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微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定
1
作者 任保彦 陈玉兰 +7 位作者 宫鹏涛 李巍 李建华 苏利波 李赫 杨举 刁玉梅 张西臣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1140-1144,共5页
本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,I... 本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。用原核表达蛋白免疫小鼠,制备抗重组蛋白多抗,对蛋白进行定位。结果表明成功扩增出CP21基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25 ku的融合蛋白,Western blotting证明表达的CP21融合蛋白能与抗C.parvum多克隆抗体产生特异性反应。免疫荧光结果表明:CP21基因在子孢子和卵囊期均表达,且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面。CP21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白。研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 CP21 黏附相关蛋白 原核表达 免疫荧光定位
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冷应激条件下猪脂肪组织中脂联素及其受体mRNA水平的表达变化 被引量：2
2
作者 付守鹏 任保彦 +10 位作者 刘颖 李苏楠 李洋 王茂鹏 杨占清 魏利斌 李志强 柳巨雄 王玮 郭斌 胡仲明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期28-32,共5页
为了研究冷应激对脂肪代谢的影响,本试验分别在-15～-10℃、-10～-5℃、-5～0℃、15～18℃温度条件下采取猪颈部、背部皮下和内脏系膜脂肪组织,通过荧光定量RT-PCR方法检测脂联素及其受体mRNA的表达水平。结果显示,随着冷应激强度的逐... 为了研究冷应激对脂肪代谢的影响,本试验分别在-15～-10℃、-10～-5℃、-5～0℃、15～18℃温度条件下采取猪颈部、背部皮下和内脏系膜脂肪组织,通过荧光定量RT-PCR方法检测脂联素及其受体mRNA的表达水平。结果显示,随着冷应激强度的逐渐加大,在颈部、背部皮下、内脏系膜Adiponectin mRNA的表达量逐渐降低,差异显著(P<0.05);内脏系膜中AdipoR 1和AdipoR 2mRNA表达量先逐渐升高后恢复正常,且差异极显著(P<0.01);背部皮下AdipoR 2mRNA表达量先逐渐降低后恢复正常,差异极显著(P<0.01),AdipoR 1mRNA表达量没有明显变化;颈部皮下AdipoR 2mRNA的表达量先逐渐升高后恢复正常,差异极显著(P<0.01),AdipoR 1mRNA的表达量先升高后恢复正常,而后又升高,差异极显著(P<0.01)。结果表明,脂联素及其受体参与冷应激过程,它们可能与冷应激条件下脂肪组织的重新分布有重要的关系。 展开更多
关键词 冷应激 脂联素 脂联素受体1 脂联素受体2
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刚地弓形虫RH株SAG3蛋白抗体检测的ELISA方法建立 被引量：2
3
作者 马亮 任保彦 +5 位作者 左绍志 宫鹏涛 李建华 张国才 杨举 张西臣 《安徽农业科学》 CAS 2012年第15期8527-8528,8550,共3页
[目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、... [目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、鼠抗蓝氏贾第虫阳性血清以及鼠抗微小隐孢子虫阳性血清和健康小鼠阴性血清作对照,检测血清之间是否有交叉反应。[结果]最佳包被条件为:抗原包被浓度0.25μg/孔,被检血清稀释度1∶400,酶标二抗稀释度1∶3 000,封闭剂5%脱脂奶粉的PBST溶液;血清之间没有交叉反应。该方法的灵敏度为1∶1 600。[结论]该方法灵敏度高,特异性较强,可重复性较好,可用于对弓形虫感染的检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 SAG3 表面蛋白 间接ELISA
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