重组体NFBD1-PS1-325为模板,采用PCR介导的基因定点突变技术对NFBD1启动子区域中的CHR位点进行... 目的对NFBD1启动子区域顺式作用元件CHR进行定点突变分析,以分析CHR在NFBD1转录调控中的作用。方法以原有NFBD1核心启动子荧光素酶报告基因重组体NFBD1-PS1-325为模板,采用PCR介导的基因定点突变技术对NFBD1启动子区域中的CHR位点进行定点突变,构建相应的CHR定点突变重组体;采用荧光素酶双报告基因分析技术检测各重组体的启动子活性,分析CHR定点突变对NFBD1启动子活性的影响;结合阿霉素处理,分析CHR在DNA损伤后NFBD1转录下调中的潜在作用。结果CHR定点突变后能显著降低NFBD1的启动子活性;CHR定点突变后显著减弱了DNA损伤后NFBD1的转录下调比例。结论CHR参与NFBD1的基础转录调控及DNA损伤后的转录下调。 展开更多

关键词 NFBD1 启动子 转录调控 CHR 顺式作用元件

在线阅读 下载PDF 职称材料

老年大鼠胼胝体额区有髓神经纤维与髓鞘改变的研究 被引量：1

6

作者 徐瑲 兰欢 +1 位作者 卢伟 唐勇 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期440-443,共4页

目的:探讨老年大鼠胼胝体额区有髓神经纤维、髓鞘的结构变化和髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的表达变化,以及二者间的关系。方法:运用透射电子显微镜和新的体视学方法分别对年轻组和老年组雌性Long-Evans大鼠胼胝体额区有髓... 目的:探讨老年大鼠胼胝体额区有髓神经纤维、髓鞘的结构变化和髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的表达变化,以及二者间的关系。方法:运用透射电子显微镜和新的体视学方法分别对年轻组和老年组雌性Long-Evans大鼠胼胝体额区有髓神经纤维和髓鞘进行定量研究,运用Western blot对年轻组和老年组大鼠胼胝体额区MBP表达进行定量研究。结果:与年轻组相比,老年组胼胝体额区体积存在显著性降低,有髓神经纤维总体积显著性下降,21.5 kD MBP表达量显著性降低。21.5 kD MBP的表达降低与有髓神经纤维总体积、髓鞘总体积的降低之间呈正相关。结论:胼胝体存在显著性老年萎缩,胼胝体额区有髓神经纤维和MBP的老年改变可能与老年大脑额叶功能下降有关。 展开更多

关键词 胼胝体额区 髓鞘碱性蛋白 有髓神经纤维 体视学 老年改变

在线阅读 下载PDF 职称材料

人HAS3启动子的结构与功能初步分析 被引量：1

7

作者 镇磊 卜友泉 +5 位作者 杜刚 杨正梅 兰欢 崔涛 刘革力 宋方洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期534-541,共8页

透明质酸合酶3(hyaluronan synthase3,HAS3),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE(rapid amplification ... 透明质酸合酶3(hyaluronan synthase3,HAS3),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点,发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略,构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450bp的区域内.转录因子结合位点分析表明,HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点.结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控. 展开更多

关键词 透明质酸合酶3 CDNA末端快速扩增 启动子 转录调控

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸭MCHR2的基因克隆及蛋白表达鉴定

8

作者 朱勇 汪长东 +11 位作者 刘革力 袁成福 卜友泉 易发平 焦庆昉 艾青 刘竹 兰欢 武向梅 宋方洲 胡平生 Tomas Hokfelt 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1520-1522,共3页

目的筛查能够稳定表达黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因的动物,为构建动物模型提供实验依据。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,从新鲜的鸭、Wista鼠、SD鼠、C3H10鼠、C57鼠、狗、羊、猪等大脑组织中提取总RNA,以此扩增MCHR2基... 目的筛查能够稳定表达黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因的动物,为构建动物模型提供实验依据。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,从新鲜的鸭、Wista鼠、SD鼠、C3H10鼠、C57鼠、狗、羊、猪等大脑组织中提取总RNA,以此扩增MCHR2基因的全长cDNA编码区序列;利用Western blot检测鸭、犬和猪的大脑海马区及皮质区MCHR2蛋白的表达情况。结果通过RT-PCR获得鸭、犬、猪脑组织中的目的片段;通过Western blot验证了MCHR2蛋白在鸭脑组织中具有高表达。结论将鸭作为构建动物模型的对象,用于MCHR2基因的相关功能研究具有可行性。 展开更多

关键词 MCHR2 MCR RT-PCR WESTERN BLOT 鸭 肥胖

在线阅读 下载PDF 职称材料

siRNA介导的Plk1表达沉默对COS-7细胞影响的研究

9

作者 朱江 洪苏玲 +2 位作者 柯霞 兰欢 卜友泉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期324-327,共4页

目的:研究(Polo-like kinase1,Plk1)表达被抑制后对COS-7细胞的影响,探讨Plk1作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值。方法:化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入COS-7细胞;采用RT-PCR和Western blot法检... 目的:研究(Polo-like kinase1,Plk1)表达被抑制后对COS-7细胞的影响,探讨Plk1作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值。方法:化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入COS-7细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测siRNA对Plk1表达的抑制效果;采用胎盘兰染色结合细胞计数法、FACS分析siRNA介导的Plk1表达抑制对COS-7癌细胞生长增殖、细胞周期的影响。结果:半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制COS-7细胞中Plk1的表达。细胞生长分析结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默导致COS-7细胞的生长增殖受到显著抑制。FACS分析结果表明,Plk1表达被抑制后,出现细胞周期停滞,大量细胞呈现sub-G1期时相。结论:siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制COS-7细胞生长增殖,是一个潜在的肿瘤治疗靶点。 展开更多

关键词 PLK1 SIRNA 细胞周期 细胞生长

在线阅读 下载PDF 职称材料

富碳对草莓果实品质及生长特性的影响 被引量：2

10

作者 赵静 兰欢 +3 位作者 申雅楠 王雪婷 侯雷平 李梅兰 《山西农业科学》 2018年第4期538-543,共6页

CO_2是影响植物生长最重要的环境因子之一,试验设置了自然条件CO_2(350~500μmol/mol)和高CO_2(750~850μmol/mol)2个处理,研究了4个草莓品种在富碳和自然条件下果实的生长和品质指标的变化。结果表明,高CO_2浓度下果实的生长速率、总... CO_2是影响植物生长最重要的环境因子之一,试验设置了自然条件CO_2(350~500μmol/mol)和高CO_2(750~850μmol/mol)2个处理,研究了4个草莓品种在富碳和自然条件下果实的生长和品质指标的变化。结果表明,高CO_2浓度下果实的生长速率、总产量增加,但果实平均单果质量降低,体积减小;品质方面,高CO_2浓度有助于果实可溶性糖、可溶性固形物及蛋白质的累积,降低了有机酸的含量;在总酚、类黄酮及花青素含量方面,不同品种对CO_2的反应不同。总体来看,高CO_2浓度加快了果实的生长,提高了产量,改善了果实的品质,为富碳条件下草莓的生产提供了一定的参考依据。 展开更多

关键词 草莓 富碳 果实品质 果质量

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于深度学习三维成型的钢板表面缺陷检测 被引量：5

11

作者 兰欢 余建波 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第3期466-476,561,共12页

为了解决二维检测方法难以检测带有深度信息的缺陷问题,提出全新的三维重建网络.提出基于多尺度特征增强的级联式三维重建网络(MFE-CasMVSNet),并与点云数据处理技术结合,用于钢板表面缺陷检测.为了提高三维重建的精度,提出位置导向的... 为了解决二维检测方法难以检测带有深度信息的缺陷问题,提出全新的三维重建网络.提出基于多尺度特征增强的级联式三维重建网络(MFE-CasMVSNet),并与点云数据处理技术结合,用于钢板表面缺陷检测.为了提高三维重建的精度,提出位置导向的特征增强模块(PFEM)和多尺度特征自适应融合模块(MFAFM),对特征进行有效提取并减少信息丢失.提出基于曲率稀疏化的密度聚类方法(CS-DBSCAN),用于精确识别不同部位的缺陷.引入三维检测框,实现对缺陷的定位与检测可视化.实验结果表明,相较于图像几何的重建方法,MFE-Cas-MVSNet能够更加精确、快速地实现钢板表面的三维重建.相较于二维检测,三维缺陷检测能够精确获取缺陷的三维形状信息,实现对钢板表面缺陷的多维度检测. 展开更多

关键词 表面缺陷检测 深度学习 三维重建 点云分割 缺陷定位

在线阅读 下载PDF 职称材料

药食同源类中草药防治多囊卵巢综合征的研究进展 被引量：8

12

作者 兰欢 朱哲慧 +3 位作者 吕芳芳 宋家乐 曾榛 周燕园 《辽宁中医杂志》 CAS 2020年第10期209-212,共4页

多囊卵巢综合征(PCOS)是青春期及育龄期妇女常见的代谢紊乱性生殖内分泌疾病,常伴有不孕、肥胖、胰岛素抵抗、高雄激素血症、心血管系统紊乱等多种临床表现,严重威胁女性的生殖健康。西医对该病目前尚无特效疗法,作者从近年来中医药治疗... 多囊卵巢综合征(PCOS)是青春期及育龄期妇女常见的代谢紊乱性生殖内分泌疾病,常伴有不孕、肥胖、胰岛素抵抗、高雄激素血症、心血管系统紊乱等多种临床表现,严重威胁女性的生殖健康。西医对该病目前尚无特效疗法,作者从近年来中医药治疗PCOS的相关临床及动物实验研究文献中发现,染料木素、葛根素、菟丝子总黄酮、隐丹参酮、小檗碱、甘草次酸等药食同源类中草药对该病的治疗优势日渐凸显并受到研究者的广泛关注,但其具体机制还有待进一步探索。 展开更多

关键词 多囊卵巢综合症 药食同源 中草药

在线阅读 下载PDF 职称材料

山西中部地区日光温室草莓优质高效栽培技术要点 被引量：3

13

作者 白瑞 张静 +3 位作者 赵静 兰欢 李梅兰 侯雷平 《南方农业》 2018年第14期3-4,共2页

针对目前草莓裸根苗生产性能低的问题,通过温室消毒、品种选择、定植前准备、定植、定植后管理、病虫害防治及采摘等7个环节的深入研究,以期为山西省中部地区日光温室草莓种植提供技术参考。

关键词 山西中部地区 草莓 裸根苗 日光温室 栽培技术

在线阅读 下载PDF 职称材料