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高含水后期油井重复压裂选井选层方法探讨 被引量:25
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作者 于凤林 刘敏 +1 位作者 侯继波 王有文 《大庆石油地质与开发》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期47-48,共2页
针对杏北地区重复压裂井比例较高、压裂潜力变小、选井选层难度越来越大的实际,通过对“九五”以来重复压裂井的分析,总结出适合杏北地区重复压裂井优化选井选层的原则和重复压裂井的压裂时机,在实践中应用后,取得了较好的效果。
关键词 油井 重复压裂 选井选层 压裂时机
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MDCK单细胞悬浮生长的驯化筛选及其在AIV增殖上的初步应用 被引量:11
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作者 冯磊 吴培培 +3 位作者 褚轩 王伟峰 陈丽 侯继波 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期913-920,共8页
采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的MDCK-Sus细胞株,对其生长代谢情况、细胞膜表面病毒受体丰度,以及在生物反应器中悬浮培养该细胞对禽流感H9亚型病毒增殖进行了初步应用研究。结果表明,MDCK-Sus细胞株可完全适应无... 采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的MDCK-Sus细胞株,对其生长代谢情况、细胞膜表面病毒受体丰度,以及在生物反应器中悬浮培养该细胞对禽流感H9亚型病毒增殖进行了初步应用研究。结果表明,MDCK-Sus细胞株可完全适应无血清营养条件并呈单细胞悬浮生长状态,细胞生长旺盛,平均比生长速率达到0.556 d-1,最大活细胞密度达到2.42×106cells·m L-1,并可检测出其细胞膜表面具有正常丰度的唾液酸-α-2,3-半乳糖糖链受体。在MOI为0.05,TPCK处理的胰蛋白酶作用浓度为1μg·m L-1的条件下,AIV-H9亚型病毒JS03株可在MDCK-Sus细胞中获得较好的增殖HA效价,达到8log2·25μL-1。 展开更多
关键词 MDCK细胞 禽流感病毒 单细胞悬浮培养 禽流感病毒受体
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免疫增强剂对猪伪狂犬灭活疫苗的免疫增强作用 被引量:5
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作者 耿文学 唐波 +3 位作者 华涛 侯继波 张道华 许家荣 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期1828-1833,共6页
为了评价免疫增强剂VA5对猪伪狂犬病毒灭活疫苗的免疫增强作用,将VA5与灭活疫苗混合并制成疫苗。通过常规Bartha-K61株灭活疫苗、含免疫增强剂灭活疫苗和Bartha-K61活疫苗3组免疫效力对比试验,首次免疫后14和35 d对猪进行采血,并且进行... 为了评价免疫增强剂VA5对猪伪狂犬病毒灭活疫苗的免疫增强作用,将VA5与灭活疫苗混合并制成疫苗。通过常规Bartha-K61株灭活疫苗、含免疫增强剂灭活疫苗和Bartha-K61活疫苗3组免疫效力对比试验,首次免疫后14和35 d对猪进行采血,并且进行中和实验以及对相关细胞因子进行检测。结果表明,该免疫增强剂能够显著地提高猪伪狂犬灭活疫苗血清中抗体产生,同时能显著提高猪外周血淋巴细胞(PBMC)中IL-2和IFN-γ mRNA表达。交叉中和试验表明,VA5能够显著地提高猪伪狂犬灭活疫苗对伪狂犬流行变异株的中和作用。试验表明,VA5能够显著提升猪伪狂犬病毒灭活疫苗体液与细胞免疫,为研制免疫效果更好的灭活疫苗提供了依据。 展开更多
关键词 免疫增强剂 伪狂犬病毒灭活疫苗 Bartha-K61株 免疫效力
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产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析 被引量:6
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作者 陈滔 唐应华 +5 位作者 陆吉虎 高峰 于漾 何家惠 黎满香 侯继波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期41-44,共4页
通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用... 通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性;但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性。 展开更多
关键词 产蛋下降综合征病毒 原核表达 Knob—S区
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一种新型火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建与鉴定 被引量:2
5
作者 王志胜 刘芳 +3 位作者 许梦微 乔永峰 侯继波 王继春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2071-2080,共10页
拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获... 拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获得BAC,拯救病毒获得mini-F重组病毒和gC恢复病毒后,与亲本病毒(HVT FC126)比较生长动力学和对鸡马立克病的免疫效力。结果:获得数个BAC阳性克隆,取其中一个克隆(BAC^(HVT-G))成功拯救出HVT mini-F重组病毒(HVT^(BAC-ΔgC)),并成功获得了gC恢复毒株(HVT^(BAC-gC-R))。生长特性和免疫效力试验表明HVT^(BAC-gC-R)与HVT FC126无显著差异,而HVT^(BAC-ΔgC)增殖能力和免疫效力均明显下降。成功构建了HVT全基因组的感染性BAC;HVT的gC基因是一个非必需基因,但对病毒的增殖能力和免疫效力有重要影响。 展开更多
关键词 火鸡疱疹病毒 细菌人工染色体 糖蛋白C 生长动力学 免疫效力
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一株猪源乙型脑炎病毒的分离及鉴定 被引量:2
6
作者 唐波 张道华 +5 位作者 张雪花 常晨 刘国阳 唐应华 华涛 侯继波 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第10期1698-1703,共6页
从江苏某发病猪场采集的母猪流产胎儿脑组织样本中成功分离到一株猪源乙型脑炎病毒(JEV)毒株,并对该毒株的相关生物学特性进行了鉴定。利用BHK-21细胞传代和脑内接种小鼠方法,对疑似阳性病料做病毒分离。通过RT-PCR,CPE和IFA等方法对JE... 从江苏某发病猪场采集的母猪流产胎儿脑组织样本中成功分离到一株猪源乙型脑炎病毒(JEV)毒株,并对该毒株的相关生物学特性进行了鉴定。利用BHK-21细胞传代和脑内接种小鼠方法,对疑似阳性病料做病毒分离。通过RT-PCR,CPE和IFA等方法对JEV分离株进行鉴定,并测定其TCID50。结果成功分离获得一株JEV毒株(JEV JS01株),该毒株能够在BHK-21细胞上增殖并产生细胞病变,TCID50为每1 m L107.0,免疫荧光检测可观察到JEV特异性荧光。RT-PCR扩增E基因并测序分析表明,与Gen Bank中登录的JEV毒株序列具有较高的同源性,属基因Ⅲ型。小鼠致病力试验表明该分离株对易感动物具有较高致病性。本研究为进一步开展乙脑病毒流行病学与疫苗免疫研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪源乙型脑炎病毒 分离鉴定 生物特性
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重组T7噬菌体生物学特性的研究 被引量:2
7
作者 王义伟 徐海 +2 位作者 陈瑾 郑其升 侯继波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第1期36-40,共5页
以大肠埃希菌BL21为宿主菌研究重组T7噬菌体生物学特性。将构建好的重组T7噬菌体扩增纯化,分析其对PH、温度及离子浓度的敏感性,并将重组噬菌体与宿主菌以不同比例混合测定最佳感染复数并绘制其一步生长曲线。结果表明,重组T7噬菌体... 以大肠埃希菌BL21为宿主菌研究重组T7噬菌体生物学特性。将构建好的重组T7噬菌体扩增纯化,分析其对PH、温度及离子浓度的敏感性,并将重组噬菌体与宿主菌以不同比例混合测定最佳感染复数并绘制其一步生长曲线。结果表明,重组T7噬菌体的热稳定性较弱,在60℃时20min效价明显下降,在70℃时5min内即会全部失活;PH4~11的范围内重组T7噬菌体均可稳定存在;培养基中Mg件浓度为10mmol/L及Ca2+浓度为5mmol/L时最有利于噬斑的形成,出斑率提高了约20%;重组噬菌体感染其宿主大肠埃希菌的最佳感染复数为10-5;其一步生长曲线的潜伏期约30min,裂解期约150min,裂解量为126pfu/cell。构建的重组T7噬菌体具有较强的裂解能力,潜伏期短,裂解量大,对理化因素稳定性好,为进一步大规模、高效率制造口蹄疫表位疫苗提供了理论基础。 展开更多
关键词 重组T7噬菌体 疫苗 生物学特性
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免疫增强剂提升猪用灭活疫苗免疫效力的研究 被引量:2
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作者 唐波 张道华 +5 位作者 唐应华 常晨 刘国阳 华涛 张雪花 侯继波 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第6期5-9,共5页
为评价免疫增强剂对猪细小-乙脑二联灭活疫苗的免疫效力提升作用,将免疫增强剂以伴侣形式与疫苗共同混合免疫5~6月龄阴性后备母猪和种公猪,检测其抗体水平。结果显示,免疫增强剂与疫苗混合免疫后1周抗体全部转阳,免疫后1~6月平均抗体效... 为评价免疫增强剂对猪细小-乙脑二联灭活疫苗的免疫效力提升作用,将免疫增强剂以伴侣形式与疫苗共同混合免疫5~6月龄阴性后备母猪和种公猪,检测其抗体水平。结果显示,免疫增强剂与疫苗混合免疫后1周抗体全部转阳,免疫后1~6月平均抗体效价均显著高于不含免疫增强剂的常规疫苗组,表明该免疫增强剂能够显著提升猪细小-乙脑二联灭活疫苗对后备母猪和种公猪的免疫效力。 展开更多
关键词 免疫增强剂 猪细小病毒 猪乙脑病毒 灭活疫苗 免疫效果
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一株江苏新型鸭肝炎病毒的鉴定 被引量:1
9
作者 邓碧华 王凯民 +4 位作者 卢宇 张金秋 吕芳 何家惠 侯继波 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1431-1436,共6页
对江苏地区分离到的1株疑似鸭肝炎病毒毒株(JS株)进行传代繁殖、雏鸭回归试验和理化性能测定,结果表明,该毒株能在鸭胚上进行传代繁殖,E1-E6代鸭胚毒的ELD50为104.38·0.2 m L^-1-106.17·0.2m L^-1;攻毒的雏鸭可产生与I型鸭... 对江苏地区分离到的1株疑似鸭肝炎病毒毒株(JS株)进行传代繁殖、雏鸭回归试验和理化性能测定,结果表明,该毒株能在鸭胚上进行传代繁殖,E1-E6代鸭胚毒的ELD50为104.38·0.2 m L^-1-106.17·0.2m L^-1;攻毒的雏鸭可产生与I型鸭肝炎病毒相同的症状和病变;3,7,14日龄易感雏鸭的LD50分别为105.5·0.2 m L^-1,105.17·0.2 m L^-1,103.83·0.2 m L^-1;病毒对氯仿、乙醚和胰酶不敏感,对酸(p H 3.0)稳定,对热不稳定。进一步进行交叉中和试验、交叉被动保护试验和VP1基因序列分析,结果显示,该毒株的抗原性与经典1型DHV差异显著;VP1序列与多株1型DHV的同源性在69.3%-93.3%;从进化关系来看,与韩国株的亲缘性最近。JS株属于我国流行的新型鸭肝炎病毒(命名为N-DHV-JS株)。 展开更多
关键词 新型鸭肝炎病毒 鸭甲型肝炎病毒 分离鉴定 反转录PCR
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牛磺酸对不同饲养方式蛋鸡肾脏功能、抗氧化能力和细胞因子水平的影响 被引量:4
10
作者 张金秋 马子力 +3 位作者 韩立秋 卢宇 苗晋锋 侯继波 《天津农学院学报》 CAS 2014年第1期9-14,共6页
选择生长发育正常的绿壳蛋鸡15 000只,随机分成笼养高密度组、笼养低密度组和散养组,每组又分为对照组和实验组,2 500只/组。对照组饲喂正常日粮,实验组饲喂添加0.1%的牛磺酸日粮。在实验期第90天,每组随机选取10只采集血液和肾脏,进行... 选择生长发育正常的绿壳蛋鸡15 000只,随机分成笼养高密度组、笼养低密度组和散养组,每组又分为对照组和实验组,2 500只/组。对照组饲喂正常日粮,实验组饲喂添加0.1%的牛磺酸日粮。在实验期第90天,每组随机选取10只采集血液和肾脏,进行肾脏形态和相关生化指标检测。结果显示:饲养方式和日粮中添加0.1%牛磺酸对血清中SCr和UA含量没有显著影响(P>0.05);笼养蛋鸡血清BUN含量无论在高密度组还是低密度组均显著高于散养组(P<0.05)。iNOs活性、TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10等和炎症免疫相关的细胞因子水平在各饲养模式及处理间均无显著差异。饲养方式对肾脏组织中MDA含量、SOD和T-AOC活性无显著影响。散养组肾脏T-AOC活性显著高于笼养高密度组(P<0.05);日粮中添加0.1%牛磺酸可以显著升高散养组和笼养高密度组肾脏T-AOC活性(P<0.05)。结果表明,散养、降低饲养密度和日粮中添加牛磺酸可以提高肾脏组织抗氧化水平,调控机体的代谢,改善饲养应激造成的肾脏组织损伤,进而提高蛋鸡的健康水平。 展开更多
关键词 牛磺酸 蛋鸡 饲养方式 肾脏
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不同源传染性法氏囊病病毒的分离及其生物学特性分析
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作者 王永山 周宗安 +6 位作者 刘玉 侯继波 何孔旺 丁铲 邓小昭 高健 刁振宇 《动物医学进展》 CSCD 2003年第4期84-86,共3页
用传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)单克隆抗体夹心抑制 EL ISA对麻雀、鸭、鹅进行了血清学调查 ,阳性率分别为 7.4% ( 4/ 54 )、95.5%( 3 6 3 / 3 80 )、9.4% ( 1 1 / 1 1 7)。从 IBD阳性麻雀、IBD病鸡以及同群饲养的鸭、鹅体内分离到了 4... 用传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)单克隆抗体夹心抑制 EL ISA对麻雀、鸭、鹅进行了血清学调查 ,阳性率分别为 7.4% ( 4/ 54 )、95.5%( 3 6 3 / 3 80 )、9.4% ( 1 1 / 1 1 7)。从 IBD阳性麻雀、IBD病鸡以及同群饲养的鸭、鹅体内分离到了 4株不同源病毒 ,IBDV单克隆抗体夹心 EL ISA、Dig-标记 IBDV c DNA探针斑点杂交和交叉中和试验证明该病毒均为 IBDV血清 型。病毒可适应并致死鸡胚 ,适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变效应 ( CPE)。病毒代谢抑制试验证明其基因组为 RNA,病毒对乙醚不敏感 ,p H2 .0不能灭活病毒 ,p H 1 2可使病毒失去感染性 ,56℃作用 3 h病毒仍有活性 ,70℃ 1 h可灭活病毒。以上结果表明 ,从鸡、麻雀、鸭、鹅体内分离到的 IBDV生物学性质比较稳定且非常相似。本研究结果提示 IBDV已在我国广泛流行 ,麻雀、鸭、鹅可成为 IBDV携带者或传染源 ,在 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 病毒分离 生物学特性 IBDV单克隆抗体 禽病 细胞病变效应 病毒代谢抑制
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经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析
12
作者 李兰 乔绪稳 +3 位作者 张元鹏 陈瑾 郑其升 侯继波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2358-2364,共7页
利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;... 利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;纯化目的蛋白质后,进一步评价其体外抗病毒活性。Western blot结果显示以7.5MOI接种量感染的sf9细胞在96h时获得了较高的表达,同时获得的重组猪Ficolinα具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性。猪Ficolinα在sf9昆虫细胞中获得成功表达,且具有良好的抗PRRSV活性。本研究可以为猪Ficolinα的抗病毒活性及作用机制研究提供物质基础。 展开更多
关键词 猪Ficolin 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 抗病毒作用
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单域抗体T7噬菌体展示文库构建与鉴定 被引量:2
13
作者 徐海 王健 +3 位作者 郭长明 董洪燕 邓碧华 侯继波 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期27-33,共7页
优化噬菌体展示文库构建策略,获得高品质羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库,并对文库质量进行鉴定。分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)基因,插入T7 select 415-1b噬菌体载体构建文库,计算文库的库... 优化噬菌体展示文库构建策略,获得高品质羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库,并对文库质量进行鉴定。分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)基因,插入T7 select 415-1b噬菌体载体构建文库,计算文库的库容量,测定文库传代稳定性。测序分析VHH基因的多样性和纳米抗体氨基酸序列特征。Western-blot检测纳米抗体在噬菌体表面的表达情况,电镜观察文库中重组噬菌体颗粒形态。结果表明,构建羊驼源纳米抗体T7噬菌体展示文库,有效库容达到2.73×109 PFU;纳米抗体与羊驼源抗体同源性高,氨基酸序列显示纳米抗体特征区域,并其在噬菌体表面高拷贝表达;重组噬菌体颗粒结构完整,但随着传代出现插入基因的丢失。 展开更多
关键词 羊驼 纳米抗体 T7噬菌体 表面展示
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国家农业工程技术研究中心知识型员工薪酬激励研究
14
作者 马鹤毓 王丰 侯继波 《中国农业教育》 2015年第6期52-56,63,共6页
农业工程中心按依托单位类型划分为以事业单位为依托单位的农业工程中心、以企业为依托单位的农业工程中心。从物质薪酬和非物质薪酬方面阐述了薪酬激励的现状和问题:物质薪酬激励功能弱化,形成新的大平均主义;非物质薪酬激励极度弱化... 农业工程中心按依托单位类型划分为以事业单位为依托单位的农业工程中心、以企业为依托单位的农业工程中心。从物质薪酬和非物质薪酬方面阐述了薪酬激励的现状和问题:物质薪酬激励功能弱化,形成新的大平均主义;非物质薪酬激励极度弱化。基于国内某农业工程中心的实践,提出推进农业工程中心政策层面建设,加快完善物质薪酬体系建设,积极推进非物质薪酬创新等措施。 展开更多
关键词 农业工程中心 知识型员工 薪酬激励
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鸡传染性法氏囊病分子流行病学研究
15
作者 白文霞 鲍恩东 +1 位作者 侯继波 何孔旺 《动物科学与动物医学》 2004年第8期51-53,共3页
15个江苏省IBDV分离株,对其VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序,得到约560bp长的片段。分析比较15个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区(AccI-SpeI)推断的氨基酸序列,构建进化树。氨基酸序列分析以及进化树分析表明,15个IBDV分离株是超强毒株... 15个江苏省IBDV分离株,对其VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序,得到约560bp长的片段。分析比较15个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区(AccI-SpeI)推断的氨基酸序列,构建进化树。氨基酸序列分析以及进化树分析表明,15个IBDV分离株是超强毒株。而且目前vvIBDVs在亚洲各个国家流行,且与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 VP2高变区 超强毒株 变异毒株 古典毒株 致弱毒株
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抗小鹅瘟卵黄抗体脱脂方法研究 被引量:1
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作者 邓碧华 丁丽军 +2 位作者 张笑意 何家惠 侯继波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第1期38-40,共3页
通过对产蛋母鸡免疫接种小鹅瘟JS1株油乳剂灭活苗,从而获得含高效价小鹅瘟病毒抗体的鸡蛋。采用聚乙二醇6000和泊洛沙姆进行脱脂试验,并优化脱脂条件。结果表明,聚乙二醇6000和泊洛沙姆对鸡卵黄具有良好的脱脂作用,其中聚乙二醇6000价... 通过对产蛋母鸡免疫接种小鹅瘟JS1株油乳剂灭活苗,从而获得含高效价小鹅瘟病毒抗体的鸡蛋。采用聚乙二醇6000和泊洛沙姆进行脱脂试验,并优化脱脂条件。结果表明,聚乙二醇6000和泊洛沙姆对鸡卵黄具有良好的脱脂作用,其中聚乙二醇6000价格低廉,更适合大规模工业化生产。 展开更多
关键词 卵黄抗体 泊洛沙姆F68 聚乙二醇6000 脱脂
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