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题名MARCH9介导磷酸酶RPTPα的泛素化降解
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作者
张宇琴
依力夏提·艾合买提
王艳丽
阳志
黄建
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机构
上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系
上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科
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出处
《上海交通大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第8期957-968,共12页
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基金
国家自然科学基金(82073043,82200961)。
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文摘
目的·探讨E3泛素连接酶膜相关锌指蛋白9(membrane-associated RING-CH 9,MARCH9)调控受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶α(receptor protein tyrosine phosphatase alpha,RPTPα)泛素化修饰的分子机制及其生物学功能。方法·采用Western blotting鉴定RPTPα的泛素化修饰类型及MARCH9对其泛素化水平的调控作用;比较MARCH9野生型、MARCH9酶活突变体(MARCH9 S198A或MARCH9-HC/CC),以及shRNA介导的内源MARCH9敲低对RPTPα蛋白稳定性的影响;利用蛋白酶体抑制剂MG132、自噬抑制剂3-MA和溶酶体抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)鉴定MARCH9介导的RPTPα泛素化降解类型;探究43℃热激促进RPTPα蛋白降解的可能机制;利用慢病毒载体构建MARCH9单敲低(H1299-sh MARCH9)及MARCH9/RPTPα双敲低(H1299-sh MARCH9-sh RPTPα)的肺癌稳转细胞株,通过CCK-8细胞增殖、平板克隆形成和软琼脂克隆形成实验,评估MARCH9或RPTPα对肺癌细胞增殖与集落形成能力的影响;通过血管拟态形成实验和划痕实验检测MARCH9或RPTPα对肺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;建立裸鼠皮下移植瘤模型评价MARCH9或RPTPα对肺癌细胞体内成瘤能力的影响;通过生物信息学方法比较MARCH9和RPTPα在肺癌患者中的表达差异与预后相关性。结果·RPTPα主要发生K63连接型多聚泛素化修饰,E3泛素连接酶MARCH9过表达显著增强其泛素化水平;过表达野生型MARCH9而非酶活突变体能显著降低RPTPα蛋白稳定性,而shRNA敲低内源MARCH9后RPTPα蛋白水平又会明显上升;CQ而非MG132或3-MA处理能增加RPTPα蛋白稳定性,提示MARCH9主要介导RPTPα的泛素化-溶酶体降解途径;43℃热激可以特异增强MARCH9-RPTPα相互作用并促进RPTPα蛋白降解。功能实验显示:与对照H1299细胞相比,H1299-sh MARCH9细胞的RPTPα蛋白水平升高,细胞增殖速率加快,克隆形成和细胞侵袭能力均明显增强,裸鼠中成瘤能力也明显增强,而双敲低MARCH9/RPTPα的稳转细胞株又能逆转上述表型(均P<0.05)。生物信息学分析肺癌患者相关数据,显示RPTPα高表达与肺癌患者不良预后及肿瘤转移呈正相关,而MARCH9则为负相关。结论·MARCH9介导了磷酸酶RPTPα的K63型泛素化依赖的溶酶体降解过程。这一发现为开发靶向RPTPα的肿瘤治疗策略提供了新的依据。
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关键词
蛋白质酪氨酸磷酸酶RPTPα
E3泛素连接酶MARCH9
泛素化
热激
肺癌
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Keywords
protein tyrosine phosphatase RPTPα
E3 ubiquitin ligase MARCH9
ubiquitination
heat shock
lung cancer
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分类号
R734.2
[医药卫生—肿瘤]
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