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利用CRISPR/Cas9技术创制大豆高油酸突变系 被引量:13
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作者 侯智红 吴艳 +5 位作者 程群 董利东 芦思佳 南海洋 甘卓然 刘宝辉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期839-847,共9页
大豆是重要的油料作物,其种子脂肪酸中油酸含量是评价大豆油脂品质的重要指标之一。本研究设计了分别由AtU3d、AtU3b和AtU6-1启动子驱动、长20 bp的guide RNA(gRNA)靶点以靶向编辑GmFAD2-1A基因的外显子区,首先将这3个靶点一起组装到pYL... 大豆是重要的油料作物,其种子脂肪酸中油酸含量是评价大豆油脂品质的重要指标之一。本研究设计了分别由AtU3d、AtU3b和AtU6-1启动子驱动、长20 bp的guide RNA(gRNA)靶点以靶向编辑GmFAD2-1A基因的外显子区,首先将这3个靶点一起组装到pYLCRISPR/Cas9-DB载体上,然后利用农杆菌介导的方法转化大豆材料华夏3号。通过PCR技术及测序分析对T1代转基因大豆植株靶点编辑情况进行检测,获得纯合GmFAD2-1A大豆突变体。GmFAD2-1A突变大豆植株在株高、主茎节数、单枝分枝数、叶形、花色、种皮色、种脐色、生育期等方面与对照大豆植株没有显著差异;而GmFAD2-1A突变体大豆种子油酸含量显著高于对照大豆品种华夏3号,说明GmFAD2-1A是油酸代谢过程中的关键基因。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功对控制大豆油酸基因GmFAD2-1A进行编辑,获得稳定的纯合GmFAD2-1A大豆突变体材料,为高油酸育种提供了新的种质资源并创建了方法。 展开更多
关键词 大豆 脂肪酸 油酸 GmFAD2-1A CRISPR/Cas9
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大豆生物钟基因GmLNK1/2、GmRVE4/8和GmTOC1 CRISPR/Cas9组织表达分析及敲除靶点的鉴定 被引量:6
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作者 甘卓然 石文茜 +6 位作者 黎永力 侯智红 李海洋 程群 董利东 刘宝辉 芦思佳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1291-1300,共10页
生物钟基因能够参与调控植物的整个生命进程,对提高作物产量具有重要的作用。LNK1(NIGHTLIGHTINDUCIBLE AND CLOCK-REGULATED 1)、LNK2、RVE4(REVEILLE 4)、RVE8(REVEILLE 8)和TOC1(TIMING OF CAB EXPRESSION1)是植物中重要的生物钟基... 生物钟基因能够参与调控植物的整个生命进程,对提高作物产量具有重要的作用。LNK1(NIGHTLIGHTINDUCIBLE AND CLOCK-REGULATED 1)、LNK2、RVE4(REVEILLE 4)、RVE8(REVEILLE 8)和TOC1(TIMING OF CAB EXPRESSION1)是植物中重要的生物钟基因。本研究利用BLAST同源比对和进化树分析的方法分别鉴定AtLNK1、AtLNK2、AtRVE4、AtRVE8和AtTOC1在大豆中的同源基因,通过qRT-PCR实验证明这些生物钟基因在大豆根、茎、叶等组织中均有表达。成功构建这些基因的CRISPR/Cas9敲除载体,并利用大豆根毛转化体系成功鉴定出13个基因的CRISPR/CAS9有效靶点。为进一步获得稳定的大豆突变体材料及研究其生物钟基因的功能提供了理论基础。 展开更多
关键词 大豆 基因敲除 生物钟基因 CRISPR/Cas9
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SPL转录因子的研究进展 被引量:12
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作者 吴艳 侯智红 +5 位作者 程群 董利东 芦思佳 南海洋 甘卓然 刘宝辉 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期304-310,共7页
SPL(squamosa promoter-binding protein like)基因家族是植物特有的一类转录因子,主要通过结合下游基因启动子区的顺式作用元件GTAC基序,从而参与调控下游基因的表达。SPLs转录因子在植物的生长发育、信号传导、应答环境胁迫等方面有... SPL(squamosa promoter-binding protein like)基因家族是植物特有的一类转录因子,主要通过结合下游基因启动子区的顺式作用元件GTAC基序,从而参与调控下游基因的表达。SPLs转录因子在植物的生长发育、信号传导、应答环境胁迫等方面有着重要的作用。目前研究表明,大豆SPL转录因子在参与调控大豆植株分枝数,产量和生育期等方面扮演重要作用。文章首先从该家族转录因子的克隆入手,回顾该基因家族的由来历史,然后介绍其结构上的保守性和独特性,最后重点综述SPL转录因子在植物中的调控网络,及其生物学功能,并对其在大豆及其它农作物生产上的应用前景及其调控植物性状的具体机制进行展望。 展开更多
关键词 SPL 转录因子 生物学功能 大豆
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大豆BBX32基因生物信息学分析及基因编辑靶点设计 被引量:2
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作者 李泰 杜浩 +5 位作者 黎永力 程玉汉 南海洋 侯智红 程群 刘宝辉 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期602-611,共10页
BBX32基因是一种含锌指结构的转录因子,广泛的参与植物生长和发育过程,但在大豆中,BBX32基因的具体生物学功能还尚未被解析。为研究大豆BBX32基因在大豆中的分子机理和生物学功能,本研究通过同源比对分析发现,大豆中含有两个与拟南芥BB... BBX32基因是一种含锌指结构的转录因子,广泛的参与植物生长和发育过程,但在大豆中,BBX32基因的具体生物学功能还尚未被解析。为研究大豆BBX32基因在大豆中的分子机理和生物学功能,本研究通过同源比对分析发现,大豆中含有两个与拟南芥BBX32同源的基因,分别命名为GmBBX32a和GmBBX32b。同时,通过检索RNA-seq数据库,对GmBBX32a和GmBBX32b在大豆中不同组织的表达部位进行分析,结果发现GmBBX32a在花、叶和豆荚中具有较高的表达量,而GmBBX32b在豆荚和花中具有较高的表达量,说明GmBBX32a和GmBBX32b可能参与大豆的开花和籽粒大小形成。此外,利用CRISPR/Cas9技术,构建GmBBX32a和GmBBX32b基因的敲除载体,并转化到大豆毛根中进行靶点检测,最终获得了有编辑效率的基因编辑载体,为接下来获得稳定转基因材料提供有效编辑靶点信息。 展开更多
关键词 大豆 BBX32基因 生物信息学分析 CRISPR/Cas9技术 编辑靶点
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大豆FUL基因家族进化规律分析及基因编辑靶点鉴定 被引量:2
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作者 黎永力 杜浩 +5 位作者 李泰 甘卓然 侯智红 董利东 刘宝辉 程群 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1120-1132,共13页
栽培大豆起源于我国黄淮海地区,我国具有悠久的大豆种植历史和丰富的大豆遗传资源。然而,近年来我国大豆进口依赖度极高,严重威胁到我国的粮食安全,因此培育高产优质的大豆品种至关重要。株高、籽粒大小等是影响大豆产量的重要农艺性状... 栽培大豆起源于我国黄淮海地区,我国具有悠久的大豆种植历史和丰富的大豆遗传资源。然而,近年来我国大豆进口依赖度极高,严重威胁到我国的粮食安全,因此培育高产优质的大豆品种至关重要。株高、籽粒大小等是影响大豆产量的重要农艺性状,因此,挖掘调控这些农艺性状的基因,并解析其分子机制具有重要意义。FRUITFULL(FUL)基因属于MADS-box类转录因子,在植物的开花、生长发育、果实成熟等方面起着重要的作用。本研究通过生物信息学分析发现,在大豆中含有6个FUL基因,它们均具有1个保守的MADS-box和1个较为保守的K-box结构域,并主要在豆荚中表达,说明该基因家族可能调控大豆种子相关性状。其中,只有GmFUL3b基因在叶片中高度表达,说明该基因在进化过程中功能可能产生了分化。此外,还发现6个FUL基因之间的进化规律不同。为进一步确定其生物学功能,利用CRISPR/Cas9技术,分别构建6个FUL基因的敲除突变体载体,转化大豆毛根进行靶点验证,并成功鉴定出其中5个基因的有效靶点,为进一步获得稳定的大豆突变体材料及解析GmFULs家族基因的功能提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 大豆 FUL基因 生物信息学分析 CRISPR/Cas9技术
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大豆GmSPL3基因家族功能初探 被引量:4
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作者 吴艳 侯智红 +5 位作者 程群 董利东 芦思佳 南海洋 甘卓然 林永波 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期694-703,共10页
为研究大豆中拟南芥(Arabidopsis thaliana)重要开花调控AtSPL3同源基因的作用,本研究利用生物信息学方法分析大豆的RNA-seq基因表达谱数据,对绥农14根、茎、子叶、初生叶、三出复叶、花、生长点、荚、胚和下胚轴10个组织进行GmSPL3基... 为研究大豆中拟南芥(Arabidopsis thaliana)重要开花调控AtSPL3同源基因的作用,本研究利用生物信息学方法分析大豆的RNA-seq基因表达谱数据,对绥农14根、茎、子叶、初生叶、三出复叶、花、生长点、荚、胚和下胚轴10个组织进行GmSPL3基因的组织特异性表达分析,并利用CRSPR/Cas9的方法构建大豆GmSPL3基因的四突变体并对比其表型。结果显示:GmSPL3基因在大豆的根、子叶、花和种子中有着明显的表达差异;GmSPL3a在各组织中的表达量都非常低,而GmSPL3(b,c,d)在不同组织中存在明显的组织特异性表达;在GmSPL3基因敲除突变体中研究发现,短日照条件下,spl3abcd突变体表现出叶片变小、节数减少、节间距缩短、株高降低的表型,表明GmSPL3在调控大豆植株形态方面发挥重要功能。 展开更多
关键词 大豆 SPL 表达谱 组织特异性表达分析 CRISPR/Cas9 株高
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利用Ln位点进行分子设计提高大豆单荚粒数
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作者 杜浩 程玉汉 +6 位作者 李泰 侯智红 黎永力 南海洋 董利东 刘宝辉 程群 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期565-571,共7页
分子设计育种是将分子遗传学与传统育种相结合,并培育成具有优良性状的新品种的重要方法之一,尽管该方法很大程度上能够缩短育种进程,但在实际育种过程中却应用较少。在大豆的育种过程中,提高产量是主要的育种目标之一,其中,每荚粒数是... 分子设计育种是将分子遗传学与传统育种相结合,并培育成具有优良性状的新品种的重要方法之一,尽管该方法很大程度上能够缩短育种进程,但在实际育种过程中却应用较少。在大豆的育种过程中,提高产量是主要的育种目标之一,其中,每荚粒数是决定大豆单株产量的关键性状之一。在大豆中,每荚粒数与叶片形状呈正相关,由一对等位基因Ln/ln控制,宽叶的大豆品种一般为Ln,窄叶的大豆品种一般为突变型ln,且ln伴随着更多的四粒荚。尽管Ln对于大豆单产的提高,具有潜在的重要作用,但将该位点应用于分子设计育种中,报道较少。本研究通过分析483份来自不同纬度大豆品种的Ln基因型发现,高纬度地区大豆品种一般为ln,而低纬度地区大豆品种一般为Ln。通过调查来自不同纬度的8个大豆品种的叶型和一粒荚至四粒荚个数发现,低纬度大豆品种均为圆叶品种,且几乎没有四粒荚。为将ln应用于低纬度地区大豆育种中,成功开发了Ln的分子标记,并通过连续回交的方法,将ln代换到圆叶型品种Willams 82和华夏3号中,获得了四粒荚较多的大豆新材料。本研究利用大豆分子设计育种的手段,提高了大豆单株产量,为加快大豆高产育种进程提供了重要的理论及实践基础。 展开更多
关键词 大豆 LN 产量 单荚粒数 分子设计
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