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胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 1; 作者伍妙梨袁文 +5 位作者饶丹王静朱余军尹雪琴黄韧郭鹏举《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期59-63,共5页; 目的建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌（Helicobacter bilis,H.bilis）Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品p MD-HBP17。通过... 展开更多; 关键词胆汁螺杆菌(H.bilis) 荧光定量PCR(q PCR) TAQ Man探针; 在线阅读下载PDF 职称材料

Ⅰ群禽腺病毒液相基因芯片检测方法的建立被引量：7: 2; 作者朱余军饶丹 +12 位作者丛锋伍妙梨袁文王静练月晓黄碧洪徐凤娇刘助红尹雪琴黄韧张钰陈梅丽郭鹏举《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期50-52,共3页; 为了建立一种快速、特异、灵敏的检测I群禽腺病毒的液相基因芯片方法。根据Hexon基因序列设计特异引物,上游引物5'端加TAG序列,下游引物5'端加生物素,进行PCR扩增,将扩增产物与链霉素亲和蛋白、磁珠37℃孵育30 min,通过Luminex... 展开更多; 关键词 Ⅰ群禽腺病毒(AAV) Hexon基因液相基因芯片; 在线阅读下载PDF 职称材料

实时荧光定量TaqMan-PCR检测小鼠多瘤病毒方法的建立被引量：2: 3; 作者尹雪琴袁文 +8 位作者王静黄碧洪饶丹伍妙梨朱余军冯胜鹏郭鹏举张钰黄韧《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期53-58,共6页; 目的建立一种快速、特异、敏感的小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus,MPyV)荧光定量TaqMan PCR检测方法,用于MPyV核酸的检测。方法根据GenBank中小鼠多瘤病毒基因组序列设计了一对特异性引物及TaqMan探针,扩增长度为69 bp的片段,通过优... 展开更多; 关键词小鼠多瘤病毒实时荧光定量PCR TAQMAN探针; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于重组酶聚合酶扩增技术的犬冠状病毒快速检测方法的建立被引量：2: 4; 作者陈坚张丹琳 +1 位作者马磊伍妙梨《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期88-90,94,共4页; 为建立一种快速、简便检测犬冠状病毒(CCoV)的方法,本试验基于犬冠状病毒M基因的保守区域设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了CCoV的重组酶聚合酶扩增检测方法(RT-RPA)。试验结果表明,所建立的RT-RPA方法在35℃恒温反应15 min即可... 展开更多; 关键词犬冠状病毒 RT-RPA 快速检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析: 5; 作者艾德宙韩艳辉 +7 位作者洪炀熊雅念魏梅梅孟培培黄莉妮伍妙梨林矫矫傅志强《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第2期32-36,共5页; 为解析日本血吸虫精氨酸酶的功能,本研究克隆了SjARG基因、长度为1095 bp,并将该基因克隆一到原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET-28a-SjARG,并在大肠杆菌中成功表达,Western blot显示重组蛋白具有良好的抗原性;通过酶活性分析显示,... 展开更多; 关键词日本血吸虫精氨酸酶克隆和表达酶活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽脑脊髓炎病毒Luminex xTAG检测方法的建立被引量：1: 6; 作者张孟迪朱海波 +5 位作者朱余军伍妙梨练月晓黄碧洪葛叶丛锋《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第10期54-58,共5页; 为了建立一种灵敏快速检测禽脑脊髓炎病毒(AEV)的Luminex xTAG技术方法,本试验针对AEV高度保守的VP 1基因设计了1对特异性引物,在上游引物的5′端通过Spacer18间隔添加Tag序列,下游引物的5′端标记生物素,进行反转录-聚合酶链式反应(RT-... 展开更多; 关键词禽脑脊髓炎病毒(AEV) Luminex xTAG 检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 1; 作者伍妙梨袁文饶丹王静朱余军尹雪琴黄韧郭鹏举; 机构广东省实验动物监测所; 出处《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期59-63,共5页; 基金国家科技支撑计划(2013BAK11B01); 文摘目的建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌（Helicobacter bilis,H.bilis）Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品p MD-HBP17。通过对p MD-HBP17标准品的定量分析,优化反应体系,检测Taq Man探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性及重复性;用所建立的q PCR方法检测77份临床样品,并与普通PCR的检测结果作比对。结果所建立的q PCR检测方法,质粒DNA浓度在10^8-10^1拷贝之间表现出较好的线性和相关性,所得标准曲线的斜率为-3.46,相关系数为0.999,检测灵敏度达到20个拷贝,对77份临床样品的检出率为14.3%,较普通PCR（7.8%）的检出率高。结论建立的H.bilis q PCR检测方法特异性好、敏感性高、稳定性强,可用于胆汁螺杆菌的定量及定性检测。; 关键词胆汁螺杆菌(H.bilis) 荧光定量PCR(q PCR) TAQ Man探针; Keywords Helicobacter bilis QPCR Taq Man probe; 分类号 R-332 [医药卫生]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Ⅰ群禽腺病毒液相基因芯片检测方法的建立被引量：7: 2; 作者朱余军饶丹丛锋伍妙梨袁文王静练月晓黄碧洪徐凤娇刘助红尹雪琴黄韧张钰陈梅丽郭鹏举; 机构广东省实验动物监测所广东省实验动物重点实验室; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期50-52,共3页; 基金广东省科技计划项目(2016A040403065) 广东省科技计划项目(2015B070701003) 国家科技支撑计划(2015BAI07B00); 文摘为了建立一种快速、特异、灵敏的检测I群禽腺病毒的液相基因芯片方法。根据Hexon基因序列设计特异引物,上游引物5'端加TAG序列,下游引物5'端加生物素,进行PCR扩增,将扩增产物与链霉素亲和蛋白、磁珠37℃孵育30 min,通过Luminex200仪器分析。用所建立的液相基因芯片方法进行特异性、灵敏度、重复性及病料样品的检测。结果该方法的特异性强;检测的敏感性可达1×102copies/μL;批内批间的变异系数都在5%以下;检测结果与SYBR Green I荧光PCR方法 100%相符。表明建立的液相基因芯片方法特异性好、灵敏高、重复性好,可用于I群禽腺病毒的检测。; 关键词 Ⅰ群禽腺病毒(AAV) Hexon基因液相基因芯片; Keywords Aviadenovirus group Ⅰ Hexon magnetic beads suspension array; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名实时荧光定量TaqMan-PCR检测小鼠多瘤病毒方法的建立被引量：2: 3; 作者尹雪琴袁文王静黄碧洪饶丹伍妙梨朱余军冯胜鹏郭鹏举张钰黄韧; 机构广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所; 出处《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期53-58,共6页; 基金国家科技支撑计划(编号:2013BAK11B01) 广东省科技计划项目(编号:2012B010300026); 文摘目的建立一种快速、特异、敏感的小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus,MPyV)荧光定量TaqMan PCR检测方法,用于MPyV核酸的检测。方法根据GenBank中小鼠多瘤病毒基因组序列设计了一对特异性引物及TaqMan探针,扩增长度为69 bp的片段,通过优化反应体系和反应条件,对构建的重组质粒标准品进行检测,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。最后用建立的方法对人工感染MPy V的肺脏、脾脏和粪便,及86份小鼠临床样本进行检测,验证在临床应用中的效果。结果所建立的检测方法特异性强,只能在小鼠多瘤病毒DNA中检出荧光信号,检测灵敏度达到100拷贝,批内和批间重复性好,检测结果变异系数(CV)均小于1.13%,人工感染MPyV小鼠的肺脏、脾脏和粪便均为阳性,对86份临床样本进行检测,有3份样本呈阳性(阳性率为3.5%)。结论建立的MPyV荧光定量TaqMan-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适合用于MPyV临床诊断、日常监测和流行病学调查。; 关键词小鼠多瘤病毒实时荧光定量PCR TAQMAN探针; Keywords Murine polyomavirus Real-time fluorescence quantitative PCR TaqMan probe Mice; 分类号 R440 [医药卫生—诊断学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于重组酶聚合酶扩增技术的犬冠状病毒快速检测方法的建立被引量：2: 4; 作者陈坚张丹琳马磊伍妙梨; 机构广西柳州畜牧兽医学校广东省实验动物监测所; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期88-90,94,共4页; 文摘为建立一种快速、简便检测犬冠状病毒(CCoV)的方法,本试验基于犬冠状病毒M基因的保守区域设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了CCoV的重组酶聚合酶扩增检测方法(RT-RPA)。试验结果表明,所建立的RT-RPA方法在35℃恒温反应15 min即可检测出100个拷贝的体外转录RNA,且与犬的其他常见病毒,如犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒等,无非交叉反应,表明所建立的CCoV RT-RPA具有良好的特异性及较高的敏感性。使用RT-RPA对25份临床样品的检测结果显示,CCoV的检出率为48%(12/25),该结果与荧光定量PCR的检测结果完全一致。表明本试验所建立的CCoV RT-RPA检测方法操作简单、反应快速灵敏,适用于CCoV的快速检测。; 关键词犬冠状病毒 RT-RPA 快速检测; Keywords canine coronavirus RT-RPA rapid detection; 分类号 S852.655 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析: 5; 作者艾德宙韩艳辉洪炀熊雅念魏梅梅孟培培黄莉妮伍妙梨林矫矫傅志强; 机构中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第2期32-36,共5页; 基金上海市科委实验动物研究专项(12140902700); 文摘为解析日本血吸虫精氨酸酶的功能,本研究克隆了SjARG基因、长度为1095 bp,并将该基因克隆一到原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET-28a-SjARG,并在大肠杆菌中成功表达,Western blot显示重组蛋白具有良好的抗原性;通过酶活性分析显示,重组蛋白SjARG在添加Mn2+后活性得到提高,酶活性大小为502 U/mg,Km值为82.7mM。该研究结果为进一步深入研究该基因的表达特性、酶学性质以及候选疫苗分子研究方面提供了基础。; 关键词日本血吸虫精氨酸酶克隆和表达酶活性; Keywords Schistosoma japonicum arginase cloning expression enzymatic activity; 分类号 S852.735 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽脑脊髓炎病毒Luminex xTAG检测方法的建立被引量：1: 6; 作者张孟迪朱海波朱余军伍妙梨练月晓黄碧洪葛叶丛锋; 机构广东海洋大学滨海农业学院上海蛮蛮生物科技有限公司广东省实验动物监测所、广东省实验动物重点实验室; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第10期54-58,共5页; 基金国家重点研发计划(2021YFF0703300)。; 文摘为了建立一种灵敏快速检测禽脑脊髓炎病毒(AEV)的Luminex xTAG技术方法,本试验针对AEV高度保守的VP 1基因设计了1对特异性引物,在上游引物的5′端通过Spacer18间隔添加Tag序列,下游引物的5′端标记生物素,进行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,构建质粒标准品,通过优化反应体系建立Luminex xTAG检测方法。用所建立的Luminex xTAG方法进行特异性、敏感性和重复性试验,并与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法同时对45份脑组织临床样品进行检测。结果显示,所建立AEV Luminex xTAG检测方法与传染性法氏囊病毒、禽传染性贫血病病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、马立克病毒和禽传染性支气管炎病毒无交叉反应;灵敏度可达1×10^(2)copies/μL;批内和批间重复性试验的变异系数均小于4.0%;对45份临床样品的Luminex xTAG检测结果与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测结果一致。结果表明,所建立的AEV Luminex xTAG检测方法特异性好、灵敏度高、重复性和稳定性好,可用于AEV的快速检测。; 关键词禽脑脊髓炎病毒(AEV) Luminex xTAG 检测; Keywords avian encephalomyelitis virus(AEV) Luminex xTAG detection; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立	伍妙梨袁文饶丹王静朱余军尹雪琴黄韧郭鹏举	《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心	2015	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	Ⅰ群禽腺病毒液相基因芯片检测方法的建立	朱余军饶丹丛锋伍妙梨袁文王静练月晓黄碧洪徐凤娇刘助红尹雪琴黄韧张钰陈梅丽郭鹏举	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2017	7	在线阅读下载PDF 职称材料
3	实时荧光定量TaqMan-PCR检测小鼠多瘤病毒方法的建立	尹雪琴袁文王静黄碧洪饶丹伍妙梨朱余军冯胜鹏郭鹏举张钰黄韧	《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心	2015	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	基于重组酶聚合酶扩增技术的犬冠状病毒快速检测方法的建立	陈坚张丹琳马磊伍妙梨	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析	艾德宙韩艳辉洪炀熊雅念魏梅梅孟培培黄莉妮伍妙梨林矫矫傅志强	《中国动物传染病学报》 CAS	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	禽脑脊髓炎病毒Luminex xTAG检测方法的建立	张孟迪朱海波朱余军伍妙梨练月晓黄碧洪葛叶丛锋	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2023	1	在线阅读下载PDF 职称材料