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人源抗菌肽LL-37真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
徐洪龙
贡继尚
+6 位作者
高珊
侯书宝
张全伟
胡俊杰
马友记
张勇
赵兴绪
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期1-6,12,共7页
【目的】使人源抗菌肽LL-37在真核表达载体中获得高效表达.【方法】采用RT-PCR技术,从人的血样中扩增出LL-37基因片段,并将其连接至pcDNA3.1-His-V5(+)载体.通过脂质体介导法将重组质粒转入奶牛乳腺上皮细胞,G418筛选获得稳定阳性细胞株...
【目的】使人源抗菌肽LL-37在真核表达载体中获得高效表达.【方法】采用RT-PCR技术,从人的血样中扩增出LL-37基因片段,并将其连接至pcDNA3.1-His-V5(+)载体.通过脂质体介导法将重组质粒转入奶牛乳腺上皮细胞,G418筛选获得稳定阳性细胞株,并且利用RT-PCR和Western-blot检测目的基因在转录及翻译水平的表达情况.【结果】RT-PCR结果显示,经转染的乳腺上皮细胞能够扩增出523bp的LL-37基因.qRT-PCR结果发现,LL-37mRNA在转染后的不同时期均有表达,经稳定转染的表达量最高.通过Western-blot检测,获得了约17kU的目的蛋白.【结论】结果表明,LL-37基因成功整合至奶牛乳腺上皮细胞并能够正确表达,这为构建分泌LL-37蛋白的奶牛乳腺生物反应器提供了依据.
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关键词
抗菌肽
LL-37
真核表达载体
转染
QRT-PCR
WESTERN-BLOT
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职称材料
题名
人源抗菌肽LL-37真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
徐洪龙
贡继尚
高珊
侯书宝
张全伟
胡俊杰
马友记
张勇
赵兴绪
机构
甘肃农业大学生命科学技术学院
甘肃农业大学动物医学院
甘肃农业大学动物科学技术学院
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期1-6,12,共7页
基金
甘肃省科技重大专项计划项目(1102NKDA022)
文摘
【目的】使人源抗菌肽LL-37在真核表达载体中获得高效表达.【方法】采用RT-PCR技术,从人的血样中扩增出LL-37基因片段,并将其连接至pcDNA3.1-His-V5(+)载体.通过脂质体介导法将重组质粒转入奶牛乳腺上皮细胞,G418筛选获得稳定阳性细胞株,并且利用RT-PCR和Western-blot检测目的基因在转录及翻译水平的表达情况.【结果】RT-PCR结果显示,经转染的乳腺上皮细胞能够扩增出523bp的LL-37基因.qRT-PCR结果发现,LL-37mRNA在转染后的不同时期均有表达,经稳定转染的表达量最高.通过Western-blot检测,获得了约17kU的目的蛋白.【结论】结果表明,LL-37基因成功整合至奶牛乳腺上皮细胞并能够正确表达,这为构建分泌LL-37蛋白的奶牛乳腺生物反应器提供了依据.
关键词
抗菌肽
LL-37
真核表达载体
转染
QRT-PCR
WESTERN-BLOT
Keywords
antimicrobial peptide
LL-37
eukaryotic expression vector
transfection
qRT-PCR
West-ern-Gblot
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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出处
发文年
被引量
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1
人源抗菌肽LL-37真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
徐洪龙
贡继尚
高珊
侯书宝
张全伟
胡俊杰
马友记
张勇
赵兴绪
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
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