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禽4型腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用
1
作者
张宇
程凡玉
+7 位作者
俞赵荣
邵颖
魏宁波
陈芳芳
王振宇
宋祥军
涂健
祁克宗
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第5期2364-2371,共8页
本研究旨在制备禽4型腺病毒(fowl adenovirus type 4,FAdV-4)的单克隆抗体,鉴定其特异性结合位点,并评估其在免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和免疫沉淀反应中的应用价值。使用纯化的FAdV-4-AH-F41株全病毒免疫小鼠,通过间接酶联免...
本研究旨在制备禽4型腺病毒(fowl adenovirus type 4,FAdV-4)的单克隆抗体,鉴定其特异性结合位点,并评估其在免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和免疫沉淀反应中的应用价值。使用纯化的FAdV-4-AH-F41株全病毒免疫小鼠,通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选出一株阳性杂交瘤细胞并进行亚克隆,并对所制备的单克隆抗体进行效价检测。利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)与蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定单克隆抗体生物学特性,构建了pCold TF-Hexon、pET-32a(+)-Fiber1、pCold TF-Penton、pCold TF-Fiber2的原核表达载体,并通过Western blot初步鉴定所得单克隆抗体的特异性结合位点,在检测出抗体的亚型后,将其初步应用于IHC和免疫沉淀试验。结果表明本试验获得1株稳定分泌抗Fiber1蛋白的单克隆抗体,并将其命名为5C7。该抗体效价为1∶102400,亚型为IgG-2b,表现出良好的生物学特性。在IHC中,能够观察到明显的病变特征;在免疫沉淀试验中,5C7可作为捕获抗体,与病毒感染细胞中的Fiber1蛋白特异性结合。结果提示,本试验通过全病毒粒子免疫小鼠所制备的单克隆抗体能够特异性识别Fiber1蛋白,并在IHC和免疫沉淀反应中显示出良好的应用前景,为FAdV-4实验室病理诊断方法的建立和Fiber1蛋白的功能研究奠定了基础。
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关键词
血清4型禽腺病毒
单克隆抗体
抗体鉴定
Fiber1蛋白
IHC
免疫共沉淀
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职称材料
羊口疮病毒安徽株023基因的原核表达与生物信息学分析
被引量：
11
2
作者
张高峰
杨侃侃
+7 位作者
张谦
王元红
俞赵荣
张学琪
鲁智敏
刘自敏
李永东
王勇
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第1期30-38,共9页
试验旨在克隆表达羊口疮病毒安徽株023基因,对该基因进行PCR扩增、亚克隆及表达,通过蛋白表达纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,并利用生物信息学软件预测该基因编码的蛋白的理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域等。结果显示,...
试验旨在克隆表达羊口疮病毒安徽株023基因,对该基因进行PCR扩增、亚克隆及表达,通过蛋白表达纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,并利用生物信息学软件预测该基因编码的蛋白的理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域等。结果显示,023基因全长819 bp,编码272个氨基酸,蛋白大小约为42 ku,主要以包涵体的形式表达且有良好的反应原性。生物信息学分析表明,该蛋白是亲水稳定蛋白,其中α-螺旋(h)占27. 57%,延伸链(e)占17. 28%,β-转角(t)占12. 13%,无规则卷曲(c)占43. 01%,无信号肽区域和跨膜结构域,可能存在30个磷酸化位点,4个B细胞抗原表位,3个CTL表位和3个Th表位。研究结果不仅有助于了解羊口疮病毒023基因的结构与功能,还能为建立快速诊断的检测方法提供参考。
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关键词
口疮病毒
023基因
克隆表达
生物信息学
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职称材料
题名
禽4型腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用
1
作者
张宇
程凡玉
俞赵荣
邵颖
魏宁波
陈芳芳
王振宇
宋祥军
涂健
祁克宗
机构
安徽农业大学动物医学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第5期2364-2371,共8页
基金
国家自然科学基金(31972642)
安徽省重点研究与开发计划(202204c0602003)。
文摘
本研究旨在制备禽4型腺病毒(fowl adenovirus type 4,FAdV-4)的单克隆抗体,鉴定其特异性结合位点,并评估其在免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和免疫沉淀反应中的应用价值。使用纯化的FAdV-4-AH-F41株全病毒免疫小鼠,通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选出一株阳性杂交瘤细胞并进行亚克隆,并对所制备的单克隆抗体进行效价检测。利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)与蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定单克隆抗体生物学特性,构建了pCold TF-Hexon、pET-32a(+)-Fiber1、pCold TF-Penton、pCold TF-Fiber2的原核表达载体,并通过Western blot初步鉴定所得单克隆抗体的特异性结合位点,在检测出抗体的亚型后,将其初步应用于IHC和免疫沉淀试验。结果表明本试验获得1株稳定分泌抗Fiber1蛋白的单克隆抗体,并将其命名为5C7。该抗体效价为1∶102400,亚型为IgG-2b,表现出良好的生物学特性。在IHC中,能够观察到明显的病变特征;在免疫沉淀试验中,5C7可作为捕获抗体,与病毒感染细胞中的Fiber1蛋白特异性结合。结果提示,本试验通过全病毒粒子免疫小鼠所制备的单克隆抗体能够特异性识别Fiber1蛋白,并在IHC和免疫沉淀反应中显示出良好的应用前景,为FAdV-4实验室病理诊断方法的建立和Fiber1蛋白的功能研究奠定了基础。
关键词
血清4型禽腺病毒
单克隆抗体
抗体鉴定
Fiber1蛋白
IHC
免疫共沉淀
Keywords
serotype 4 of fowl adenovirus
monoclonal antibody
antibody identification
fiber 1 protein
IHC
immunoprecipitation
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
羊口疮病毒安徽株023基因的原核表达与生物信息学分析
被引量：
11
2
作者
张高峰
杨侃侃
张谦
王元红
俞赵荣
张学琪
鲁智敏
刘自敏
李永东
王勇
机构
安徽农业大学动物科技学院
宁波市疾病预防控制中心
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第1期30-38,共9页
基金
国家自然科学基金(31602063)
安徽省自然科学基金(1508085QC60)
安徽农业大学大学生科技创新基金项目
文摘
试验旨在克隆表达羊口疮病毒安徽株023基因,对该基因进行PCR扩增、亚克隆及表达,通过蛋白表达纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,并利用生物信息学软件预测该基因编码的蛋白的理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域等。结果显示,023基因全长819 bp,编码272个氨基酸,蛋白大小约为42 ku,主要以包涵体的形式表达且有良好的反应原性。生物信息学分析表明,该蛋白是亲水稳定蛋白,其中α-螺旋(h)占27. 57%,延伸链(e)占17. 28%,β-转角(t)占12. 13%,无规则卷曲(c)占43. 01%,无信号肽区域和跨膜结构域,可能存在30个磷酸化位点,4个B细胞抗原表位,3个CTL表位和3个Th表位。研究结果不仅有助于了解羊口疮病毒023基因的结构与功能,还能为建立快速诊断的检测方法提供参考。
关键词
口疮病毒
023基因
克隆表达
生物信息学
Keywords
orf virus
023 gene
cloning and expression
bioinformatics
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
禽4型腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用
张宇
程凡玉
俞赵荣
邵颖
魏宁波
陈芳芳
王振宇
宋祥军
涂健
祁克宗
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
羊口疮病毒安徽株023基因的原核表达与生物信息学分析
张高峰
杨侃侃
张谦
王元红
俞赵荣
张学琪
鲁智敏
刘自敏
李永东
王勇
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019
11
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职称材料
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