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暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps1的克隆及表达分析 被引量:7
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作者 乌木提·巴合提别克 唐玉倩 +2 位作者 王淑婷 李亚伟 邹莉 《森林工程》 北大核心 2021年第4期33-39,46,共8页
倍半萜(Sesquiterpenes)在动植物及微生物体内广泛存在,且具有重要的生理调节功能。本研究从暴马桑黄转录组数据库中筛选出1个编码暴马桑黄萜类合酶的基因,命名为SbTps1,并对其进行克隆及表达分析,经测序该基因全长1281 bp,编码426个氨... 倍半萜(Sesquiterpenes)在动植物及微生物体内广泛存在,且具有重要的生理调节功能。本研究从暴马桑黄转录组数据库中筛选出1个编码暴马桑黄萜类合酶的基因,命名为SbTps1,并对其进行克隆及表达分析,经测序该基因全长1281 bp,编码426个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为48.17 ku。SDS-PAGE分析结果表明,在相对分子质量69.17 ku(包含21 ku标签蛋白)附近出现与预期大小一致的蛋白条带。系统发育进化树分析表明,暴马桑黄SbTps1蛋白和嗜蓝孢孔菌Tps蛋白同源性最高;荧光定量分析结果表明,SbTps1基因转录水平在不同发育阶段有差异性,并且在菌丝发酵培养第14天时SbTps1基因转录水平达到最高状态,该结果与鲍姆纤孔菌(Inonotus baumii)倍半萜合酶基因的转录水平变化趋势相似,因此可以推测SbTps1与倍半萜合成有关,初步鉴定该基因为倍半萜合酶基因,为后续暴马桑黄倍半萜合酶基因功能的研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 暴马桑黄 倍半萜 倍半萜合酶基因 基因克隆与序列分析 原核表达 荧光定量
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暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps2克隆及其响应茉莉酸甲酯的表达分析
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作者 乌木提·巴合提别克 李亚伟 +2 位作者 佟鑫宇 朱丽颖 邹莉 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期158-167,共10页
【目的】对参与暴马桑黄Sanghuangporus baumii倍半萜合成途径的关键基因SbTps2及其启动子进行克隆和生物信息学分析,并解析不同浓度MeJA对该基因表达的影响。【方法】利用PCR扩增技术克隆暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps2 cDNA全长和启动... 【目的】对参与暴马桑黄Sanghuangporus baumii倍半萜合成途径的关键基因SbTps2及其启动子进行克隆和生物信息学分析,并解析不同浓度MeJA对该基因表达的影响。【方法】利用PCR扩增技术克隆暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps2 cDNA全长和启动子序列;用SWISS-MODEL、SignalP-3.0和SOPMA等软件对SbTps2基因和SbTps2启动子序列进行生物信息学分析;以暴马桑黄为试验材料,利用实时荧光定量技术,对不同浓度MeJA诱导下SbTps2基因相对表达量进行了比较分析。【结果】经测序,SbTps2基因全长1227 bp,编码407个氨基酸,蛋白分子量为45.73 kDa。根据暴马桑黄基因组已知的序列,并结合SbTps2基因cDNA测序结果分析基因的外显子和内含子表明,SbTps2基因包含3个外显子(核苷酸0~527 bp、592~898 bp和953~1348 bp)和两个内含子(528~591 bp和899~952 bp);SbTps2蛋白无跨膜结构与信号肽,该蛋白为亲水性不稳定蛋白。系统发育进化树分析结果表明,SbTps2蛋白与已报道的倍半萜合酶基因聚为一支;SbTps2启动子(1220 bp)生物信息学分析结果表明,它含有典型的启动子元件,如CAAT-box、TATA-box和MeJA等其他反应元件。荧光定量分析结果表明,SbTps2基因转录水平在不同浓度MeJA诱导时有差异性,并且在MeJA诱导浓度为200μM时SbTps2基因转录水平达到最高状态。【结论】通过对SbTps2基因的克隆与表达分析,为后续暴马桑黄倍半萜合酶基因功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 暴马桑黄 倍半萜合酶基因 基因克隆 启动子克隆 MEJA 诱导表达
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暴马桑黄ras基因启动子的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 乌木提·巴合提别克 王淑婷 +1 位作者 唐玉倩 邹莉 《林业科技》 2021年第2期22-26,共5页
以暴马桑黄(Sanghuangporus baumii)菌丝体提取的DNA为模板,采用PCR扩增技术,克隆得到ras基因启动子片段,并采取在线软件对其功能元件进行分析,结果显示:克隆得到的ras基因启动子片段含有典型启动子所具备的作用元件TATA-box和CAAT-box... 以暴马桑黄(Sanghuangporus baumii)菌丝体提取的DNA为模板,采用PCR扩增技术,克隆得到ras基因启动子片段,并采取在线软件对其功能元件进行分析,结果显示:克隆得到的ras基因启动子片段含有典型启动子所具备的作用元件TATA-box和CAAT-box,还有许多其他重要作用元件G-box、CAG-motif、GATA-motif、MBS、TC-rich repeats等;并预测786-836 bp是核心启动子区概率最高(0.97),且认为在826 bp处碱基T为转录起始位点;除此之外,在ras基因启动子片段中预测到多个转录因子结合位点和1个长588 bp的Cp G岛,初步判断克隆得到的ras基因启动子具备调控外源基因表达的能力。 展开更多
关键词 暴马桑黄 ras基因启动子 克隆 序列分析
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暴马桑黄ERG6基因克隆及不同发育时期差异表达 被引量:3
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作者 佟鑫宇 乌木提·巴合提别克 +3 位作者 李亚伟 朱丽颖 杜鹏禹 邹莉 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期144-152,共9页
【目的】对参与暴马桑黄麦角甾醇合成途径的关键基因—C-24甾醇甲基转移酶基因(ERG6)进行克隆及差异表达,探究ERG6基因在暴马桑黄麦角甾醇生物合成途径中的作用,为通过生物技术手段获得麦角甾醇高产菌株提供理论依据。【方法】采用PCR... 【目的】对参与暴马桑黄麦角甾醇合成途径的关键基因—C-24甾醇甲基转移酶基因(ERG6)进行克隆及差异表达,探究ERG6基因在暴马桑黄麦角甾醇生物合成途径中的作用,为通过生物技术手段获得麦角甾醇高产菌株提供理论依据。【方法】采用PCR扩增技术克隆暴马桑黄ERG6基因cDNA全长并进行序列分析,采用SDS-PAGE检测暴马桑黄ERG6基因原核表达情况。克隆ERG6启动子序列,利用生物信息学软件进行分析。采用qRT-PCR技术分析不同发育阶段下暴马桑黄ERG6基因的转录水平。采用分光光度计法测定不同发育阶段暴马桑黄麦角甾醇含量。【结果】成功克隆得到ERG6基因c DNA全长,SDS-PAGE检测结果表明ERG6基因能够在原核系统成功表达出目的蛋白且目的蛋白表达量显著高于其他蛋白,同时发现随着诱导时间的增加,蛋白表达量也逐渐增加,生物信息学分析发现该基因全长996 bp,编码331个氨基酸,不具有信号肽和跨膜结构,具有42个潜在的磷酸化位点。启动子序列分析结果显示,ERG6启动子具有1个核心启动区和4种可能参与基因调控的转录因子,除具备典型启动子功能元件,还具有茉莉酸甲酯、赤霉素和脱落酸等多种响应元件。荧光定量及麦角甾醇含量测定结果显示,在暴马桑黄不同发育阶段,ERG6基因表达情况和麦角甾醇含量变化趋势呈正相关。【结论】ERG6基因在暴马桑黄麦角甾醇的生物合成中起正向调控作用,结果可为培育暴马桑黄麦角甾醇高产菌株奠定理论基础。 展开更多
关键词 暴马桑黄 C-24甾醇甲基转移酶 基因克隆 启动子克隆 麦角甾醇
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