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IL-6过表达慢病毒稳转细胞系构建及其对HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达影响
被引量：
10
1
作者
潘正兰
管世鹤
+6 位作者
陈礼文
杨凯
张浩
段元丽
王兆飞
王秀
侯舒文
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2019年第4期594-599,604,共7页
目的构建白介素-6(IL-6)过表达慢病毒稳转细胞系,探讨其对乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝病毒DNA(HBV-DNA)表达的影响。方法以Huh7细胞gDNA为模板,通过PCR技术扩增获得IL-6片段并克隆到pMIGR1载体上,测序鉴定正确后,分别...
目的构建白介素-6(IL-6)过表达慢病毒稳转细胞系,探讨其对乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝病毒DNA(HBV-DNA)表达的影响。方法以Huh7细胞gDNA为模板,通过PCR技术扩增获得IL-6片段并克隆到pMIGR1载体上,测序鉴定正确后,分别用pMIGR1质粒和pMIGR1-IL-6质粒与慢病毒包装质粒pCL-10A1共转染293T细胞,获得重组慢病毒颗粒,分别感染Huh7细胞,嘌呤霉素筛选出成功表达目的质粒的阳性细胞,分别命名为Huh7/con和Huh7/IL-6,电化学发光法检测细胞培养上清液中IL-6表达水平;qRT-PCR技术检测细胞中IL-6 mRNA表达水平;化学发光微粒子免疫检测法检测HBsAg、HBeAg表达水平,PCR-荧光探针法检测HBV-DNA表达水平。结果通过测序验证成功构建pMIGR1-IL-6质粒;通过慢病毒介导成功筛选出Huh7/con和Huh7/IL-6细胞系;电化学发光法及qRT-PCR结果显示,与对照组Huh7/con细胞系比较,Huh7/IL-6细胞系培养上清液IL-6水平及细胞中IL-6 mRNA水平显著升高;pcDNA1.3质粒转染Huh7、HepG2、Huh7/IL-6细胞6、12、24、48 h后上清液中IL-6表达水平显著升高;20 ng/ml IL-6处理pcDNA1.3质粒转染后的Huh7和HepG2细胞6、12、24、48 h后上清液中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平显著下降;pcDNA1.3质粒转染Huh7/IL-6细胞6、12、24、48 h后上清液中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平显著下降。结论成功构建IL-6慢病毒表达载体,并建立稳定过表达IL-6的Huh7细胞系;pcDNA1.3质粒转染可使IL-6表达上调;IL-6可使HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平下降。
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关键词
白介素-6
慢病毒表达载体
稳定转染
乙肝表面抗原
乙肝E抗原
乙肝病毒DNA
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职称材料
干扰素λ3在慢性乙型肝炎患者血清中的表达及临床意义
被引量：
5
2
作者
段元丽
管世鹤
+6 位作者
杨凯
陈礼文
张浩
王秀
潘正兰
侯舒文
王兆飞
《临床肝胆病杂志》
CAS
北大核心
2019年第2期315-318,共4页
目的了解慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平,探究其临床意义及其与核苷和核苷酸类药物治疗的关系。方法选取2017年1月-2018年5月在安徽医科大学第二附属医院就诊的慢性乙型肝炎患者119例,收集同期HBsAg阴性的22例健康体检者作为健康对照...
目的了解慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平,探究其临床意义及其与核苷和核苷酸类药物治疗的关系。方法选取2017年1月-2018年5月在安徽医科大学第二附属医院就诊的慢性乙型肝炎患者119例,收集同期HBsAg阴性的22例健康体检者作为健康对照。采用ELISA法检测血清中IFNλ3的表达水平,比较慢性乙型肝炎患者与健康人血清IFNλ3水平差异,分析慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平与HBeAg的关系,观察不同核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎患者的血清IFNλ3水平,以及核苷和核苷酸类药物对外周血单个核细胞培养上清中IFNλ3水平的影响。满足正态性和方差齐性的计量资料多组间比较采用方差分析;对非正态或方差不齐的计量资料,两组比较采用Wilcoxon秩和检验,多组比较采用Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用Nemenyi法检验。相关性分析用Spearman相关性分析法。结果慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平明显低于健康对照组[14. 7(5. 9～28. 5) pg/ml vs 76. 1(39. 4～112. 0) pg/ml,Z=-10. 114,P <0. 001]。未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平与log HBV DNA呈负相关(r=-0. 621,P <0. 001)。HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平高于HBeAg阳性患者,2组间差异有统计学意义[16. 4(9. 0～31. 3) pg/ml vs 8. 7(2. 9～23. 2) pg/ml,Z=-2. 205,P=0. 02]。服用阿德福韦酯抗病毒治疗的患者血清IFNλ3水平显著高于服用恩替卡韦、替诺福韦、替比夫定、拉米夫定治疗的患者,差异均有统计学意义(P值均<0. 05);体外实验核苷和核苷酸类药物处理的外周血单个核细胞培养上清中未见IFNλ3水平明显升高。结论慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3显著低于健康人群,阿德福韦酯抗病毒治疗患者具有较高的血清IFNλ3水平。
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关键词
肝炎
乙型
慢性
干扰素类
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职称材料
《杜拉拉升职记》:现代职场的生存体验
3
作者
侯舒文
《电影评介》
2010年第11期25-26,共2页
电影《杜拉拉升职记》以五彩斑斓的光影给我们制造了一个关于职场、爱情、事业的美好幻像。穿梭于写字间的外企白领阶层,他们的工作生活方式构成了脱胎于西方公司文化的"西洋景",在锦衣华裘的精美包装下,他们的工作状态、生...
电影《杜拉拉升职记》以五彩斑斓的光影给我们制造了一个关于职场、爱情、事业的美好幻像。穿梭于写字间的外企白领阶层,他们的工作生活方式构成了脱胎于西方公司文化的"西洋景",在锦衣华裘的精美包装下,他们的工作状态、生活状态是什么样的呢?相当大程度上,他们的生存状态代表了当下白领阶层的生活缩影。
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关键词
爱情
事业
生存状态
白领阶层
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职称材料
题名
IL-6过表达慢病毒稳转细胞系构建及其对HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达影响
被引量：
10
1
作者
潘正兰
管世鹤
陈礼文
杨凯
张浩
段元丽
王兆飞
王秀
侯舒文
机构
安徽医科大学第二附属医院检验科
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2019年第4期594-599,604,共7页
基金
安徽省科技厅重点研究与开发计划项目(编号:1804h08020236)
安徽省高校自然科学研究项目(编号:KJ2018A0206)
文摘
目的构建白介素-6(IL-6)过表达慢病毒稳转细胞系,探讨其对乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝病毒DNA(HBV-DNA)表达的影响。方法以Huh7细胞gDNA为模板,通过PCR技术扩增获得IL-6片段并克隆到pMIGR1载体上,测序鉴定正确后,分别用pMIGR1质粒和pMIGR1-IL-6质粒与慢病毒包装质粒pCL-10A1共转染293T细胞,获得重组慢病毒颗粒,分别感染Huh7细胞,嘌呤霉素筛选出成功表达目的质粒的阳性细胞,分别命名为Huh7/con和Huh7/IL-6,电化学发光法检测细胞培养上清液中IL-6表达水平;qRT-PCR技术检测细胞中IL-6 mRNA表达水平;化学发光微粒子免疫检测法检测HBsAg、HBeAg表达水平,PCR-荧光探针法检测HBV-DNA表达水平。结果通过测序验证成功构建pMIGR1-IL-6质粒;通过慢病毒介导成功筛选出Huh7/con和Huh7/IL-6细胞系;电化学发光法及qRT-PCR结果显示,与对照组Huh7/con细胞系比较,Huh7/IL-6细胞系培养上清液IL-6水平及细胞中IL-6 mRNA水平显著升高;pcDNA1.3质粒转染Huh7、HepG2、Huh7/IL-6细胞6、12、24、48 h后上清液中IL-6表达水平显著升高;20 ng/ml IL-6处理pcDNA1.3质粒转染后的Huh7和HepG2细胞6、12、24、48 h后上清液中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平显著下降;pcDNA1.3质粒转染Huh7/IL-6细胞6、12、24、48 h后上清液中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平显著下降。结论成功构建IL-6慢病毒表达载体,并建立稳定过表达IL-6的Huh7细胞系;pcDNA1.3质粒转染可使IL-6表达上调;IL-6可使HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平下降。
关键词
白介素-6
慢病毒表达载体
稳定转染
乙肝表面抗原
乙肝E抗原
乙肝病毒DNA
Keywords
IL-6
lentiviral vector
stable transfection
HBsAg
HBeAg
HBV-DNA
分类号
R512.62 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
干扰素λ3在慢性乙型肝炎患者血清中的表达及临床意义
被引量：
5
2
作者
段元丽
管世鹤
杨凯
陈礼文
张浩
王秀
潘正兰
侯舒文
王兆飞
机构
安徽医科大学第二附属医院检验科
出处
《临床肝胆病杂志》
CAS
北大核心
2019年第2期315-318,共4页
基金
安徽省科技厅重点研究与开发计划项目(1804h08020236)
安徽省高校自然科学研究项目(KJ2018A0206)
文摘
目的了解慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平,探究其临床意义及其与核苷和核苷酸类药物治疗的关系。方法选取2017年1月-2018年5月在安徽医科大学第二附属医院就诊的慢性乙型肝炎患者119例,收集同期HBsAg阴性的22例健康体检者作为健康对照。采用ELISA法检测血清中IFNλ3的表达水平,比较慢性乙型肝炎患者与健康人血清IFNλ3水平差异,分析慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平与HBeAg的关系,观察不同核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎患者的血清IFNλ3水平,以及核苷和核苷酸类药物对外周血单个核细胞培养上清中IFNλ3水平的影响。满足正态性和方差齐性的计量资料多组间比较采用方差分析;对非正态或方差不齐的计量资料,两组比较采用Wilcoxon秩和检验,多组比较采用Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用Nemenyi法检验。相关性分析用Spearman相关性分析法。结果慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平明显低于健康对照组[14. 7(5. 9～28. 5) pg/ml vs 76. 1(39. 4～112. 0) pg/ml,Z=-10. 114,P <0. 001]。未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平与log HBV DNA呈负相关(r=-0. 621,P <0. 001)。HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3水平高于HBeAg阳性患者,2组间差异有统计学意义[16. 4(9. 0～31. 3) pg/ml vs 8. 7(2. 9～23. 2) pg/ml,Z=-2. 205,P=0. 02]。服用阿德福韦酯抗病毒治疗的患者血清IFNλ3水平显著高于服用恩替卡韦、替诺福韦、替比夫定、拉米夫定治疗的患者,差异均有统计学意义(P值均<0. 05);体外实验核苷和核苷酸类药物处理的外周血单个核细胞培养上清中未见IFNλ3水平明显升高。结论慢性乙型肝炎患者血清IFNλ3显著低于健康人群,阿德福韦酯抗病毒治疗患者具有较高的血清IFNλ3水平。
关键词
肝炎
乙型
慢性
干扰素类
Keywords
hepatitis B,chronic
interferons
分类号
R512.62 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
《杜拉拉升职记》:现代职场的生存体验
3
作者
侯舒文
机构
河南省艺术研究院
出处
《电影评介》
2010年第11期25-26,共2页
文摘
电影《杜拉拉升职记》以五彩斑斓的光影给我们制造了一个关于职场、爱情、事业的美好幻像。穿梭于写字间的外企白领阶层,他们的工作生活方式构成了脱胎于西方公司文化的"西洋景",在锦衣华裘的精美包装下,他们的工作状态、生活状态是什么样的呢?相当大程度上,他们的生存状态代表了当下白领阶层的生活缩影。
关键词
爱情
事业
生存状态
白领阶层
分类号
J905 [艺术—电影电视艺术]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
IL-6过表达慢病毒稳转细胞系构建及其对HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达影响
潘正兰
管世鹤
陈礼文
杨凯
张浩
段元丽
王兆飞
王秀
侯舒文
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2019
10
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职称材料
2
干扰素λ3在慢性乙型肝炎患者血清中的表达及临床意义
段元丽
管世鹤
杨凯
陈礼文
张浩
王秀
潘正兰
侯舒文
王兆飞
《临床肝胆病杂志》
CAS
北大核心
2019
5
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职称材料
3
《杜拉拉升职记》:现代职场的生存体验
侯舒文
《电影评介》
2010
0
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职称材料
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