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结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组疫苗的构建与鉴定
被引量：
2
1
作者
薛士鹏
吴建勇
+4 位作者
宋彬
齐红双
李英
党颍徐
满永宏
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期744-747,752,共5页
目的构建结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组疫苗并鉴定。方法通过PCR扩增Rv2029c抗原编码基因,然后用双酶切法将Rv2029c和pMV261质粒酶切,再将酶切产物连接成rpMV261-2029c重组质粒,用电穿孔法将该质粒导入BCG中构建成rBCG-Rv2029c重组疫苗...
目的构建结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组疫苗并鉴定。方法通过PCR扩增Rv2029c抗原编码基因,然后用双酶切法将Rv2029c和pMV261质粒酶切,再将酶切产物连接成rpMV261-2029c重组质粒,用电穿孔法将该质粒导入BCG中构建成rBCG-Rv2029c重组疫苗,最后用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达的重组蛋白。结果通过PCR成功扩增出1 020bp的Rv2029c基因,插入到pMV261质粒中,再把融合基因成功导入BCG中,经双酶切及基因比对鉴定证实,再通过热诱导后用Western blotting显示重组蛋白具有免疫原性。结论成功构建了结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组活疫苗,为重组疫苗的免疫机制研究奠定基础。
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关键词
卡介苗
重组疫苗
结核杆菌
Rv2029c
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职称材料
结核菌重组基因rBCG-Rv2029c的克隆表达及免疫原性分析
被引量：
1
2
作者
薛士鹏
王涵
+2 位作者
薛婷
党颍徐
夏西超(指导)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第13期1604-1608,共5页
目的:用结核分枝杆菌特异性抗原Rv2029构建结核重组疫苗(BCG-Rv2029),在C57BL/6小鼠体内评估其免疫效应,并初步探讨其免疫机制。方法: PCR扩增基因Rv2029,构建重组质粒pMV261-Rv2029,转入卡介苗感受态细胞中,诱导表达并纯化Rv2029蛋白...
目的:用结核分枝杆菌特异性抗原Rv2029构建结核重组疫苗(BCG-Rv2029),在C57BL/6小鼠体内评估其免疫效应,并初步探讨其免疫机制。方法: PCR扩增基因Rv2029,构建重组质粒pMV261-Rv2029,转入卡介苗感受态细胞中,诱导表达并纯化Rv2029蛋白。以重组的rBCG-Rv2029c活疫苗为免疫原,皮下免疫C57BL/6小鼠,间接 ELISA方法检测小鼠血抗原特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,XTT检测脾淋巴细胞抗原特异性增殖反应,流式细胞仪观察CD4 +T和CD8 +T细胞比例变化,IFN-γ、IL-2检测试剂盒检测细胞培养基中细胞因子表达水平。结果:成功构建重组疫苗BCG-Rv2029C,并诱导表达重组蛋白。经免疫小鼠后,重组卡介苗rBCG-Rv2029c能诱导较BCG更高的IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,IgG2a/IgG1 的变化提示rBCG-Rv2029c可诱导Th1型免疫反应。与BCG相比,rBCG-Rv2029c可诱导产生更强的特异性细胞增殖反应、刺激产生更多的杀伤性CD8 + T细胞和CD4 + T细胞、能诱导产生更高水平的IFN-γ、IL-2细胞因子。结论:重组结核病疫苗rBCG-Rv2029c可诱导产生较BCG更强且针对休眠MTB的特异性体液免疫和细胞免疫,是一株值得深入研究的新型结核病疫苗。
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关键词
结核分枝杆菌
Rv2029c
克隆
免疫
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职称材料
题名
结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组疫苗的构建与鉴定
被引量：
2
1
作者
薛士鹏
吴建勇
宋彬
齐红双
李英
党颍徐
满永宏
机构
南阳医学高等专科学校基础医学部
河南大学附属南阳南石医院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期744-747,752,共5页
基金
校自科NYYZ006~~
文摘
目的构建结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组疫苗并鉴定。方法通过PCR扩增Rv2029c抗原编码基因,然后用双酶切法将Rv2029c和pMV261质粒酶切,再将酶切产物连接成rpMV261-2029c重组质粒,用电穿孔法将该质粒导入BCG中构建成rBCG-Rv2029c重组疫苗,最后用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达的重组蛋白。结果通过PCR成功扩增出1 020bp的Rv2029c基因,插入到pMV261质粒中,再把融合基因成功导入BCG中,经双酶切及基因比对鉴定证实,再通过热诱导后用Western blotting显示重组蛋白具有免疫原性。结论成功构建了结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组活疫苗,为重组疫苗的免疫机制研究奠定基础。
关键词
卡介苗
重组疫苗
结核杆菌
Rv2029c
Keywords
BCG vaccine
recombinant vaccine
Mycobacterium tuberculosis
Rv2029c
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
结核菌重组基因rBCG-Rv2029c的克隆表达及免疫原性分析
被引量：
1
2
作者
薛士鹏
王涵
薛婷
党颍徐
夏西超(指导)
机构
南阳医学高等专科学校基础医学部
平顶山学院医学院
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第13期1604-1608,共5页
基金
河南省高等学校重点科研项目(18A330004)
南阳市自然科学基础与前沿研究项目(2017JCQY010)
文摘
目的:用结核分枝杆菌特异性抗原Rv2029构建结核重组疫苗(BCG-Rv2029),在C57BL/6小鼠体内评估其免疫效应,并初步探讨其免疫机制。方法: PCR扩增基因Rv2029,构建重组质粒pMV261-Rv2029,转入卡介苗感受态细胞中,诱导表达并纯化Rv2029蛋白。以重组的rBCG-Rv2029c活疫苗为免疫原,皮下免疫C57BL/6小鼠,间接 ELISA方法检测小鼠血抗原特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,XTT检测脾淋巴细胞抗原特异性增殖反应,流式细胞仪观察CD4 +T和CD8 +T细胞比例变化,IFN-γ、IL-2检测试剂盒检测细胞培养基中细胞因子表达水平。结果:成功构建重组疫苗BCG-Rv2029C,并诱导表达重组蛋白。经免疫小鼠后,重组卡介苗rBCG-Rv2029c能诱导较BCG更高的IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,IgG2a/IgG1 的变化提示rBCG-Rv2029c可诱导Th1型免疫反应。与BCG相比,rBCG-Rv2029c可诱导产生更强的特异性细胞增殖反应、刺激产生更多的杀伤性CD8 + T细胞和CD4 + T细胞、能诱导产生更高水平的IFN-γ、IL-2细胞因子。结论:重组结核病疫苗rBCG-Rv2029c可诱导产生较BCG更强且针对休眠MTB的特异性体液免疫和细胞免疫,是一株值得深入研究的新型结核病疫苗。
关键词
结核分枝杆菌
Rv2029c
克隆
免疫
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
Rv2029c
Clone
Immune
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌rBCG-Rv2029c重组疫苗的构建与鉴定
薛士鹏
吴建勇
宋彬
齐红双
李英
党颍徐
满永宏
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
结核菌重组基因rBCG-Rv2029c的克隆表达及免疫原性分析
薛士鹏
王涵
薛婷
党颍徐
夏西超(指导)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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