-
题名纤维素酶荧光探针的制备及应用
- 1
-
-
作者
朱辉
徐宋瑶
党雅茹
章燕
鲁彦
苑琳
李冠华
-
机构
内蒙古医科大学基础医学院
内蒙古大学生命科学学院
辽宁省疾病预防控制中心
汉阳大学土木与环境工程系
-
出处
《现代化工》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第S01期269-274,共6页
-
文摘
表征酶与底物有效吸附是认识纤维素酶促水解反应过程、揭示预处理作用机制的重要手段之一。成功构建了纤维素外切酶(Cel7A)、纤维素内切酶(Cel5A)和葡萄糖苷酶(BglⅠ)荧光探针,优化吸附条件,并考察其对细胞壁的吸附。结果表明,Cel7A、Cel5A、BglⅠ基因N端分别连接至荧光蛋白基因mCherry、eGFP、eBFP C端,依次连入pPICZα载体,成功在毕赤酵母(X33)菌株表达;mCherry-Cel7A、eGFP-Cel5A和eBFP-BglⅠ荧光探针的最佳激发波长分别为573、469 nm和385 nm,最佳发射波长分别为613、511 nm和447 nm;以滤纸为底物,测定最佳吸附浓度分别为0.058、0.19 U/mL和1.93 U/mL,最佳吸附时间分别为7、7 min和6 min,最佳观察时间分别为<2 min、<12 s和<12 s。纤维素酶荧光探针能够结合生物质样品,并反应出不同底物与纤维素酶亲和力的差异。上述工作为生物质抗降解屏障、生物质预处理、纤维素高效酶促水解等研究提供了技术支持。
-
关键词
异源表达
纤维素酶
荧光探针
细胞壁
酶吸附
-
Keywords
heterologous expression
cellulase
fluorescent probe
cell wall
enzyme adsorption
-
分类号
Q7
[生物学—分子生物学]
-
