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鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选 被引量：2
1
作者 戴国俊 孙大辉 +7 位作者 林雨鑫 孙明明 王翔 王金玉 张跟喜 谢恺舟 施会强 侍苗苗 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1330-1336,共7页
本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体... 本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体Pex-6上。设计针对zyxin的shRNA序列,应用基因重组技术插入到Lv3慢病毒表达载体中,将lv3-shRNA载体与包装质粒pGag/Pol、pRev、Pvsv-G共转染293T细胞,进行病毒包装。将得到的病毒原液10倍稀释6个梯度,分别转染293T细胞,进行滴度的测定。将构建好的4条慢病毒载体与Pex-6-zyxin真核表达载体共转染293T细胞,运用RT-PCR和Western-blot方法进行有效干扰靶点的筛选。构建4条针对目的基因zyxin的RNAi慢病毒穿梭质粒表达载体CO1、CO2、CO3、CO4和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×108 TU·mL-1,适合感染目的细胞,经过筛选,CO3对zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳。成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体,并进行了有效干扰靶点的筛选,为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 zyxin基因 RNAI 慢病毒干扰载体 真核表达载体 鸡
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京海黄鸡斑联蛋白基因外显子9 SNP位点及其与屠宰性能的相关性研究 被引量：3
2
作者 戴国俊 孙大辉 +6 位作者 王翔 孙明明 张跟喜 谢恺舟 施会强 侍苗苗 王金玉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期113-116,共4页
以京海黄鸡为试验材料,采用PCR-SSCP技术检测斑联蛋白(zyxin)基因外显子9的SNP,探讨zyxin基因该位点多态性与京海黄鸡屠宰性状之间的关系。结果发现该位点存在1个SNP突变位点,表现为3种基因型:AA、AB和BB。统计分析表明,公鸡的胸肌重AA... 以京海黄鸡为试验材料,采用PCR-SSCP技术检测斑联蛋白(zyxin)基因外显子9的SNP,探讨zyxin基因该位点多态性与京海黄鸡屠宰性状之间的关系。结果发现该位点存在1个SNP突变位点,表现为3种基因型:AA、AB和BB。统计分析表明,公鸡的胸肌重AA基因型显著高于AB基因型(P<0.05),活体重和屠体重AA基因型显著高于BB基因型(P<0.05);母鸡的活体重、头重、爪重和屠体重AA基因型显著高于BB基因型(P<0.05),全净膛重AA基因型显著高于AB基因型(P<0.05)。 展开更多
关键词 zyxin基因 SNP 屠宰性状 京海黄鸡
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纳米硒对低氧胁迫下中华绒螯蟹免疫保护和抗氧化能力的影响 被引量：3
3
作者 贾慧凝 侍苗苗 +4 位作者 卞永乐 侍崇敬 刘恒蔚 宋学宏 秦粉菊 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期100-109,共10页
低氧胁迫会减弱中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的免疫机能和抗氧化能力。为揭示纳米硒(nano-Se)对低氧胁迫下中华绒螯蟹的免疫保护作用及抗氧化调控机制,在基础饲料中添加不同水平(0、0.1、0.2、0.4、0.8和1.6 mg·kg^(−1))的纳米... 低氧胁迫会减弱中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的免疫机能和抗氧化能力。为揭示纳米硒(nano-Se)对低氧胁迫下中华绒螯蟹的免疫保护作用及抗氧化调控机制,在基础饲料中添加不同水平(0、0.1、0.2、0.4、0.8和1.6 mg·kg^(−1))的纳米硒饲喂中华绒螯蟹90 d。饲喂实验结束后,进行低氧胁迫实验并注射嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。结果表明:1)低氧胁迫24 h和低氧胁迫下感染嗜水气单胞菌24 h的蟹死亡率分别可达62.45%和100%,低氧胁迫12 h使血淋巴中血蓝蛋白浓度、血细胞数量、组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),胁迫至第24小时有下降趋势;乳酸(LD)和丙二醛(MDA)浓度在低氧胁迫12~24 h持续上升。2)饲料中添加适量(0.1~0.4 mg·kg^(−1))纳米硒可显著降低低氧胁迫下蟹死亡率和低氧胁迫下嗜水气单胞菌的致死率(P<0.05),显著提高低氧胁迫下血蓝蛋白浓度和血细胞数量以及抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性,降低LD和MDA浓度(P<0.05);添加0.8~1.6 mg·kg^(−1)纳米硒加剧了低氧胁迫损伤。结果表明饲料中添加适量纳米硒可改善低氧胁迫下中华绒螯蟹的免疫功能和抗氧化能力,且添加水平以0.2 mg·kg^(−1)为宜。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 纳米硒 低氧胁迫 免疫 抗氧化
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