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小分子组合诱导大鼠胚胎成纤维细胞重编程为功能性神经元
1
作者
高群伟
代振佳
+2 位作者
杨新康
刘长青
刘高峰
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期498-508,共11页
目的:建立通过小分子化合物将大鼠胚胎成纤维细胞(REF)重编程为化学诱导神经元(ciNC)的方法体系,为细胞移植治疗神经退行性疾病提供安全有效的供体细胞。方法:以裴钢研究团队建立的人成纤维细胞直接重编程为神经元的方法为基础,通过更...
目的:建立通过小分子化合物将大鼠胚胎成纤维细胞(REF)重编程为化学诱导神经元(ciNC)的方法体系,为细胞移植治疗神经退行性疾病提供安全有效的供体细胞。方法:以裴钢研究团队建立的人成纤维细胞直接重编程为神经元的方法为基础,通过更换包被液、缓解氧化应激损伤、添加神经源性保护因子、调整毛喉素浓度和小分子去除实验对诱导培养基和成熟培养基进行优化,并通过免疫荧光法和蛋白质印迹法验证不同诱导阶段细胞的相关蛋白质。结果:以原方案进行诱导时,细胞存活率仅(34.24±2.77)%。包被液更换为基质胶后,细胞存活率上升到(45.41±4.27)%;添加褪黑素后细胞存活率提高至(67.95±5.61)%,(23.43±1.42)%的细胞转变为神经样细胞;添加小分子P7C3-A20后细胞存活率进一步提升至(76.27±1.41)%,(39.72±4.75)%的细胞转变为神经样细胞;毛喉素浓度提升至30μmol/L时,神经样细胞比例达到(55.79±1.90)%;去除SP600125后,(86.96±2.15)%细胞存活,神经样细胞生成率提高至(63.43±1.60)%。以优化后的方案诱导,可经过神经前体细胞将REF诱导为ciNC。其中,神经前体细胞能够高表达神经前体细胞标志物SRY-box转录因子2、配对盒6以及神经元特异性标志物Ⅲ类β-微管蛋白,而成纤维相关蛋白波形蛋白表达量减少。神经前体细胞在成熟培养基中诱导两周后,可见大部分细胞呈神经样细胞形态,诱导后的ciNC高表达Ⅲ类β-微管蛋白和微管相关蛋白2,而成纤维相关蛋白波形蛋白表达减少。结论:优化后的小分子组合在常氧条件下能将REF重编程为ciNC。
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关键词
体细胞重编程
小分子化合物
胚胎成纤维细胞
化学诱导神经元
大鼠
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职称材料
题名
小分子组合诱导大鼠胚胎成纤维细胞重编程为功能性神经元
1
作者
高群伟
代振佳
杨新康
刘长青
刘高峰
机构
蚌埠医科大学生命科学学院
蚌埠医科大学安徽省神经再生技术与医用新材料工程研究中心
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期498-508,共11页
基金
国家自然科学基金(82371382,81771381)
安徽省重点研究与开发计划(2022e07020030,2022e07020032)
+4 种基金
安徽省自然科学基金(2308085MH256)
蚌埠医学院重大科技项目孵育计划(2021byfy002)
国家级大学生创新创业训练项目(202210367019,202310367005)
安徽省大学生创新创业项目(S202210367144)
蚌埠医学院研究生科研创新计划(Byycx22003)。
文摘
目的:建立通过小分子化合物将大鼠胚胎成纤维细胞(REF)重编程为化学诱导神经元(ciNC)的方法体系,为细胞移植治疗神经退行性疾病提供安全有效的供体细胞。方法:以裴钢研究团队建立的人成纤维细胞直接重编程为神经元的方法为基础,通过更换包被液、缓解氧化应激损伤、添加神经源性保护因子、调整毛喉素浓度和小分子去除实验对诱导培养基和成熟培养基进行优化,并通过免疫荧光法和蛋白质印迹法验证不同诱导阶段细胞的相关蛋白质。结果:以原方案进行诱导时,细胞存活率仅(34.24±2.77)%。包被液更换为基质胶后,细胞存活率上升到(45.41±4.27)%;添加褪黑素后细胞存活率提高至(67.95±5.61)%,(23.43±1.42)%的细胞转变为神经样细胞;添加小分子P7C3-A20后细胞存活率进一步提升至(76.27±1.41)%,(39.72±4.75)%的细胞转变为神经样细胞;毛喉素浓度提升至30μmol/L时,神经样细胞比例达到(55.79±1.90)%;去除SP600125后,(86.96±2.15)%细胞存活,神经样细胞生成率提高至(63.43±1.60)%。以优化后的方案诱导,可经过神经前体细胞将REF诱导为ciNC。其中,神经前体细胞能够高表达神经前体细胞标志物SRY-box转录因子2、配对盒6以及神经元特异性标志物Ⅲ类β-微管蛋白,而成纤维相关蛋白波形蛋白表达量减少。神经前体细胞在成熟培养基中诱导两周后,可见大部分细胞呈神经样细胞形态,诱导后的ciNC高表达Ⅲ类β-微管蛋白和微管相关蛋白2,而成纤维相关蛋白波形蛋白表达减少。结论:优化后的小分子组合在常氧条件下能将REF重编程为ciNC。
关键词
体细胞重编程
小分子化合物
胚胎成纤维细胞
化学诱导神经元
大鼠
Keywords
Somatic reprogramming
Small molecule compound
Embryo fibroblast
Chemically induced neurons
Rats
分类号
Q28 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小分子组合诱导大鼠胚胎成纤维细胞重编程为功能性神经元
高群伟
代振佳
杨新康
刘长青
刘高峰
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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