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嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响
被引量：
1
1
作者
曾静
何础阔
+3 位作者
郭建军
侯安伟
聂俊辉
袁林
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第22期113-120,共8页
对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响。TK-PUL保守基序Ⅱ中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性...
对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响。TK-PUL保守基序Ⅱ中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度、热稳定性,但使其α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性均明显降低。动力学常数测定结果显示,突变体I500W以麦芽三糖为底物的k_(cat)/K_(m)值基本不变,以异潘糖为底物的k_(cat)/K_(m)值约为TK-PUL的64.78%。结果表明,TK-PUL保守基序II中第500位氨基酸残基Ile对其水解糖苷键的偏好性起到重要作用。TK-PUL中I500W位点变化不影响其α-1,4-糖苷键水解活性,但使其α-1,6-糖苷键水解活性明显降低。本研究有助于深入理解TK-PUL的双功能催化机制,也可为TK-PUL的分子改造提供理论依据和设计思路。
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关键词
Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶
保守基序
定点突变
催化活性
同源模建
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职称材料
题名
嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响
被引量：
1
1
作者
曾静
何础阔
郭建军
侯安伟
聂俊辉
袁林
机构
江西省科学院微生物研究所
海南大学食品科学与工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第22期113-120,共8页
基金
国家自然科学基金地区科学基金项目(32160579)
江西省杰出青年科学基金项目(20202ACBL215001)
江西省主要学科学术和技术带头人培养计划项目(20212BCJ23033)。
文摘
对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响。TK-PUL保守基序Ⅱ中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度、热稳定性,但使其α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性均明显降低。动力学常数测定结果显示,突变体I500W以麦芽三糖为底物的k_(cat)/K_(m)值基本不变,以异潘糖为底物的k_(cat)/K_(m)值约为TK-PUL的64.78%。结果表明,TK-PUL保守基序II中第500位氨基酸残基Ile对其水解糖苷键的偏好性起到重要作用。TK-PUL中I500W位点变化不影响其α-1,4-糖苷键水解活性,但使其α-1,6-糖苷键水解活性明显降低。本研究有助于深入理解TK-PUL的双功能催化机制,也可为TK-PUL的分子改造提供理论依据和设计思路。
关键词
Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶
保守基序
定点突变
催化活性
同源模建
Keywords
type Ⅲ pullulan hydrolase
conserved regions
site-directed mutagenesis
catalytic activity
homology modelling
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响
曾静
何础阔
郭建军
侯安伟
聂俊辉
袁林
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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