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犀角地黄汤合银翘散通过PKC-SSeCKS通路抑制TNF-α诱导的肺微血管内皮细胞通透性增加
被引量：
6
1
作者
任睿芳
张舒
+3 位作者
李晓瑞
游雷鸣
吴珺
郝钰
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期871-876,共6页
目的:观察犀角地黄汤合银翘散(XDY)对TNF-α诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透性的影响及其与PKC-SSeCKS信号通路的关系,以探究该方治疗病毒性肺炎的作用环节和分子机制。方法:原代培养大鼠PMVEC,在Transwell小室上用电导法于不同...
目的:观察犀角地黄汤合银翘散(XDY)对TNF-α诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透性的影响及其与PKC-SSeCKS信号通路的关系,以探究该方治疗病毒性肺炎的作用环节和分子机制。方法:原代培养大鼠PMVEC,在Transwell小室上用电导法于不同时点监测TNF-α诱导的PMVEC跨内皮细胞单层电阻(TER)测定其通透性。不同的干预因素作用24 h后,检测PMVEC的TER、PKC活性、SSeCKS mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平,激光共聚焦显微镜观察PMVEC中SSeCKS的定位和F-actin的结构变化。结果:TNF-α作用24 h后PMVEC通透性达高峰;与对照组比较,TNF-α组TER降低,PKC活性增强;与TNF-α组比较,TNF-α加PKC抑制剂组和TNF-α加XDY含药血清组PKC活性降低,而TER升高且与对照组无差别。与对照组比较,TNF-α组SSeCKS的mRNA和蛋白表达升高;与TNF-α组比较,TNF-α加XDY含药血清组SSeCKS的mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平降低。对照组PMVEC中F-actin主要分布在细胞周边和核周,形成致密周围束,SSeCKS均匀散在分布于细胞中;TNF-α组细胞周边的F-actin致密束基本消失,SSeCKS集中分布于核周;TNF-α加含XDY含药血清组F-actin结构及SSeCKS的分布趋于正常。结论:犀角地黄汤合银翘散可以抑制TNF-α诱导的PMVEC PKC信号通路的激活,降低PKC结合底物SSeCKS的表达,最终影响肌动蛋白的变构、阻止内皮细胞变形而降低PMVEC的通透性。
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关键词
肺微血管内皮细胞
PKC-SSeCKS信号通路
TNF-α
犀角地黄汤合银翘散
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职称材料
稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定
被引量：
1
2
作者
李晓瑞
游雷鸣
+5 位作者
陈丹军
任睿芳
安辰
张海丽
吴珺
郝钰
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期398-402,共5页
目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型。方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RA...
目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型。方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RAWNKD。利用定量PCR检测RAWNKD细胞及其在LPS和ATP联合刺激下NLRP3基因的稳定抑制效果。结果:RAWNKD细胞GFP标记的阳性率在80%以上,NLRP3基因的抑制率超过90%,即使用LPS和ATP联合刺激NLRP3基因mRNA增加也不明显。结论:成功建立了NLRP3基因稳定敲低的小鼠巨噬细胞系,这种NLRP3炎性体缺损的巨噬细胞是探究NLRP3炎性体活化途径及其介导的炎症信号转导的有力工具。
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关键词
NLRP3炎性体
巨噬细胞
基因敲低
SHRNA
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职称材料
题名
犀角地黄汤合银翘散通过PKC-SSeCKS通路抑制TNF-α诱导的肺微血管内皮细胞通透性增加
被引量：
6
1
作者
任睿芳
张舒
李晓瑞
游雷鸣
吴珺
郝钰
机构
北京中医药大学基础医学院
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期871-876,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81573723)
教育部博士点博导类基金资助项目(No.20130013110010)
文摘
目的:观察犀角地黄汤合银翘散(XDY)对TNF-α诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透性的影响及其与PKC-SSeCKS信号通路的关系,以探究该方治疗病毒性肺炎的作用环节和分子机制。方法:原代培养大鼠PMVEC,在Transwell小室上用电导法于不同时点监测TNF-α诱导的PMVEC跨内皮细胞单层电阻(TER)测定其通透性。不同的干预因素作用24 h后,检测PMVEC的TER、PKC活性、SSeCKS mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平,激光共聚焦显微镜观察PMVEC中SSeCKS的定位和F-actin的结构变化。结果:TNF-α作用24 h后PMVEC通透性达高峰;与对照组比较,TNF-α组TER降低,PKC活性增强;与TNF-α组比较,TNF-α加PKC抑制剂组和TNF-α加XDY含药血清组PKC活性降低,而TER升高且与对照组无差别。与对照组比较,TNF-α组SSeCKS的mRNA和蛋白表达升高;与TNF-α组比较,TNF-α加XDY含药血清组SSeCKS的mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平降低。对照组PMVEC中F-actin主要分布在细胞周边和核周,形成致密周围束,SSeCKS均匀散在分布于细胞中;TNF-α组细胞周边的F-actin致密束基本消失,SSeCKS集中分布于核周;TNF-α加含XDY含药血清组F-actin结构及SSeCKS的分布趋于正常。结论:犀角地黄汤合银翘散可以抑制TNF-α诱导的PMVEC PKC信号通路的激活,降低PKC结合底物SSeCKS的表达,最终影响肌动蛋白的变构、阻止内皮细胞变形而降低PMVEC的通透性。
关键词
肺微血管内皮细胞
PKC-SSeCKS信号通路
TNF-α
犀角地黄汤合银翘散
Keywords
Pulmonary microvascular endothelial cells
PKC-SSeCKS signaling pathway
TNF-α
Xijiao Di-huang decoction combined with Yinqiao powder
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定
被引量：
1
2
作者
李晓瑞
游雷鸣
陈丹军
任睿芳
安辰
张海丽
吴珺
郝钰
机构
北京中医药大学生命科学学院免疫学与微生物学系
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期398-402,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81573723)
北京中医药大学基本科研业务费项目(2016-JYB-JSMS-004)
文摘
目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型。方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RAWNKD。利用定量PCR检测RAWNKD细胞及其在LPS和ATP联合刺激下NLRP3基因的稳定抑制效果。结果:RAWNKD细胞GFP标记的阳性率在80%以上,NLRP3基因的抑制率超过90%,即使用LPS和ATP联合刺激NLRP3基因mRNA增加也不明显。结论:成功建立了NLRP3基因稳定敲低的小鼠巨噬细胞系,这种NLRP3炎性体缺损的巨噬细胞是探究NLRP3炎性体活化途径及其介导的炎症信号转导的有力工具。
关键词
NLRP3炎性体
巨噬细胞
基因敲低
SHRNA
Keywords
NLRP3 inflammasome
Macrophages
Gene knockdown
shRNA
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
犀角地黄汤合银翘散通过PKC-SSeCKS通路抑制TNF-α诱导的肺微血管内皮细胞通透性增加
任睿芳
张舒
李晓瑞
游雷鸣
吴珺
郝钰
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
6
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职称材料
2
稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定
李晓瑞
游雷鸣
陈丹军
任睿芳
安辰
张海丽
吴珺
郝钰
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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